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第一章绪论 1

目 录 1

一、简史 2

二、组织培养工作方法 5

第二章体外培养细胞 7

一、细胞类型 7

（一）贴附型 7

1．成纤维细胞型 8

2．上皮细胞型 8

（二）悬浮型 9

二、细胞形态结构 9

3．游走细胞型 9

4．多形性细胞型 9

三、细胞周期 13

（一）细胞周期和细胞分裂指数 14

（二）细胞周期和DNA合成 16

（三）有丝分裂 18

1．前期 18

2．中期 19

（一）染色体 20

四、细胞遗传学特征 20

3．后期 20

4．末期 20

（二）细胞性别 22

五、细胞生存条件和代谢 23

（一）生存条件 24

（二）细胞代谢 25

六、细胞死亡 31

第三章设备和装置 32

一、实验室 32

（一）准备室 33

（二）无菌室 34

1．无菌操作室 34

2．洁净工作台 35

3．无菌操作箱 35

（三）研究室 35

二、常备装置 36

（一）电热恒温培养箱 36

（六）真空泵 37

（五）离心机 37

（七）蒸馏器 37

（三）高压蒸汽消毒器 37

（二）电热干燥箱 37

（四）冰箱 37

（八）滤器 39

（九）洗涤器 39

（十）CO2恒温培养箱 39

（十一）旋转培养装置 40

（十二）液氮容器 40

（十三）显微镜 40

（二）玻璃器皿 41

2．培养瓶 41

1．玻璃瓶 41

（十四）天平 41

（一）器械 41

三、器械和器皿 41

（十五）其它 41

8．抽滤瓶 43

7．吸管 43

6．三角瓶 43

4培养管 43

3．卡氏瓶 43

5．培养皿 43

1．酒精灯 44

3．铝饭盒 44

2．煮沸锅 44

4．胶塞 44

（三）其它杂品 44

10．匀浆器 44

9．消毒筒 44

5．胶帽 45

6．金属架 45

第四章清洗与消毒 46

一、清洗 46

（一）玻璃器皿的清洗 46

1．清洗要领 46

2．清洗步骤 48

（二）塑料器皿的清洗 48

（三）滤器的清洗 48

二、消毒 49

（五）金属器械的清洗 49

1．玻璃滤器 49

2．蔡司滤器 49

（四）胶塞的清洗 49

（一）紫外线 50

（二）干热消毒 50

（三）湿热消毒 50

（六）煮沸消毒 51

（七）包装 51

（五）消毒剂 51

（四）滤过消毒 51

第五章培养用液 53

一、水和平衡盐溶液 54

（一）水 54

（二）平衡盐溶液 54

1．主要成分 54

2．BSS配制方法 55

3．注意事项 56

二、天然培养基 57

（一）血浆的制备 57

（二）鼠尾胶原的制备 58

（三）鸡胚浸出液的制备 60

（四）血清的制备 62

（五）血清代用品 64

三、合成培养液 65

（一）合成培养液种类 65

（二）合成培养液的主要成分 77

1．氨基酸 77

（三）合成培养液的配制 78

5．其它成分 78

4．无机盐 78

3．碳水化物 78

2．维生素 78

1．199培养液 79

2．Eagle培养液 84

3．RPMI 1640培养液 85

4．粉剂型培养基 87

四、其它常用液 87

（一）消化液 87

1．胰蛋白酶溶液 87

2．EDTA溶液 88

1．NaHCO3溶液 89

2．HEPES的使用 89

（三）抗菌素液 89

1．青、链霉素（双抗） 89

（二）pH调整液 89

（四）细菌培养基 90

1．肉浸液琼脂 90

3．制霉菌素 90

2．卡那霉素 90

2．血液琼脂 91

3．支原体培养基 91

（五）肝素抗凝剂 92

第六章细胞和组织培养技术方法 93

一、培养分类 93

二、要领和操作要求 94

（一）无菌操作 94

（二）取材 96

2．鼠肾或鼠胚组织 97

1．鸡胚组织 97

3．外科手术取材 98

4．取皮肤 98

5．取血 99

6．取骨髓、羊水和胸腹水 99

（三）组织分离 99

1．离心分离 99

2．切割分离 99

3．消化分离 100

4．计数分装法 102

（四）预防污染 104

三、常用培养法 104

（一）血浆加胎汁培养 104

1．悬滴培养法 105

2．卡氏瓶培养法 107

（二）合成培养基培养 108

1．单层细胞培养法 109

2．组织块培养法 112

3．血液培养法 114

4．旋转管培养法 115

5．悬液细胞培养法 116

（三）肿瘤细胞培养 117

1．肿瘤细胞培养法 119

2．肿瘤细胞的生物学特性 121

四、特殊培养法 122

（一）支持物培养法 122

（二）单细胞分离培养法 123

1．毛细管分离法 124

2．集落形成分离法 126

5．多孔塑料板分离法 127

4．盖片分离法 127

3．琼脂分离法 127

（三）灌流小室培养法 128

