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目 录 1

译者的话………………………………………………… i序言…………………………………………………………iii第一部分概论第一章生物化学研究的一般原理 1

1.1 引言 1

1.2 pH和缓冲液 2

1.2.1pH对生物学过程的影响 2

3.11.3空心纤维的分离 1 4

1.2.2生物学研究中所用的缓冲液 4

1.2.3受pH影响的氨基酸和蛋白质的离子化 6

4.3.3操作过程 11 7

1.3生物化学研究的途径 9

1.4整体动物的研究 12

1.5等渗盐溶液 16

1.6分离器官的灌注法 17

1.7器官和组织切片技术 18

1.8植物材料的使用 18

1.9组织和细胞培养技术 19

1.10细胞分级分离实验指导 21

1.10.1组织和细胞匀浆的制备 22

4.4.2幕式（连续）电泳 1 22

1.10.2悬浮介质的选择 23

1.10.3裂解组织和细胞的方法 24

参考读物 27

2.1原理 29

第二部分分离方法 29

第二章离心技术（由A.Griffiths编写） 29

2.2制备性离心 32

2.2.1差级离心 32

2.2.2分级区带离心 35

2.2.3等密度离心 35

2.2.4平衡等密度离心 37

2.3梯度的制备和取出 37

2.3.1梯度的性质 37

2.3.2不连续的或者分层的密度梯度技术 38

2.3.3连续的密度梯度技术 38

2.4制备离心机及其应用 39

2.3.4从离心管中取出梯度溶液 39

2.5.1 角式和水平式转头 40

2.5转头的设计 40

2.5.2连续运转的转头 41

2.5.3 Anderson或区带转头 41

5.2.1仪器装置 1 42

2.6亚细胞部分的分析 44

2.7差级离心分级分离结果的表示 45

5.2.2应用 1 47

2.8分析性超速离心 47

2.9.1分子量的测定 50

2.9分析性超速离心的应用 50

2.9.2大分子纯度的估价 52

2.9.3检测大分子中构象的变化 53

参考读物 53

5.3.2仪器装置 1 55

5.3.1原理 1 55

第三章层析技术（由B.L.Williams编写） 55

3.1层析的一般原理 55

3.2.1原理 58

3.2吸附层析 58

3.2.2柱层析 59

3.2.3薄层层析（t.l.c.） 60

5.4.3应用 1 61

3.3分配层析 64

3.3.1 纸层析 64

5.6.4火焰分光光度法的应用 1 66

3.4.1原理 67

3.4逆流分溶 67

3.3.2分配柱层析 67

5.7.1原理 1 68

3.4.2装置 70

5.8.1原理 1 71

3.5气－液层析（g.l.c.） 71

3.5.1原理 71

3.4.3应用 71

3.5.2固体支持物 73

3.5.3固定相 73

3.5.4柱的性能 74

3.5.5检测系统 75

3.5.6保留值与定性分析 76

5.9.2仪器装置 1 76

3.5.7加样 76

3.5.9样品的转化 77

3.5.8定量分析 77

3.6.1原理 78

3.6离子交换层析 78

3.5.10制备性气－液层析 78

3.6.2离子交换柱层析 81

6.1.2原子的稳定性和放射性 1 82

3.6.3离子交换纸层析 84

3.7通透层析 84

3.7.1原理 84

6.1.6放射性的单位 1 85

3.7.2通透层析的材料 85

3.7.3凝胶过滤的理论 88

3.7.4凝胶过滤的实验技术 89

3.7.6通透层析的应用 91

3.7.5薄层凝胶过滤（t.l.g.） 91

3.8.1原理 92

3.8亲和层析 92

3.8.3配位体的选择及其与基质的联接 94

3.8.2不溶性基质的选择 94

3.8.4亲和柱的吸附和洗脱 95

3.8.5亲和层析的应用 96

3.9高压液体层析 97

3.10柱层析法的一般技术 97

3.10.1柱 97

3.10.2装柱 98

3.10.3加样 99

3.10.4洗脱 99

3.10.5梯度洗脱 100

3.10.6分部收集 100

3.11.1原理 102

3.10.7各部分的分析 102

3.11膜和空心纤维分离法 102

3.11.2膜分离 103

参考读物 105

4.1前言 106

第四章 电泳技术（由M.G.Davis和I.Simpkins编写） 106

4.2.2电场 108

4.2.1 样品 108

4.2影响迁移率的因素 108

4.2.3缓冲液 109

