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第1章色谱分类介绍 1

1.1．色谱分析原理 1

1.2．分配色谱 2

1.3．凝胶过滤 3

目 录 6

序言 6

1.4．吸附色谱 7

1.4.1．经典的吸附色谱 9

1.4.2.离子交换色谱 9

1.4.3．亲和色谱 11

1.5．亲和色谱的命名 14

第2章亲和色谱吸附剂设计中的基本概念 16

2.1．基质 16

2.1.1．理想基质的性质 16

2.1.2．具有实际应用价值的基质的性质 19

2.1.2.1．纤维素 19

2.1.2.2．交联葡聚糖 20

2.1.2.3．琼脂糖 21

2.1.2.4．交联琼脂糖 24

2.1.2.5．聚丙烯酰胺凝胶 27

2.1.2.6．聚丙烯酰胺－琼脂糖凝胶 31

2.1.2.7．多孔玻璃和陶瓷 32

2.1.2.8．亲和色谱法中的其它惰性支持物 36

2.2．与基质有关的问题 38

2.2.1．基质的宏观环境或排阻效应 38

2.2.2．微环境或空间效应 39

2.2.3．间隔分子 39

2.2.3.1．间隔臂的长度 40

2.2.3.2．间隔臂的性质 42

2.3．与间隔分子有关的问题 44

2.4．配位体选择时应考虑的各种因素 45

2.4.1．配位体－大分子相互作用的性质 46

2.4.2．大分子与配位体的亲和力 47

2.4.3．配位体和基质的连接方式 49

2.4.4．配位体的浓度 54

2.5．亲和吸附剂设计中的其它有关因素 57

2.6．运用有关基本原理制备亲和吸附剂的实例 58

第3章亲和色谱法的化学工艺 61

3.1．基质的活化和功能化 62

3.1.1．多糖基质 62

3.1.1.1．卤化氰 63

3.1.1.2．三嗪 73

3.1.1.3．高碘酸盐的氧化作用 74

3.1.1.4．环氧乙烷偶联 76

3.1.1.5．其它双功能试剂 78

3.1.1.6．其它方法 80

3.1.2．聚丙烯酰胺 80

3.1.2.1．聚丙烯酰胺的直接活化 81

3.1.2.2．共聚技术 83

3.1.3．多孔玻璃与陶瓷 84

3.2．间隔臂 85

3.1.4．其它支持物 85

3.2.1．疏水间隔臂 86

3.2.2．亲水间隔臂 89

3.2.3．多价大分子的间隔分子 90

3.2.4．无电荷的间隔分子 91

3.3．高容量吸附剂的制备 92

3.4．配位体与间隔臂的偶联反应 93

3.4.1．含氨基配位体 93

3.4.1.1．碳二亚胺的缩合作用 94

3.4.1.2．肽键形成的其它方法 97

3.4.1.3．酸酐反应 97

3.4.1.4．N－羟基琥珀酰亚胺反应 97

3.4.1.5．酰基叠氮化法 100

3.4.1.6．异硫氰酸酯的偶联作用 100

3.4.1.7．双功能试剂 101

3.4.2．含羧基的配位体 102

3.4.3．含芳香族功能团的配位体 102

3.4.4．含醛基或酮基的配位体 103

3.4.5．含羟基的配位体 104

3.4.6．含硫醇基的配位体 105

3.5．可逆键连接的配位体 106

3.6．固定配位体浓度的测定方法 107

3.6.1．差数分析 107

3.6.2．直接光谱法 107

3.6.3．凝胶的溶解作用 107

3.6.4．酸或酶的水解作用 108

3.6.5．元素分析 109

3.6.6．放射性分析法 109

3.6.7．其它方法 109

3.7．亲和吸附剂制备中的其它因素 111

第4章亲和色谱的色谱技术 113

4.1．影响互补蛋白质吸附的诸因素 113

4.1.2样品体积、流速和平衡时间 114

4.1.1．平衡缓冲液的选择 114

4.1.3．蛋白质浓度的影响 116

4.1.4．温度效应 116

4.2．亲和吸附剂的容量 118

4.3．特异性吸附蛋白质的洗脱 119

4.3.1．非特异性洗脱法 121

4.3.2．特殊洗脱技术 124

4.3.3．特异性洗脱技术 125

4.4.1．离子效应 128

4.4．非特异性吸附 128

4.4.2．离子配位体 131

4.4.3．疏水效应 131

4.4.4．疏水配位体 132

4.4.5．复合亲和力（Compound affinity） 132

4.5．吸附剂的再生方法 133

4.6．亲和色谱的标准 134

4.7．大型制备性亲和色谱 136

5.1．纯化蛋白质的特异性固定吸附剂 137

第5章亲和色谱法在蛋白质及其它大分子纯化分离中的应用 137

5.2．固定的通用配位体 139

5.2.1．固定的腺嘌呤核苷酸辅酶 139

5.2.2．其它固定核苷酸 150

5.2.3．其它固定辅酶 152

5.2.4．固定的核酸和多核苷酸 153

5.2.5．固定的外源性凝集素 158

5.2.6．固定的染料 162

5.2.7．对硫醇特异的吸附剂——有机汞制剂 167

5.2.8．固定的氨基酸 169

5.3．从纯化的蛋白质制剂中除去微量污染物 171

5.4．同工酶的分离 173

第6章 亲和色谱法在纯化调节大分子和复杂生物结构中的应用 176

6.1．抗原和抗体 176

6.2．结合和运载蛋白 180

6.3．受体蛋白 182

6.4．细胞的亲和色谱 185

6.5．细胞生物学中的应用 188

6.6．临床应用 189

第7章亲和色谱法在分析中的应用 190

7.1．化学修饰的蛋白质与天然蛋白质的分离 190

7.2．亲和标记活性部位的肽的纯化 191

7.3．合成的肽和蛋白质的纯化 193

7.4．解离常数和平衡常数的测定 194

7.5．酶作用机制的探讨 197

8.1．共价色谱 199

第8章某些特殊的亲和色谱技术 199

8.2．疏水色谱 203

8.3．电荷转移及金属螯合亲和色谱 208

8.4．亲和密度干扰 209

8.5．亲和电泳技术 209

8.6．亲和分配 210

8.7．亲和组织化学 212

附录 213

参考文献 220