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第一章 实验基本技术 1

第二章 蛋白质 32

实验一 蛋白质分离 32

实验（一） 凝胶层析分离牛血清白蛋白与溶菌酶 32

实验（二） 薄层层析分离不同种类的氨基酸 34

实验（三） 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 36

实验（四） 二维蛋白质电泳 39

实验（五） 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白 43

实验二 蛋白质的性质（呈色反应） 45

实验（一） 双缩脲法显色反应 45

实验（二） 茚三酮显色反应 47

实验（三） 黄色显色反应 48

实验三 蛋白质的性质（沉淀反应） 50

实验（一） 盐析沉淀法 51

实验（二） 乙醇沉淀法 52

实验（三） 重金属盐沉淀法 52

实验（四） 有机酸沉淀法 53

实验（五） 加热使蛋白质变性沉淀 54

实验四 蛋白质的性质（两性解离和等电点） 55

实验（一） 酪蛋白质的两性解离性质 55

实验（二） 酪蛋白等电点的测定 56

实验（三） 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 58

实验（四） 牛乳中酪蛋白的制备 61

实验五 蛋白质含量测定和纯度鉴定 62

实验（一） 凯氏定氮法测定蛋白质的含量 62

实验（二） 双缩脲法测定蛋白质含量 65

实验（三） 紫外吸收法测定蛋白质的含量 67

实验（四） 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的含量 68

实验（五） Folin-酚试剂（Lowry法）测定蛋白质含量 70

实验（六） BCA法测定蛋白质含量 72

实验（七） SDD-聚丙烯酰胺凝胶电泳测酶相对分子量及纯度鉴定 74

实验（八） 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Westem印迹） 77

第三章 核酸 81

实验一 核酸的分离 81

实验（一） 离子交换柱层析分离核苷酸 81

实验（二） 植物DNA的提取 87

实验（三） λ噬菌体DNA提取 89

实验（四） 鼠肝DNA的制备 91

实验（五） CTAB法小量制备大肠杆菌基因组DNA 95

实验（六） 组织和细胞的RNA的制备 96

实验二 核酸组分鉴定 99

实验（一） 肝组织中核酸的提取和核酸组分的鉴定 99

实验（二） 酵母核糖核酸（RNA）的提取及组分鉴定 102

实验三 核酸浓度测定 104

实验（一） 定磷法测定核酸的含量 104

实验（二） 紫外吸收法测定核酸的含量 106

实验（三） 化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法 108

实验（四） 地衣酚显色法测定RNA含量 110

第四章 维生素 111

实验一 维生素的提取 111

实验（一） 总维生素C的提取与定量（2，4-二硝基苯肼法） 111

实验（二） 胡萝卜素的柱层析分离法 113

实验二 维生素的含量测定 114

实验（一）2，6-二氯酚靛酚滴定法测定还原性维生素C的含量 114

实验（二） 磷钼酸法测定维生素C的含量 117

实验（三） 碘量法测定维生素C的含量 119

第五章 酶 121

实验一 酶的特点 121

实验（一） 淀粉酶和蔗糖酶作用的特异性 121

实验（二） 过氧化氢酶的高效性 123

实验二 酶促反应动力学 124

实验（一） 温度对酶活性的影响 124

实验（二） pH值对酶活性的影响 125

实验（三） 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 127

实验（四） 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 128

实验（五）4-氨基安替比林显色反应测定碱性磷酸酶Km 129

实验（六） 磷钼酸及磷钨酸显色反应测定碱性磷酸酶Km 132

实验（七） 脲酶Km值的简易测定法 134

实验三 酶的制备和活力 137

实验（一） 枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活力的测定 137

实验（二）3-磷酸甘油醛脱氢酶偶联法测定血清醛缩酶活性 140

实验（三） 酯酶的分离、纯化与活性测定 143

实验（四） 琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 146

实验（五） 大蒜细胞SOD的提取与分离 148

第六章 糖类 151

实验一 糖及糖原的提取鉴定 151

实验（一） 碱性溶液法进行肝糖原的提取与鉴定 151

实验（二） 三氯乙酸法进行肝糖原的提取和鉴定 153

实验二 血糖含量测定 154

