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第一章 总论 1

一、酶法分析原理 1

（一）酶是催化剂 1

（二）酶的专一性 2

（三）酶作为分析试剂 2

（四）酶的分类 3

（五）酶活性的定义 5

（六）同工酶 7

二、酶促反应的特性 8

（一）引言 8

（二）非酶催化反应的动力学 8

（三）均相反应体系的酶反应动力学 9

（四）预保温与滞后期 14

三、影响酶促反应的因素 15

（一）底物浓度的影响 15

（二）酶浓度的影响 16

（三）激活剂的影响 17

（四）抑制剂的影响 18

（五）温度的影响 21

（六）pH的影响 23

（七）离子强度的影响 24

四、酶法分析的意义 25

（一）作为临床化学的诊断方法 25

（二）用于食品加工与发酵 30

（三）其它方面 31

五、酶法分析的实验技术 31

（一）酶促反应中相关物质的浓度测定 31

（二）酶促反应测定方法 34

（三）生化试剂的处理 43

一般参考资料 45

参考文献 46

第二章 酶的测定 51

一、概述 51

二、醇脱氢酶 51

（一）概况 51

（二）测定方法 53

三、醛缩酶 53

（一）概况 53

（二）测定方法 54

四、D－氨基酸氧化酶 55

（一）概况 55

（二）测定方法 56

五、L－氨基酸氧化酶 58

（一）一般性质 58

（二）测定方法 59

六、α－淀粉酶 59

（一）一般性质 59

（二）测定方法 61

七、L－精氨酸酶 63

（一）一般性质 63

（二）测定方法 64

八、芳基硫酸酯酶 65

（一）概况 65

（二）测定方法 66

九、碳酸酐酶 66

（一）概况 66

（二）测定方法 67

十、过氧化氢酶 68

（一）概况 68

（二）测定方法 69

十一、胆碱酯酶 71

（一）概况 71

（二）测定方法 73

十二、α－胰凝乳蛋白酶 79

（一）概况 79

（二）测定方法 80

十三、肌酸激酶 82

（一）概况 82

（二）测定方法 84

十四、脱氧核糖核酸酶Ⅰ 87

（一）概况 87

（二）测定方法 88

十五、二胺氧化酶 88

（一）概况 88

（二）测定方法 89

十六、β－半乳糖苷酶 90

（一）概况 90

（二）测定方法 91

十七、葡糖氧化酶 93

（一）概况 93

（二）测定方法 94

十八、葡糖－6－磷酸脱氢酶 97

（一）概况 97

（二）测定方法 99

十九、磷酸葡糖异构酶 99

（一）概况 99

（二）测定方法 100

二十、β－葡糖苷酶 101

（一）概况 101

（二）测定方法 102

二十一、β－葡糖苷酸酶 104

（一）概况 104

（二）测定方法 105

二十二、谷－草转氨酶 106

（一）概况 106

（二）测定方法 108

二十三、谷－丙转氨酶 109

（一）概况 109

（二）测定方法 111

二十四、γ－谷氨酰转移酶 112

（一）概况 112

（二）测定方法 113

二十五、己糖激酶 114

（一）概况 114

（二）测定方法 116

二十六、α－羟丁酸脱氢酶 116

（一）概况 116

（二）测定方法 117

二十七、异柠檬酸脱氢酶 118

（一）概况 118

（二）测定方法 120

二十八、乳酸脱氢酶 121

（一）概况 121

（二）测定方法 124

二十九、亮氨酸氨肽酶 127

（一）概况 127

（二）测定方法 129

三十、脂酶 129

（一）概况 129

（二）测定方法 131

三十一、单胺氧化酶 134

（一）概况 134

（二）测定方法 135

三十二、胃蛋白酶 136

（一）概况 136

（二）测定方法 137

三十三、过氧物酶 138

（一）概况 138

（二）测定方法 139

三十四、酸性磷酸酯酶 141

（一）概况 141

（二）测定方法 142

三十五、碱性磷酸酯酶 143

（一）概况 143

（二）测定方法 144