4.2.4支持介质 111

4.3.1装置 112

4.3一般技术 112

4.3.2支持介质的制备和特性 113

4.4.1高压电泳 120

4.4特殊技术 120

4.4.3不连续的（圆盘）电泳 123

4.4.4免疫电泳 127

4.4.5等电聚焦 128

4.4.6等速电泳 129

4.5电泳的应用 130

参考读物 131

第二部分补遗 132

第三部分分析方法 136

5.1.1辐射，能量和原子结构 136

5.1基本原理 136

第五章光谱技术（由D.H.Burrin编写） 136

5.1.2光谱类型及其生化用途 138

5.1.3光吸收的基本定律 140

5.2可见光和紫外光分光光度法 141

5.3萤光光谱测量法 155

5.3.3萤光法与吸收分光光度法相比的优缺点 157

5.3.4 应用 157

5.4红外分光光度法 158

5.4.1 原理 159

5.4.2仪器装置 159

5.5Raman分光光度法 161

5.6.1 原理 162

5.6火焰分光光度法 162

5.6.2原子发射分光光度法的仪器装置 163

5.6.3原子吸收分光光度法的仪器装置 166

5.6.5原子萤光光谱光度法 167

5.7 电子自旋共振波谱法 168

5.7.2仪器装置 169

5.7.3应用 170

5.8核磁共振波谱法 171

5.8.2仪器装置 173

5.8.3应用 174

5.9.1原理 175

5.9 质谱法 175

5.9.3应用 178

5.10光谱技术总结表 180

参考读物 180

第六章放射性同位素技术（由K.H.Goulding编写） 181

6.1放射性的本质 181

6.1.1原子结构 181

6.1.3放射性衰变的类型 182

6.1.4放射性衰变的能量 183

6.1.5放射性衰变率 184

6.1.7射线与物质的相互作用 186

6.2放射性的探测和测量 188

6.2.1绝对计数还是相对计数？ 188

6.2.2利用气体电离的方法 188

6.2.3利用激发的方法 193

6.2.4利用照相乳胶曝光法 204

6.3 放射性计数和数据分析的实用方面 204

6.3.1本底计数 204

6.3.2死时间 205

6.3.3半衰期 205

6.3.4几何学因素 205

6.3.5 自吸收 205

6.3.6统计学 206

6.5生物科学中放射性同位素的应用 207

6.4放射性示踪实验所具有的优点 207

6.5.1代谢途径的研究 208

6.5.2在吸收和转移研究中放射性同位素的应用 209

6.5.3用放射性同位素来测定代谢周转期 209

6.5.4放射性同位素的临床应用 209

6.5.5放射性同位素的药理学应用 210

6.5.6同位素稀释分析法 210

6.5.7放射定年 211

6.5.8生态学研究中放射性同位素的应用 211

6.5.9在食物和设备的消毒中放射性同位素的应用 211

6.5.10用放射性同位素作为诱变剂 212

6.6安全方面 212

参考读物 213

6.7结论 213

第七章电位，电势和极谱测定技术（由M.R.Jenkins编写） 214

7.1 引言 214

7.2标准氢电极 215

7.3参考电极 216

7.4pH的测量 217

7.4.1玻璃电极 218

7.4.2 pH指示剂 221

7.4.3 pH稳定计 224

7.4.4用于动力学工作的灵敏pH计 226

7.5离子选择电极 226

7.6氧化还原电位 228

7.6.2氧化－还原指示剂 231

7.6.1氧化－还原反应的电位滴定 231

7.7极谱法 235

7.7.1电流滴定 238

7.8氧电极 238

7.8.1氧电极的类型 239

7.8.2 Rank电极操作方法 241

7.8.3氧电极的用途 241

7.9二氧化碳电极 243

参考读物 243

第八章测压技术（由K.Wilson编写） 245

8.1 引言 245

8.2测压法的类型 246

8.3.1仪器、操作和原理 247

8.3 Warburg定容测压计 247

8.3.2 Warburg测压计的校准 250

8.4 Gilson差示呼吸计 250

8.5 Warburg和Gilson测压法的操作方式 251

8.6测压法的应用 253

8.6.1测压法研究的范围 253

8.6.2组织切片和匀浆的研究 254

8.6.3呼吸商的测定 255

8.6.4代谢商的测定 259

8.6.5线粒体的研究 259

8.6.6光合作用的研究 260

参考读物 260

索引 261