实验（一） 邻甲苯胺法测定血清葡萄糖 154

实验（二） 蒽酮比色法测定血清中葡萄糖含量 156

实验（三） GOD-PAP法测定血清葡萄糖 157

实验（四） Folin-Wu法测定血清葡萄糖 159

实验三 糖代谢 160

实验（一）糖酵解 160

实验（二） 植物中丙酮酸含量的测定 162

实验四 血糖调节 163

实验（一） 肾上腺素和胰岛素对家兔血糖浓度的影响 163

实验（二） 运动对骨骼肌糖代谢的影响 164

第七章 脂类 168

实验一 脂类含量测定 168

实验（一） 磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯 168

实验（二） 异丙醇抽提、乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯 169

实验（三） Hanus法测定不饱和脂肪酸的碘价 171

实验（四） 氧化酶法测定血清总胆固醇含量 173

实验（五） 邻苯二甲醛直接显色法测定血清总胆固醇的含量 174

实验（六） 硫磷铁法测定血清总胆固醇含量 176

实验二 脂类代谢 177

实验（一） 肝的生酮作用 177

实验（二） 酮体的生成及鉴定 179

实验三 脂类的提取 181

实验（一） 卵磷脂的提取和定性鉴定 181

实验（二） 琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白 182

实验（三） 薄膜层析法分离血清脂类 184

第八章 氨基酸 186

实验一 纸层析法测大鼠肌匀浆中谷丙转氨酶的氨基移换作用 186

实验二 二硝基苯腙显色法测定血清谷丙转氨酶活性 188

实验三 精氨酸酶在尿素形成中的作用 190

实验四 离子交换柱层析法分离氨基酸 192

第九章 分子生物学基础实验 194

实验一 细菌质粒DNA提取及紫外吸收法测定核酸的含量 194

实验二 质粒DNA提取（质粒小量提取试剂盒） 196

实验三 质粒DNA的酶切分析 198

实验四 质粒载体与外源DNA片段的连接 199

实验五 CaCl2法制备E.coli感受态细胞 200

实验六 重组DNA的转化和克隆筛选 201

实验七 琼脂糖凝胶电泳分离DNA 202

实验八 利用PCR技术从质粒扩增DNA 205

实验九 RT-PCR方法 207

实验十 荧光定量PCR测定培养Hela细胞中GAPDH含量 208

实验十一 Southern blot实验方法 211

实验十二 Northern blot实验方法 213

实验十三 真核细胞DNA的制备与定量 218

实验十四 表达蛋白的分离与纯化 221

实验十五 表达蛋白的生物学活性检测 223

实验十六 放射性同位素标记的DNA序列测定分析 224

实验十七 细胞凋亡的分子生物学检测方法 226

实验十八 测序技术 229

实验（一） 非同位素银染测序系统操作技术 230

实验（二） T7 DNA聚合酶测序技术 238

实验十九 分子杂交技术 245

实验（一） 双链DNA探针及其标记方法之切口平移法 245

实验（二） 双链DNA探针及其标记方法之随机引物合成法 246

实验（三） 单链DNA探针及其标记方法 248

实验（四） 末端标记DNA探针 249

实验（五） 寡核苷酸探针 250

实验（六） 菌落原位杂交 251

实验（七） 斑点杂交 253

第十章 大实验和综合实验 256

实验一 溶菌酶的提取和系列性质测定 256

实验（一） 实验准备 256

实验（二） 酶的提取 258

实验（三） 酶的纯化 260

实验（四） 酶活力、蛋白浓度测定 261

实验（五） 酶促动力学（Km测定、酶的抑制） 263

实验（六） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测酶相对分子量及纯度鉴定 265

实验二 酸性磷酸酯酶的提取分离、活性测定 267

实验（一） 酸性磷酸酯酶的提取分离纯化 267

实验（二） 酶促反应进程曲线的制作 269

实验（三） 酸性磷酸酯酶的酶活力测定 272

实验（四） 凝胶层析法纯化酸性磷酸酯酶 275

实验（五） 考马斯（Comessie）亮蓝结合法测定蛋白质浓度 281

实验（六） 酸性磷酸酯酶米氏常数的测定 283

实验（七） 酸性磷酸酯酶的检测——SDS-PAGE电泳法 287

实验三 动物和植物组织DNA的提取和鉴定 294

实验四 细胞色素C的制备和测定 299

实验五 血清中IgG的分离纯化 303

实验六 红细胞中SOD分离纯化及活性鉴定 308

实验七 燕麦水解蛋白的制备和理化性质测定 311

参考文献 315

附录 316

附录1 常用缓冲溶液的配制 316

附录2 常用酸碱摩尔溶液的配制 325

附录3 常用酸碱指示剂的配制 326

附录4 常用抗凝试剂的配制 327

附录5 硫酸铵饱和度计算表 328

附录6 色谱法常用数据 330

附录7 实验数据和数据处理 338