三十六、丙酮酸激酶 148

（一）概况 148

（二）测定方法 150

三十七、山梨糖醇脱氢酶 150

（一）概况 150

（二）测定方法 152

三十八、胰蛋白酶 153

（一）概况 153

（二）测定方法 154

三十九、脲酶 155

（一）概况 155

（二）测定方法 156

四十、黄嘌呤氧化酶 157

（一）概况 157

（二）测定方法 159

参考文献 160

第三章 底物的测定 179

一、引言 179

二、乙醛 180

（一）概况 180

（二）以醇脱氢酶为试剂 180

（三）以醛脱氢酶为试剂 181

三、乙酸和乙酰磷酸 182

（一）概况 182

（二）以乙酸激酶作为乙酸或乙酰磷酸的检测试剂 182

（三）乙酸激酶和羟胺 183

（四）乙酸的其它检测方法 184

四、乙酰乙酸和D-3－羟基丁酸 185

（一）概况 185

（二）用D-3－羟基丁酸脱氢酶检测 186

五、乙酰胆碱和胆碱 188

（一）概况 188

（二）以胆碱激酶为试剂 188

（三）用乙酰CoA合成酶检测 190

（四）用醇脱氢酶检测乙酰胆碱 190

六、L－和D－丙氨酸 191

（一）概况 191

（二）用丙氨酸脱氢酶检测L－丙氨酸 191

（三）用GPT和LDH检测L－丙氨酸 192

（四）用D－氨基酸氧化酶和LDH检测D－丙氨酸 192

（五）D－丙氨酸的其它检测方法 193

七、胺——一般胺和组胺、精胺、精脒 193

（一）概况 193

（二）二胺氧化酶的应用 193

（三）单胺氧化酶的应用 194

（四）用单胺氧化酶（MAO）检测精胺和精脒 195

（五）用粘质赛氏杆菌来源的精胺氧化酶检测精脒 196

八、D－和L－氨基酸 197

（一）概况 197

（二）D－氨基酸（D－丙氨酸、D－甲硫氨酸、 198

D－苯丙氨酸、D－脯氨酸、D－色氨酸、D－酪氨酸和D－亮氨酸） 198

（三）用L－氨基酸氧化酶测定L－氨基酸：L－精氨酸、L－亮氨酸、L－甲硫氨酸、L－苯丙氨酸、L－脯氨酸、L－色氨酸和L－酪氨酸 199

（四）用L－氨基酸脱羧酶测定L－氨基酸：L－赖氨酸、L－酪氨酸、L－精氨酸、L－组氨酸、L－鸟氨酸、L－天冬氨酸和L－谷氨酸 201

（五）用酪氨酸酶检测L－酪氨酸 204

九、氨 204

（一）概况 204

（二）分析方法 205

十、L－天冬氨酸和L－天冬酰胺 206

（一）概况 206

（二）检测方法 206

十一、丁酸、2－羟基丁酸和γ－氨基丁酸（GABA） 207

（一）概况 207

（二）检测方法 207

十二、二氧化碳 210

（一）概况 210

（二）检测方法 211

十三、肉毒碱和乙酰肉毒碱 212

（一）概况 212

（二）用肉毒碱乙酰基转移酶检测肉毒碱 212

（三）乙酰肉毒碱的检测 213

十四、纤维素 213

（一）概况 213

（二）检测方法 214

十五、胆甾醇 215

（一）概况 215

（二）检测方法 215

十六、柠檬酸与异柠檬酸 217

（一）概况 217

（二）检测方法 217

十七、肌酸、肌酸酐和肌酸磷酸 220

（一）概况 220

（二）肌酸酐检测方法 221

（三）肌酸检测方法 222

（四）肌酸磷酸（CP）检测方法 223

十八、二羟丙酮和二羟丙酮磷酸 224

（一）概况 224

（二）二羟丙酮（DHA）检测方法 224

（三）二羟丙酮磷酸（DAP）检测方法 225

十九、乙醇、甲醇、烯丙醇、丙醇和 225

丁醇 225

（一）概况 225

（二）检测方法 226

二十、甲酸和四氢叶酸 229

（一）概况 229

（二）检测方法 229

二十一、果糖、果糖－1－磷酸和果糖－1，6－二磷酸 231

（一）概况 231

（二）用己糖激酶检测D－果糖 231

（三）用果糖激酶检测D－果糖 232

（四）糖类混合物的检测（包括D－果糖、D－乳糖、D－麦芽糖、D－葡萄糖、D－糖元及D－水杨苷）（五）果糖－1－磷酸和D－果糖－1,6－二磷酸（F-1,6-P）的检测 234

