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第一部分 细胞生物学基础实验 1

一、细胞培养的基本技术 1

实验一 细胞培养室的设置、设备和无菌操作 1

实验二 器械的清洗和消毒 2

实验三 细胞培养用液的配置及消毒 3

实验四 原代细胞的培养(组织块培养法) 5

实验五 原代细胞培养(胰蛋白酶消化法分离表皮、真皮细胞) 6

实验六 细胞的复苏 6

实验七 传代细胞培养 7

实验八 细胞的冻存 8

实验九 培养细胞的观察 8

实验十 细胞悬液中细胞数目的测定 9

实验十一 细胞活力的检测 11

实验十二 培养细胞的染色体的制备与观察 11

二、细胞与细胞器分离技术 12

实验十三 心肌细胞的分离 12

实验十四 细胞核的分离 13

实验十五 溶酶体的分离 15

实验十六 线粒体的分离 16

第二部分 生物化学与分子生物学基础实验 18

一、蛋白质与酶分析 18

实验一 蛋白质的性质 18

实验二 酶反应条件的选择 23

实验三 蛋白质含量的测定 29

附：微量凯氏定氮法 35

实验四 蛋白质的电泳 38

实验五 氨基酸与蛋白质的层析 48

实验六 尿液淀粉酶活性测定(改良Winslow法) 55

实验七 血清丙氨酸氨基转移酶(谷-丙转氨酶)活性测定(改良Reitman-Frankel法) 58

实验八 胆碱酯酶的反应速度和米氏常数测定 62

二、糖的测定 65

实验九 总糖测定(蒽酮比色法测定糖含量) 65

实验十 血糖(葡萄糖)测定 66

三、脂类测定 71

实验十一 血清甘油三酯简易测定法 71

实验十二 血清胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及其亚组分测定 73

实验十三 血脂的层析鉴定 78

实验十四 血清尿素氮含量测定(改良二乙酰-肟法) 80

四、代谢产物测定 80

实验十五 血液和尿中肌酊含量测定 81

实验十六 血清胆红素定性和定量测定 85

五、维生素分离分析 88

实验十七 食物中胡萝卜素的柱层析和定量测定 88

实验十八 食物中维生素C含量测定 91

六、细胞信号传导分析 94

实验十九 血浆胰岛素放射免疫测定 94

附：红细胞胰岛素受体测定 100

实验二十 核酸含量测定 104

七、核酸与分子生物学实验 104

实验二十一 真核细胞中核酸的分离 109

附：mRNA的分离与纯化 112

实验二十二 重组DNA基本方法 115

附：分子生物学实验室其他常用方法 122

实验二十三 多聚酶链式反应(PCR)技术 137

实验二十四 核酸分子探针标记与杂交实验 139

附：放射性核素标记探针制备及杂交方法 144

实验二十五 DNA序列测定技术——双脱氧末端终止法测定DNA序列 152

实验二十六 Internet在分子生物学中的应用——利用www进行核酸同源序列的比较分析 154

八、常用仪器分析 158

第三部分 免疫学基础实验 185

实验一 血清IgG的提纯 185

实验二 单向琼脂扩散试验 188

实验三 双向免疫扩散试验 189

实验四 琼脂免疫电泳 190

实验五 火箭免疫电泳 191

实验六 对流免疫电泳 193

实验七 免疫酶标技术 194

实验八 免疫印迹技术(Western blotting) 196

实验九 补体结合试验 199

实验十 血清总补体活性的测定(CH50试验) 202

实验十一 PEG沉淀补体消耗试验(PEG-CC) 204

实验十二 吞噬细胞吞噬试验 205

实验十三 E-玫瑰花试验 206

实验十四 淋巴细胞转化试验 208

实验十五 流式细胞仪自动细胞记数法(FCS) 209

实验十六 细胞因子活性测定 210

附录 214