哺乳动物发育工程实验方法PDF电子书下载

第一篇 绪 论 3

第一章哺乳动物的精子 3

第一节引 言 3

第二节精子的构造和功能 3

一、 精子头部 3

目 录 3

二、精子尾部 4

三、原生质膜 4

二、睾丸精子 5

第三节精子的生存环境和生理 5

一、受精前精子 5

三、附睾精子 6

四、射出精子 6

五、雌性生殖道内精子 7

第二章哺乳动物的卵子 9

第一节 引 言 9

一、 卵子形成 10

二、卵子的大小 10

第三节卵子的形成和排卵 10

第二节卵子的形态 10

一、一般形态（基本构造） 10

二、 卵泡的发育（卵子的发育和卵泡 12

的关系） 12

三、排卵 13

第四节卵子的构造及其组成 14

卵子的微细构造和细胞器 14

第五节卵子的生理 17

一、卵子的物质通透性 17

三、卵子的代谢 18

二、 卵细胞膜的性质和机能 18

第二篇 基本操作 21

第一章配子处理的准备工作 21

第一节引言 21

第二节处理配子的必须条件 21

一、无菌操作的必要性 21

二、环境条件的要求 21

第二章处理配子必要的实验室、设备和器具 23

第一节实验室的功能和构造 23

四、培养室 24

三、培养准备室 24

第二节实验器具 24

一、用于培养室内的器具 24

解剖及手术室 24

二、洗涤室、实验小动物 24

一、更衣室 24

二、用于培养室外的器具 26

三、玻璃器具类 28

四、塑料器具类 29

五、其它器具、器材类 29

第二节器具的洗涤 30

第一节仪器的检查和调试 30

第三章实验的准备 30

第三节器具的包装 31

第四节器具的消毒 32

一、高压蒸汽灭菌法 32

二、气体灭菌法 33

三、干热灭菌法 33

四、培养液的灭菌 33

一、试剂的种类 35

二、试剂的配制 35

第二节试剂 35

一、表面皿的硅化 35

第三节操作方法 35

一、设备 35

第一节设备、器具 35

第四章器具硅化法 35

二、 器具、器材 35

二、 处理卵子用毛细玻璃吸管的硅 36

化法 36

三、 注入用毛细吸管的硅化法 36

四、洗涤和灭菌 36

第五章培养液配制法和血清处理法 37

第一节引 言 37

第二节无机盐类溶液 37

一、配制盐类溶液必要的器具、器材 37

二、配制方法 37

材 38

二、培养液配制法 38

第三节粉末培养液 38

一、配制粉末培养液必要的器具、器 38

第四节液体培养基 39

第五节特殊培养基 39

第六节血清 39

一、血清购入和质量鉴定 39

二、血清的灭活 39

三、灭活血清的保存 40

第七节用于精子、卵子实验的培养基 40

的组成 40

一、采取精液用器具和设备 43

第一节处理精液的特殊器具和设备 43

第一章精液和精子 43

第三篇 基本技术篇〔1〕 精子 43

二、精液的处理、检查和保存用器材 44

和设备 44

三、 其它 45

第二节采精 45

一、假阴道法 46

二、 电采精法 47

三、用于分析的精液 48

二、用于受精的精液 48

一、用于一般性状检查的精液…… 48

第三节精液的处理 48

第四节精液的保存 50

一、家畜精液的液态保存 50

二、家畜精液的冷冻保存 52

第二章精子实验 57

第一节精子的获能法 57

一、 自然交配法 57

二、离体子宫内孵育法 58

三、完全合成培养基内法 59

一、 仓鼠精子向去除透明带的 60

卵子的侵入能 60

第二节精子获能判定法 60

二、精子活力评定法 63

第三节精子的顶体反应（三重染色法） 65

一、设备、器具 65

二、试剂 65

三、操作方法 66

第四篇 基本技术篇〔2〕 卵子 71

第一章采卵法 71

第一节采卵前的诱导排卵 71

一、 各实验动物的超数排卵诱导法 71

二、 各实验动物诱导排卵法 72

第二节 处理卵子的器具、器材和试剂 73