二十二、反丁烯二酸和苹果酸 236

（一）概况 236

（二）用苹果酸脱氢酶 237

（MDH）检测苹果酸 237

（三）用苹果酸脱氢酶 238

（MDH）和谷－草转氨酶（GOT）测定苹果酸 238

（四）用苹果酸脱氢酶 238

（MDH）、柠檬酸合成酶（CS）和磷酸转乙酰基酶（PTA）测定苹果酸 238

（五）反丁烯二酸和含有苹果酸的混合物的检测 239

二十三、D－半乳糖、α-D－半乳糖－1－磷酸和D－半乳糖－6－磷酸 239

（一）概况 239

（二）用半乳糖氧化酶检测半乳糖 240

（三）用半乳糖脱氢酶检测D－半乳糖 242

（四）通过水解为D－半乳糖检测α-D－半乳糖－1－磷酸和D－半乳糖－6－磷酸 243

（五）用尿苷酰转移酶检测半乳糖－1－磷酸 243

二十四、β-D－葡萄糖 244

（一）概况 244

（二）检测方法 246

二十五、葡糖－1－磷酸、葡糖－6－磷酸和果糖－6－磷酸 255

（一）概况 255

（二）葡糖－1－磷酸的检测 255

（三）葡糖－6－磷酸和果糖－6－磷酸的检测 256

二十六、D－葡糖酸和D－葡糖酸－6－磷酸 256

（一）概况 256

（二）D－葡糖酸和D－葡糖酸－6－磷酸的检测 256

二十七、D－葡糖胺和D－葡糖胺－6－磷酸 257

（一）概况 257

（二）D－葡糖胺的检测 257

（三）D－葡糖胺－6－磷酸的检测 258

二十八、L－谷氨酸和L－谷氨酰胺 259

（一）概况 259

（二）L－谷氨酸的检测 259

（三）L－谷氨酰胺的检测 261

二十九、甘油和甘油三酯 263

（一）概况 263

（二）甘油和二羟丙酮的检测 264

（三）用GK、PK和LDH检测甘油三酯与甘油 265

三十、D-甘油酸 267

（一）概况 267

（二）检测方法 268

三十一、糖元 269

（一）概况 269

（二）检测方法 269

三十二、乙醛酸（二羟乙酸） 271

（一）概况 271

（二）检测方法 271

三十三、透明质酸 272

（一）概况 272

（二）检测方法 272

三十四、肌醇和肌醇－1－磷酸 273

（一）概况 273

（二）检测方法 273

三十五、D－和L－乳酸 275

（一）概况 275

（二）用D-LDH检测D－乳酸 275

（三）用L-LDH检测L－乳酸 276

（四）用LDH和谷－丙转氨酶（GPT）检测L－乳酸（五）用酵母酶（Ⅳ型）测定L－乳酸 278

三十六、乳糖 279

（一）概况 279

（二）检测方法 279

三十七、卵磷脂（胆碱磷酸甘油三酯） 281

（一）概况 281

（二）检测方法 281

三十八、顺丁烯二酸 282

（一）概况 282

（二）检测方法 282

三十九、麦芽糖 283

（一）概况 283

（二）检测方法 283

四十、D－甘露糖、D－甘露糖－1－磷酸和D－甘露糖－6－磷酸 284

（一）概况 284

（二）检测方法 284

四十一、硝酸和亚硝酸 286

（一）概况 286

（二）用硝酸还原酶检测硝酸 288

（三）用亚硝酸还原酶检测亚硝酸 288

四十二、草酸 289

（一）概况 289

（二）检测方法 289

四十三、草酰乙酸和α－酮戊二酸 290

（一）概况 290

（二）草酰乙酸的检测 290

（三）α－酮戊二酸的检测 291

四十四、过氧化物 291

（一）概况 291

（二）检测方法 292

四十五、L－苯丙氨酸 293

（一）概况 293

（二）检测方法 294

四十六、磷酸和焦磷酸 295

（一）概况 295

（二）磷酸的检测 295

（三）焦磷酸的检测 297

四十七、丙酮酸、羟基丙酮酸、磷酸烯醇丙酮酸和D-2－磷酸甘油酸 298

（一）概况 298

（二）丙酮酸、磷酸烯醇丙酮酸和2－磷酸甘油酸的检测 299

（三）羟基丙酮酸的检测 299

四十八、棉籽糖、蜜二糖和蔗糖 300

（一）概况 300

（二）棉籽糖的检测 300

（三）蔗糖的检测 301

（四）蜜二糖的检测 302

四十九、D－山梨糖醇、L－艾杜糖醇和D－山梨糖醇－6－磷酸 302

（一）概况 302

（二）检测方法 303

五十、甾类化合物 304

（一）概况 304

（二）检测方法 305

五十一、脲 309

（一）概况 309

（二）检测方法 309

五十二、尿酸 312

（一）概况 312

（二）检测方法 312

五十三、黄嘌呤和次黄嘌呤 314

（一）概况 314

（二）检测方法 315

五十四、木糖醇 316

（一）概况 316

（二）检测方法 316

五十五、其它测定 317

参考文献 325

第四章 嘌呤、核苷酸、辅酶、激活剂和抑制剂的检测 351

一、概述 351

二、嘌呤、核苷酸和辅酶的检测 353

（一）引言 353

