荧光原位杂交技术PDF电子书下载

第一章 概述 1

参考文献 4

第二章 FISH 探针和标记技术 5

1 概述 5

2 荧光素发光原理 5

荧光素和半抗原 6

常用的荧光素 7

滤光片的选择 8

3 核酸探针 8

探针类型 8

探针克隆的制备 9

酶促扩增探针 15

合成寡核苷酸探针 17

4 荧光素或半抗原与核苷酸的结合 17

5 探针标记 20

缺口平移 20

随机引物标记 22

RNA 转录标记 23

PCR 标记 25

6 DNA 标记后的处理和纯化 26

DNA 酶处理(适用于 FISH 和其他杂交方法) 26

荧光素、半抗原与蛋白质的直接化学结合 27

其他化学结合系统 27

探针沉淀之前反应混合体系中未结合的核苷酸与 BSA 的去除 27

荧光素或半抗原与氨基修饰的核苷酸的结合 27

7 其他标记系统 27

参考文献 29

第三章 单拷贝基因的人类染色体定位 30

1 概述 30

2 用于 FISH 定位的 DNA 探针 30

网站上 FISH 探针的选择鉴别 30

FISH 定位探针制备 33

中期染色体 35

3 靶 DNA 制备 35

间期核定位 38

低渗处理和固定 39

4 样本的准备 40

靶玻片的预处理 42

5 探针和靶 DNA 的变性和杂交 43

6 杂交后洗涤 45

7 免疫检测 46

8 染色体复染和显带 48

9 显微镜和图像分析 49

中期染色体单探针的 FISH 定位 50

10 FISH 定位过程中应该考虑的要点 50

多探针的相关定位 51

参考文献 54

第四章 鼠染色体制备 57

1 用于显带和原位杂交鼠染色体的制备 57

概述 57

2 鼠染色体姬姆萨-胰蛋白酶显带 64

3 鼠染色体分子细胞遗传学研究方法 66

参考文献 76

第五章 使用染色质和 DNA 纤维的高分辨率 FISH 定位 78

1 概述 78

4 染色质纤维制备 79

2 染色质纤维制备中的实际问题 79

3 染色质纤维 FISH 所需的常规设备 79

5 DNA 纤维制备 84

6 FISH 86

DNA 探针标记 86

杂交 88

洗涤 90

检测与扩增 91

复染和抗褪色 92

7 照相 93

参考文献 94

第六章 RNA FISH 技术在观察基因表达和核结构中的应用 96

1 概述 96

2 细胞制备 98

清洗剂抽提细胞样本 99

细胞遗传学准备 100

3 探针制备 101

4 与 RNA 杂交 103

RNA 杂交基本程序 104

寡核苷酸杂交 105

5 与 DNA 杂交 106

检测热变性的细胞 DNA 107

应用 NaOH 变性和 RNA 水解的 DNA FISH 108

6 多重标记技术及其应用 108

RNA 和 DNA 的同时检测 108

应用 FISH 同时检测蛋白质 109

染色体着色和 RNA FISH 111

用内含子和 cDNA 探针区分转录产物 112

外显子抑制杂交：特异竞争应用实例 113

7 观察分析结果 116

显微镜 116

数码图像 117

8 结语 119

参考文献 120

第七章 三维核 FISH 122

1 概述 122

2 细胞的制备和固定 126

载玻片的准备 126

贴壁细胞的培养和固定 128

悬浮细胞的制备、贴壁和固定 129

3 外周血细胞的分离 130

4 杂交前预处理 131

探针标记 134

5 建立杂交体系 134

探针制备 135

DNA 变性与杂交 135

6 杂交后洗涤，检测，核复染和封片 137

杂交后洗涤 137

杂交探针检测 137

核复染及抗褪色介质中封固细胞 141

7 3D FISH 和复制标记 142

复制标记 142

FISH 操作后卤化脱氧尿嘧啶核苷酸的检测 143

8 蛋白质免疫检测与3D FISH 联合应用 145

9 3D FISH 过程中染色质结构的保持 146

10 共聚焦显微镜 148

滤光片的选择 149

采图条件 151

仪器校订 152

显示 153

计量和去折叠 155

参考文献 158

第八章 分裂中期染色体和 DNA 芯片的比较基因组杂交 161

1 概述 161

3 基因组 DNA 的分离 163

2 中期染色体的制备 163

4 单细胞群分离的显微操作 169

5 通用 PCR 对小细胞群基因组 DNA 的扩增 170

6 探针标记 173

7 比较基因组杂交 176

中期染色体变性 176

探针混合物 177

原位杂交和信号检测 178

8 图像采集与评价 179

9 CGH 实验中一些问题的解决方法 180

11 新进展：阵列 CGH 181

10 CGH 实验与通用 PCR 联合应用时所遇问题的解决方法 181

参考文献 183

第九章 FISH 在临床细胞遗传学中的应用 185

1 概述 185

2 临床实验中常用的 FISH 探针 185

3 用于 FISH 分析的临床样本制备 186

用于 FISH 分析中期染色体的制备 187

FISH 分析临床样本间期细胞核的制备 189

4 评价和报告 FISH 结果的标准 195

间期 FISH 信号评价和计数标准 196

显微镜下挑选细胞进行 FISH 的注意事项 196

关于间期 FISH 结果解释的注意事项 198

5 临床细胞遗传学中常用的一些 FISH 探针 198

微缺失综合征的 FISH 分析 198

三色融合(易位/倒位)探针的使用 200

FISH 探针在评价基因扩增中的应用 202

6 附录(分子细胞遗传学临床资源的相关网站) 203

参考文献 203

第十章 多色 FISH 和光谱核型分析 205

1 概述 205

2 光谱核型分析(SKY) 206

3 M-FISH 206

4 M-FISH 及 SKY 的方法和步骤 208

5 图像采集和分析的注意事项 214

SKY 图像分析 215

M-FISH 图像分析 215

6 解决问题的方法 216

参考文献 218

第十一章 应用 cDNA 微阵列进行基因表达的荧光杂交分析 222

1 概述 222

基因表达序列分析 222

寡核苷酸芯片 222

2 cDNA 芯片的制备 223

cDNA 芯片 223

培养 cDNA 细菌克隆 225

芯片点样 231

3 靶产品 232

4 杂交 236

5 图像采集 237

6 图像分析和标准化 238

7 敏感性与特异性 239

8 数据处理与统计学分析 239

9 小结 239

参考文献 240

供应商目录 242