转染实验技术PDF电子书下载

第1章 转染实验技术概述 1

1.1转染实验技术简介 1

1.1.1转染实验技术的概念 1

1.1.2外源基因转染真核细胞的目的、意义 1

1.2转染实验技术的分类及原理 2

1.2.1病毒感染法 2

1.2.2非病毒感染法 3

1.3转染实验技术的应用 5

1.4新材料与新技术在转染实验技术中的应用 7

参考文献 8

第2章 目的基因的获取 9

2.1目的基因概述 9

2.2化学合成法获取目的基因 11

2.2.1磷酸二酯法 12

2.2.2磷酸三酯法 14

2.2.3亚磷酸三酯法 15

2.2.4寡核苷酸连接法 15

2.3基因组文库钓取目的基因 17

2.4 cDNA文库钓取目的基因 19

2.4.1 mRNA的分离纯化（过程） 20

2.4.2双链cDNA的体外合成 20

2.5 PCR获取目的基因 24

2.5.1 PCR扩增DNA的基本原理 24

2.5.2 PCR扩增产物的克隆 26

2.5.3 PCR技术在目的基因制备中的应用 27

2.6 RT-PCR法获取目的基因 27

参考文献 28

第3章 基因表达载体的选择 29

3.1基因表达载体概述 29

3.2基因表达载体分类 31

3.3基因表达载体的遗传标记 32

3.4常用原核基因表达质粒载体 34

3.5常用真核基因表达质粒载体 38

3.6病毒型表达载体 42

3.6.1噬菌体载体 43

3.6.2反转录病毒载体 49

3.6.3腺病毒载体 52

3.7可表达融合蛋白的载体 54

3.7.1谷光甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白载体 54

3.7.2 pMALTM融合蛋白表达载体 56

3.8基因表达载体的改造 57

3.8.1报道基因的改造 57

3.8.2启动子的研究 57

3.8.3大容量载体 57

参考文献 58

第4章 重组子的构建与鉴定 59

4.1限制性内切酶 59

4.2黏断连接方法及重点技术 60

4.2.1单酶切位点的连接 60

4.2.2双酶切位点的连接 61

4.2.3同工异源酶及同尾酶酶切位点的连接 62

4.3平端连接方法及重点技术 62

4.4酶切位点的改造和连接 63

4.4.1黏断切口转化为平端切口的连接 63

4.4.2人工接头的设计及人工黏断切口的制备 63

4.4.3酶切位点的化学修饰 64

4.5重组子的筛选与鉴定 64

4.5.1表型水平筛选 65

4.5.2分子水平鉴定 66

参考文献 68

第5章 化学转染方法将重组体导入真核细胞 69

5.1磷酸钙共沉淀法 69

5.1.1磷酸钙共沉淀法原理 69

5.1.2转染试剂、材料 69

5.1.3仪器设备 70

5.1.4操作步骤 70

5.1.5注意事项及影响因素 72

5.2 DEAE-葡聚糖法转染 73

5.2.1 DEAE-葡聚糖法转染原理 73

5.2.2转染试剂 73

5.2.3仪器设备 74

5.2.4操作步骤 74

5.2.5操作注意事项 74

5.3脂质体介导的转染 75

5.3.1脂质体介导的转染原理 75

5.3.2转染试剂 77

5.3.3仪器设备 77

5.3.4操作步骤 77

5.3.5操作注意事项 78

5.4纳米材料介导的转染 78

5.4.1纳米材料介导的转染原理 79

5.4.2转染试剂 79

5.4.3仪器设备 79

5.4.4操作步骤 79

5.4.5操作注意事项 81

参考文献 81

第6章 物理转染方法将重组体导入真核细胞 82

6.1显微注射法转染 82

6.1.1显微注射法原理 83

6.1.2转染试剂 83

6.1.3仪器设备 83

6.1.4操作步骤 84

6.1.5操作注意事项 85

6.2电穿孔法转染 86

6.2.1电穿孔法转染原理 86

6.2.2转染试剂 87

6.2.3仪器设备 88

6.2.4操作步骤 89

6.2.5操作注意事项 89

6.3基因枪转染 90

6.3.1基因枪技术的发展历史 90

6.3.2基因枪介导的转染原理和设备 90

6.3.3转染试剂：微弹载体、DNA微载体 92

6.3.4操作步骤 93

6.3.5操作注意事项 94

6.3.6基因枪技术作为新兴的转移基因的优点 94

6.3.7基因枪的发展趋势 94

参考文献 95

第7章 病毒转染方法将重组体导入真核细胞 96

7.1病毒转染系统概述 96

7.2包装细胞概述 96

7.3高浓度病毒原液的收集及滴度测定方法 97

7.3.1高浓度病毒原液收集 97

7.3.2病毒滴度测定方法 97

7.4病毒转染的辅助系统 98

7.4.1转染试剂 98

7.4.2细胞状态 98

7.4.3转染方法 98

7.4.4载体构建 100

7.5腺病毒介导的转染 100

7.5.1腺病毒介导的转染原理 100

7.5.2转染试剂 101

7.5.3仪器设备 104

7.5.4操作步骤 105

7.5.5操作注意事项 112

7.6反转录病毒介导的转染 112

7.6.1反转录病毒介导的转染原理 112

7.6.2转染试剂 115

7.6.3仪器设备 116

7.6.4操作步骤 116

7.6.5操作注意事项 118

参考文献 119

第8章 转染成功细胞的选择 120

8.1遗传报道基因系统 120

8.1.1报道基因系统概述 120

8.1.2报道基因的分类及使用选择 122

8.1.3报道基因技术的前景展望 123

8.1.4常见的报道基因 124

8.2报道基因的同位素分析法 127

8.2.1放射性同位素的基本性质 128

8.2.2射线的防护 128

8.3报道基因的非同位素分析法 129

8.3.1酶联免疫法（ELISA） 129

8.3.2荧光法 133

8.3.3免疫组织化学染色法 133

参考文献 135

第9章 转染技术的应用 137

9.1转基因动物及基因敲除动物 137

9.1.1转基因动物的定义 137

9.1.2制备转基因动物的方法 137

9.1.3基因敲除动物 138

9.2转基因植物 139

9.2.1转基因植物的定义 139

9.2.2常用的植物转基因方法 139

9.2.3转基因植物的主要应用方向 140

9.3基因制药 140

9.3.1基因制药概述 140

9.3.2基因工程药物生产的基本过程 141

9.3.3基因制药技术的主要应用 141

9.4基因治疗 142

9.4.1遗传性疾病的基因治疗 142

9.4.2肿瘤基因治疗 143

9.4.3其他疾病的基因治疗 143

9.5 RNA干扰治疗 143

9.5.1在骨病治疗中的应用 144

9.5.2在神经系统疾病中的应用 144

9.5.3在肿瘤治疗中的应用 145

9.5.4在抗病毒治疗中的应用 145

9.5.5在皮肤病治疗中的应用 145

参考文献 146