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实验一碱法抽提质粒DNA 5

一、实验目的 5

二、实验原理 5

（一）克隆载体pUC118质粒与宿主菌MV1184 7

（二）质粒DNA的抽提 10

（三）碱法抽提的主要试剂 19

（四）抽提产量与试剂用量的估算 19

三、试剂与器材 21

四、实验步骤 24

实验二电泳法测定DNA的浓度与纯度 27

一、实验目的 27

二、实验原理 27

（一）琼脂糖凝胶 29

（二）电泳时DNA迁移的影响因素 31

（三）电泳缓冲液 35

（四）上样液 36

（五）上样量的控制 37

（六）DNA电泳条带的检测 38

（七）电泳的分子质量梯度标志 40

三、试剂与器材 43

四、实验步骤 44

实验三载体与供体DNA的酶切 46

一、实验目的 46

二、实验原理 46

（一）限制性内切酶的一般性质 48

（二）限制性内切酶的使用 54

（三）酶切方式 55

（四）酶的质量鉴定 56

（五）酶的保存 57

（七）限制酶的作用条件 58

（六）酶单位的定义 58

（八）终止酶反应的方法 61

（九）酶切失败的原因及处理的方法 61

三、试剂与器材 63

四、实验步骤 63

实验四目的基因片段的回收 65

一、实验目的 65

二、实验原理 65

（一）各类回收方法 66

（二）回收方法的选择与操作注意事项 72

三、试剂与器材 73

四、实验步骤 74

实验五载体与供体DNA的连接 77

一、实验目的 77

二、实验原理 77

（一）早期的连接理论 78

（二）近期的计算机模拟反应进程 79

（三）连接酶 88

（四）连接反应的影响因素 89

（五）三种连接酶单位定义 92

三、试剂与器材 93

四、实验步骤 93

实验六CaCl2法转化大肠杆菌 95

一、实验目的 95

二、实验原理 95

（一）各种转化方法与转化率的衡量指标 96

（二）转化率的影响因素 98

（三）大肠杆菌中的限制系统与限制-修饰系统 104

（四）宿主菌的选择 106

三、试剂与器材 107

四、实验步骤 108

二、实验原理 111

实验七酚／氯仿法快速鉴定转化子 111

一、实验目的 111

（一）DNA水平检测 112

（二）mRNA水平检测 113

（三）蛋白质水平检测 115

（四）功能水平检测 115

三、试剂与器材 116

四、实验步骤 117

实验八随机引物法标记DNA探针 120

一、实验目的 120

二、实验原理 120

（一）酶法标记于链上 122

（二）酶法标记于末端 124

（三）化学法标记于链上 128

（四）化学法标记于末端 137

（五）光化学法标记于链上 140

（六）人工合成于链上 142

（七）检测酶直接标记法 144

三、试剂与器材 151

四、实验步骤 151

实验九菌落原位吸印 153

一、实验目的 153

二、实验原理 153

（一）各类吸印膜 153

（二）各种转移方法 156

三、试剂与器材 158

四、实验步骤 159

实验十DNA分子杂交 161

一、实验目的 161

二、实验原理 161

（一）DNA的复性与杂交反应动力学方程式 162

（二）杂交速率的影响因素 169

（三）杂交反应的两种模式 172

（四）杂交分子稳定性的影响 173

（五）杂交的步骤 175

三、试剂与器材 176

四、实验步骤 177

实验十一显色法检测杂交结果 179

一、实验目的 179

二、实验原理 179

（一）酶法显色原理 181

（二）免疫法检测原理 189

（三）生物素-亲和素法检测原理 189

（四）其他检测法 190

三、试剂与器材 193

四、实验步骤 195

实验十二PCR法鉴定人的性别 197

一、实验目的 197

二、实验原理 197

（一）PCR的引物设计 199

（二）PCR的反应体系 202

（三）PCR循环中的影响因素 208

（四）平台效应的形成因素 210

（五）热启动技术 211

（六）PCR反应的忠实性 212

（七）污染的防治 214

（八）人的性别鉴定 215

三、试剂与器材 216

四、实验步骤 216

附录 219

参考文献 289