1．设计要求 128

2．常用灌流小室 128

五、细胞常规检查 130

六、细胞生物学检查和鉴定 134

（一）解剖学方面 134

（二）细胞生物学方面 135

1．中性缓冲福尔马林 140

（二）常用固定液 140

一、细胞和固定 140

（一）细胞培养 140

第七章细胞形态学和细胞化学观察法 140

2．Bo uin氏固定液 141

3．FAA固定液 141

4．Carnoy固定液 141

二、一般染色法 141

（一）苏木精－伊红（H.E.）染色 141

（二）Giemsa染色 142

（三）May-Grünwald-G:emsa染色 143

（四）火棉胶揭膜法 144

三、细胞化学法 145

（一）孚尔根反应显示DNA方法 145

1．原理 145

2．方法 146

3．结果 147

（二）甲绿－派郎宁显示DNA和RNA 147

1．原理 147

2．方法 147

2．方法 149

1．原理 149

3．结果 149

（三）吖啶橙荧光染色法显示DNA和RNA 149

3．结果 150

（四）2,2-2羟基－6,6-2萘基二硫化物（DDD）法显示硫氢基 150

1．原理 150

2．方法 150

3．结果 151

（五）多糖类的显示 151

1．原理 151

2．方法 152

1．原理 153

2．方法 153

3．结果 153

（六）苏丹黑B显示脂类 153

3．结果 154

（七）碱性磷酸酶的显示 154

1．原理 154

2．方法 155

2．方法 156

1．原理 156

（八）酸性磷酸酶的显示 156

3．结果 156

3．结果 157

（九）三磷酸腺苷酶（ATPase）显示法 157

1．原理 157

2．酸性ATP酶显示法 157

3．中性ATP酶显示法 158

4．碱性ATP酶显示法 159

1培养瓶细胞直接摄影 160

（一）活细胞显微摄影 160

四、活细胞观察法 160

2．活细胞相差显微摄影 162

（二）显微摄电影术 164

1．显微摄电影装置 165

2．暗室设施 165

3．拍摄用培养细胞准备 166

（三）缩时间隔时间 167

（二）技术方法 169

（一）原理 169

五、电子显微镜观察法 169

1．原位包埋法 170

2．脱钙卵壳膜包埋法 171

3．离心分离包埋法 174

第八章细胞生物学方法 175

一、性染色质检查法 175

（一）原理 175

（二）显示方法 175

1．X染色质显示法 175

2．Y染色质显示法 176

二、染色体显示法 177

（一）原理 177

1．刺激细胞增殖和获取中期分裂相 177

2．低张处理 178

3．固定 178

（二）常用显示染色体方法 178

1．传代细胞培养 178

2．微量周围全血白细胞培养法 180

3．羊水细胞培养 182

4．皮肤培养 183

（三）染色体显带 184

1．原理和要领 184

2．显Q带法 186

3．胰酶－Giemsa显G带法 186

4．显G带法之二 187

（四）姐妹染色单体分化染色 188

1．原理 188

2．方法 188

（一）原理 191

三、细胞融合法 191

3．注意事项 191

（二）方法 192

1．仙台病毒诱导细胞包融合法 192

2．聚乙二醇诱导细胞融合法 194

（三）杂种细胞的选择 195

1．HAT系统 197

2．亚硝基羟基丙氨酸－腺嘌呤系统及其它 199

3．细胞行为特性的选择 199

（四）染色体的分离 199

1．松胞菌素B 201

四、细胞脱核法 201

（一）原理 201

2．培养细胞用玻璃片或塑料片 202

3．垫圈 202

（二）脱核程序 203

1．细胞培养 203

2．离心脱核 203

3．分离 203

1．同位素标记物 204

2．标记 204

（一）原理 204

五、同位素标记自显影术 204

3．乳胶 205

（二）技术方法（脉冲式标记） 206

六、细胞同步化法 207

（一）分裂细胞脱离法 208

2．悬浮细胞 209

1．准备细胞 209

3．分离细胞 209

（三）离心分离同型细胞法 209

1．准备细胞 209

（二）秋水仙素阻抑法 209

2．阻抑分裂 209

3．分离培养 210

（四）胸腺嘧啶核苷双阻断法 210

1．TdR处理 210

2．离心 210

3．TdR处理 210

4．培养 210

一、ATCC登记的人组织来源的细胞株 211

附录 211

二、ATCC登记的哺乳动物组织来源的细胞株 213

三、国内已建立的人细胞株或细胞系 216

四、Mcllvein（200毫升）缓冲液 217

五、S？rensen（100毫升）缓冲液 217

六、酒精稀释表 218

七、常用人工合成培养基 219

八、离心速度和离心力换算表 221

九、常用缩写名词 222

十、参考文献 223