（二）腺嘌呤和鸟嘌呤 357

（三）腺苷 359

（四）腺苷－5′－二磷酸（ADP）和腺苷－5′－一磷酸（AMP） 359

（五）腺苷－5′－三磷酸（ATP） 361

（六）腺苷－5′－二磷酸葡糖（ADP－葡萄糖） 363

（七）胞苷和胞嘧啶 363

（八）胞苷－5′－一磷酸（C－5-MP）、胞苷－5′－二磷酸（CDP）和胞苷－5′－三磷酸（CTP）（九）辅酶A（CoA）及其衍生物 366

（十）黄素辅酶－黄素单核苷酸（FMN）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD） 369

（十一）鸟苷及其衍生物 371

（十二）肌苷及其衍生物 372

（十三）尼克酰胺辅酶的检测 374

（十四）尼克酰胺单核苷酸（NMN） 378

（十五）核酸（RNA和DNA） 379

（十六）吡哆醛－5－磷酸和吡哆胺－5－磷酸 379

（十七）尿苷磷酸及其二磷酸葡糖 380

三、辅助因子的再循环 381

四、根据对酶系统的激活作用测定无机物质 382

（一）引言 382

（二）钡的测定 384

（三）Ca2+和K+的测定 384

（四）镁和锰的测定 385

（五）Zn2+、Cu2+、Co2+和Ni2+的测定 386

（六）氧的测定 388

（七）氰化物、硫化物和碘化物的测定 388

五、根据对酶反应的抑制作用检测有机物质 388

（一）杀虫剂（有机磷化合物、氯化物以及氨基甲酸酯化合物）的检测 388

（二）肝素的检测 397

（三）抗坏血酸的检测 398

（四）和SH基结合的化合物的检测 398

（五）中性去污剂TritonX-100的检测 398

（六）其它化合物 398

六、根据对酶系统的抑制作用检测无机物质 399

（一）引言 399

（二）醇脱氢酶 400

（三）碱性磷酸酯酶 400

（四）葡糖氧化酶 403

（五）β－葡糖苷酶 403

（六）透明质酸酶 404

（七）转化酶 404

（八）异柠檬酸脱氢酶 405

（九）肝酯酶 406

（十）过氧物酶 406

（十一）脲酶 408

（十二）黄嘌呤氧化酶 408

参考文献 409

第五章 固定化酶及其在酶法分析中的应用 418

一、概述 418

二、固定化技术 419

（一）微型胶囊法 419

（二）吸附 420

（三）通过双功能试剂进行共价交联 420

（四）胶格包埋 421

（五）和水不溶性载体共价结合 421

三、固定化酶的性质 424

四、固定化酶的实验制备例 426

（一）聚丙烯酰胺包埋酶的制备 426

（二）共价偶联酶的制备 426

五、酶电极 430

（一）引言 430

（二）酶电极的制作 432

（三）电极的工作特性 438

（四）各种电极的比较 458

六、分析工作中应用的固定化酶柱 470

（一）引言 470

（二）电化学方法 470

（三）分光光度法 472

（四）热交换测定 474

七、固体表面荧光法 476

（一）引言 476

（二）实验 477

（三）方法 479

（四）硅橡胶衬垫法的优点 481

（五）用固定化酶检测某些重要底物 482

八、用于检测抑制剂的固定化酶系统 486

九、固定化酶搅拌器 488

参考文献 489

第六章 酶法自动化分析 499

一、总则 499

二、自动化分析的原理 501

（一）引言 501

（二）动力学方法 501

（三）各分析步骤的自动化 506

三、临床自动化仪器 507

（一）引言 507

（二）阿布特（Abbott）ABA-50型与-100型双波长分析仪 507

（三）美制1040型化学检测程序分析装置 515

（四）离心式分析仪 518

（五）鲍希（Bausch）与罗姆(Lomb)400—型分光光度检测系统 522

（六）脲氮与葡萄糖分析仪 523

（七）贝克曼（Beckman）系统TR型酶活性分析仪 525

（八）酶化学分析仪 527

（九）杜帮（Dupont）自动临床分析仪 528

（十）伊配道夫－布雷克曼(Eppendorf-Brink-man)KEA-5080型与EPA-5091型分析仪 529

（十一）吉尔福特（Gilford）3500型分析仪系（十二）海塞尔（Hycel）HMA1600型自动化仪 531

（十三）LKB超级分析系统（UltralabSystem） 531

（十四）潘金－爱尔迈（Per-kinElmer）柯尔曼（Coleman）淀粉酶－脂酶分析仪 535

（十五）潘金－爱尔迈KA-150与C4B型自动分析仪（十六）泰赫尼柯（Techni-con）仪器 539

（十七）托马氏（Thomas）小型化分析仪 546

（十八）维塔隆－阿克斯（Vitatron-Akes）分析仪 547

四、自动化仪的应用 549

参考文献 559

附录 592

各种酶分析测定综合一览表 592