的准备 73

一、 设备、器具 73

二、试剂 74

第三节采卵方法 74

一、输卵管内采卵 74

二、子宫内采卵 78

三、卵泡内采卵 80

第四节输卵管、子宫内分裂卵的阴道 81

回收法 81

三、操作方法 82

二、阴道冲洗液 82

一、设备、器具 82

四、阴道冲洗采卵示例 85

第五节牛受精卵的回收 86

一、 用于牛子宫冲洗的冲卵器种类 87

和操作方法 87

二、 受精卵回收的实际操作方法… 88

第二章卵子的检查法——正常性和发育能力的判定 94

第一节 引 言 94

第二节判定标准 94

第三节卵子的分类 95

第四节检查卵子时的注意点 96

第三章卵子的保存 110

第一节引言 110

第二节冷冻、解冻方法概要 110

一、装置、器具 110

二、 冷冻液 111

三、 植冰（ice seeding） 111

第三节冷冻、解冻实际操作 112

一、小鼠、大鼠 112

二、 牛 114

二、 Vitrification法 115

一、甘油十蔗糖法 115

第四节冷冻操作新技术 115

第四章卵子培养法 116

第一节引言 116

第二节卵子体外培养 116

第三节Brinster氏操作方法 116

一、设备、器具 116

二、试剂 117

三、培养步骤 119

第一节实验小动物的胚胎移植…… 121

一、 设备、器具 121

第五章胚胎移植法 121

二、 试剂 122

三、操作方法 123

第二节草食家畜胚胎移植 127

一、手术胚胎移植法 127

二、非手术胚胎移植法 132

第三节猪胚胎移植 134

一、设备、器具 134

二、试剂 135

三、操作方法 135

二、试剂 140

一、装置、器具 140

第二节卵子全形封片法判断核相… 140

第六章卵子核相判定法 140

第一节引 言 140

三、操作方法 141

第七章免疫手术法——内细胞团分离法 143

第一节引 言 143

第二节抗体制作方法 143

一、装置、器具 143

二、试剂 143

三、 动物 144

四、操作方法 144

二、试剂 146

三、操作方法 146

第三节抗体效价测定法 146

一、 装置、器具 146

四、说明 148

第四节免疫手术法 148

（内细胞团分离法） 148

一、装置、器具 148

二、试剂 148

三、操作方法 148

一、一般组织标本 152

第二节光学显微镜标本制作法 152

第一节引 言 152

第八章卵子组织学 152

二、组织化学标本 153

三、免疫组织化学标本 156

第三节 电子显微镜标本制作法…… 157

一、透射式电子显微镜标本制作… 157

二、扫描电子显微镜标本制作…… 159

三、 电子显微镜组织化学标本制作 160

一、 装置、器具 165

第二节小鼠卵子的体外成熟 165

第一节引 言 165

第一章卵子体外成熟 165

第五篇 应用技术 165

二、试剂 166

三、培养基配制 166

四、 动物 166

五、培养方法 166

六、卵子的检查 167

七、 结果 168

八、存在问题 168

二、 培养基 169

一、装置、器具 169

第二章体外受精法 169

第一节实验小动物 169

三、体外受精步骤 170

四、检查 171

五、体外胚胎的培养 171

六、体外胚胎的移植 171

七、 小鼠以外实验动物的体外受精 172

第二节家畜 172

一、 引言 172

二、 体外受精用成熟卵子的准备… 172

三、 获得受精能精子的准备 176

养 177

四、 卵子体外受精及其后的发育培 177

五、卵子的标本制作法 179

第三章胚胎分割生产双生仔 181

第一节 引 言 181

第二节分割的胚胎在活体内培养法 181

一、装置、器具 181

二、试剂 182

三、操作方法 182

第三节胚胎分割法 184

二、试剂 187

