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第一篇 常用生物化学实验技术及原理 1

第一章 实验的准确性 1

一、单位和量 1

(一) 基本单位 1

(二) 导出单位 2

(三) 词头 3

(四) 与SI并用的单位 3

(五) 摩尔和浓度 4

二、准确测量 5

(一) 误差来源 5

(二) 正态分布曲线 8

(三) 生物材料中数据的变化 10

(四) 容量玻璃仪器 11

三、实验报告 11

(一) 结果的记录 11

(二) 表格的图解 13

一、膜 17

第二章 透折 17

二、溶剂 18

三、物理条件 18

四、Donnan膜平衡 18

第三章 层析法 20

一、柱层析法的一般技术 21

二、几种常用的层析法 24

(一) 吸附层析 24

(二) 离子交换层析 25

(三) 分配层析 30

(四) 薄层层析 35

(五) 凝胶层析 37

第四章 电泳技术 43

一、电泳技术基本原理 44

(一) 电场强度(电势梯度) 45

(二) 溶液的pH值 46

(三) 溶液的离子强度 46

(四) 电渗现象 47

二、纸电泳 47

三、醋酸纤维薄膜电泳 48

四、琼脂凝胶电泳 49

五、聚丙烯酰胺凝胶电泳 50

第五章 分光光度法 60

一、原理 60

二、分光光度计的基本部件 63

(一) 光源 63

(二) 单色器 64

(四) 检测器 65

(三) 吸收池 65

(五) 测量装置 67

三、几种国产分光光度计的介绍 67

(一) 72型分光光度计 67

(二) 721型分光光度计 68

(三) 751G型分光光度计 69

第六章 放射性同位素技术 72

一、基本知识 72

(一) 同位素 72

(三) 放射性衰变的规律 74

(二) 射线的性质 74

(四) 放射性强度的单位 76

二、射线的探测 76

(一) 盖革计数器 77

(二) 闪烁计数器 77

三、放射自显影术 78

四、放射性同位素法的优缺点 79

一、基本原理 80

二、仪器的构造 80

第七章 Warburg氏呼吸计测压法 80

三、仪器使用的理论和操作要点 81

(一) 操作要点和计算方法 81

(二) 温压计 82

(三) 反应瓶体积的测定 83

第八章 实验样品的制备 86

一、组织样品 86

二、血液样品 88

二、尿液样品 88

实验一 总氮量的测定--凯氏定氮法 91

第二篇 学生实验 91

第九章 蛋白质的化学 91

实验二 氨基酸的分离鉴定--纸层析法 97

实验三 蛋白质的性质实验(一)--蛋白质及氨基酸的呈色反应 99

实验四 蛋白质的性质实验(二)--蛋白质的等电点测定和沉淀反应 109

实验五 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 116

实验六 酪蛋白的制备 119

实验七 甲醛滴定法测定氨基氮 121

实验八 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 124

第十章 核酸的化学 124

实验九 菜花(花椰菜)中核酸的分离和鉴定 126

实验十 醋酸纤维薄膜电泳分离核苷酸 130

实验十一 薄层层析法分离AMP、ADP和AIP 132

第十一章 酶 136

实验十二 酶的特性 136

实验十三 枯草杆菌蛋白酶活力测定 142

实验十四 底物浓度对酶促反应速度的影响--米氏常数的测定 145

实验十五 酶浓度对酶促反应速度的影响--用分光光度法测定碱性磷酸酶活性 148

实验十六 胰凝乳蛋白酶的制备及活力测定 152

第十二章 组织代谢 159

实验十七 肌糖原的酵解作用 159

实验十八 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 162

实验十九 血糖的定量测定--Hagedorn-Jensen二氏定糖法 165

实验二十 胰岛素对血糖浓度的影响 169

实验二十一 发酵过程中无机磷的利用 170

实验二十二 脂肪酸的β-氧化 173

实验二十三 精氨酸酶的作用 176

实验二十四 氨基移换反应(一)--血液中转氨酶活力的测定(分光光度法) 179

实验二十五 氨基移换反应(二)--谷丙转氨酶活性的测定(纸层析法) 182

第十三章 柱层析法的基本训练 186

实验二十六 用阳离子交换树脂摄取氯化钠 186

第三篇 演示实验 188

实验二十七 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳(血清蛋白的分离) 188

实验二十八 离子交换柱层析法分离氨基酸 193

实验二十九 凝胶过滤法测定蛋白质分子量 196

实验三十 血红蛋白的两性解离 200

实验三十一 紫外分光光度法测定核酸的含量 202

实验三十二 透折实验(一) 蛋白质的透析 204

实验三十三 透析实验(二) 糖类的透析 205

实验三十四 锂盐存在时蔗糖的燃烧 207

实验三十五 用铂和血液过氧化氢酶分解过氧化氢 207

实验三十六 肝组织耗氧量的测定 209

实验三十七 用碳酸钙分离菠菜的色素 212

实验三十八 吸附层析法分离叶子色素 213

实验三十九 用32P测定小麦幼苗根部的吸收功能 215

实验四十 小白鼠氨中毒 217

一、实验室规则 219

附录 219

二、实验室基本操作 220

(一) 玻璃仪器的洗涤 220

(二) 搅拌和振荡 221

三、常用仪器的使用 222

(一) 容量玻璃仪器的使用方法 222

(二) 台秤 225

(三) 光学天平 226

(四) 分光光度计 229

(五) 电动离心机 234

(六) 干燥箱和恒温箱 235

(七) 电热恒温水浴 237

(八) 电冰箱 237

(九) 酸度计 238

四、常用缓冲溶液的配制 241

(一) 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 242

(四) 磷酸盐缓冲液 243

(三) 醋酸-醋酸钠缓冲液 243

(二) 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 243

(五) 巴比妥钠-盐酸缓冲液 245

(六) Tris-盐酸缓冲液 245

(七) 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液 246

五、常用酸碱指示剂 246

六、常用酸碱试剂的浓度及比重 247

七、标准溶液的制备和标定 247

八、元素的原子量表 250

九、基础生物化学实验学生使用仪器清单(一组) 251