一、 装置、器具 187

第一节 引 言 187

第二节人工嵌合体动物的制作法… 187

第四章卵子聚合法制作嵌合体胚胎和个体 187

三、动物 188

四、操作方法 188

第五章多倍体胚胎制作法 191

第一节 引 言 191

第二节二倍体单性发育胚及体外 191

受精法制作三倍体胚胎法 191

一、设备、器具 191

四、操作方法 192

三、 动物 192

二、试剂 192

第三节卵裂球电融合法制作多倍体 196

一、 设备、器具 196

二、 试剂 197

三、操作方法 197

第六章利用H-Y抗体进行胚胎性别鉴别 200

第一节引言 200

第二节大鼠H-Y抗体的制作 200

和部分精制法 200

一、设备、器具 200

二、试剂 201

三、操作方法 202

第三节 H-Y抗体效价的尾上皮细胞 202

的细胞损害检查法 202

一、装置、器具 203

二、试剂 203

三、操作方法 203

第四节H-Y抗体鉴别胚胎性别的操 205

作法 205

一、设备、器具 205

二、 试剂 205

三、操作方法 206

第七章染色体解析和基因表达机构的分析 208

第一节引言 208

第二节染色体解析 208

一、 设备、器具 208

二、试剂 208

三、操作方法 209

第三节X染色体的活性变化 214

一、细胞遗传学方法 214

二、生物化学方法 216

一、设备、器具 218

第三节显微注入法的实践 218

第一节引 言 218

第八章卵子显微注入法 218

第二节显微注入法的基本事项 218

二、试剂 220

三、器具的制作和调试 220

四、注入操作法 222

五、处理卵子的培养 224

六、处理卵子的移植 224

注入法 225

例2．牛卵原核显微注入法 225

例1．将牛精子头部向体外成熟卵的 225

第九章外源基因导入的基本操作法 227

第一节研究现状 227

第二节mRNA的分离法 228

一、设备、器具 229

二、试剂 229

三、操作方法 230

第三节cDNA的合成和纯株培养… 232

一、 设备、器具 233

二、试剂和酶类 233

三、操作方法 234

克隆的32P标记法 238

第四节mRNA和cDNA 238

一、mRNA32P－标记法 239

二、 cDNA克隆切口转译的32P－标记 240

法 240

第五节基因文库的筛选 241

用重组DNA实验制作导入重组分子的动物个时的物理性封锁方法的见解 242

第二节 细胞的排列和分化解析法… 243

一、设备、器具 243

二、试剂 243

第一节引 言 243

第十章发育机制解析法 243

三、操作方法 244

第十一章药效试验的应用 247

第一节引 言 247

第二节染色体标本制作方法 248

一、设备、器具 248

二、试剂 248

三、操作方法 249

和受精培养基 257

三、精子受精能获得培养基 257

一、用于精子的各种溶液 257

二、用于卵子的各种溶液 257

第一章用于精子、卵子实验的各种溶液、培养液的组成 257

第六篇 资料篇 257

第一节一览表 257

四、卵子发育培养基 258

五、 用于细胞培养的溶液 258

第二节各种溶液、培养液的组成…… 259

第二章特殊试剂、药物、器材、器具的购置地址 273

第三章精子、卵子资料 276

第一节一览表 276

第二节一览表内容 277

一、性机能资料 282

三、精液和精子资料 287

二、 副性腺分泌液的化学成分…… 287

四、卵子资料 290

第四章名词解释 299

第五章其他 312

一、离心机的半径、离心力、旋转速度一览表 312

二、各种资料记录表格 313

三、 处理哺乳动物配子最低限度的设施、设备、器材和器具类 317

四、实验动物处理方法参考书 318

参考文献 319

索引 328

常用缩写生化词汇 337

跋 339