基础分子生物学实验指导PDF电子书下载

第一章 基因组DNA操作技术 1

第一节 基因组DNA的提取 2

实验一 SDS法提取小麦叶片DNA 3

实验二 动物组织基因组DNA的提取 5

实验三 细菌基因组DNA的提取 6

第二节 DNA质量的检测 8

实验四 核酸的酶切及电泳 9

第三节 Southern杂交技术 12

实验五 小麦基因组DNA的Southern杂交 13

第二章 质粒操作技术 17

第一节 外源基因插入质粒及转化大肠杆菌 18

实验一 外源基因与质粒载体的连接 21

实验二 热击法转化质粒 22

第二节 质粒的提取及检测 24

实验三 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 25

实验四 质粒的酶切鉴定 26

第三章 RNA操作技术 29

第一节 总RNA的提取及分析 30

实验一 用TRIZOL试剂提取小麦叶片总RNA 31

实验二 从冰冻血液中提取总RNA 33

实验三 总RNA的变性凝胶电泳 33

第二节 Northern杂交技术 36

实验四 小麦衰老相关蛋白基因的Northern杂交 37

第三节 cDNA文库构建及筛选 40

实验五 小麦cDNA文库的构建 41

第四章 PCR技术与应用 47

第一节 普通PCR 48

实验一 PCR检测重组质粒中的插入片段 52

实验二 随机引物扩增多态DNA（RAPD） 53

附 用16S rDNA方法鉴定细菌种属 55

第二节 反转录PCR 58

实验三 反转录PCR扩增小麦β-actin基因 59

第三节 定时荧光定量PCR 61

实验四 定时荧光定量PCR测定小麦中Cu/Zn-SOD基因含量 63

第五章 电子克隆 65

实验一 基于生物信息学克隆水稻过氧化氢酶基因 75

第六章 蛋白质分离与检测技术 79

第一节 SDS-PAGE电泳分离蛋白质 80

实验一 SDS-PAGE电泳检测蛋白质相对分子质量 82

附 1，5-二磷酸核酮糖羧化酶加氧酶的层析分离与电泳鉴定 83

第二节 Western杂交技术 87

实验二 小麦RuBisCO蛋白的Western杂交 88

第三节 等电聚焦电泳 91

实验三 小麦过氧化物酶同工酶的等电聚焦分析 92

第四节 蛋白质双向电泳 95

实验四 蛋白质双向电泳检测小麦叶片蛋白 97

第七章 外源基因的表达 101

第一节 外源基因在大肠杆菌中的表达 102

实验一 绿色荧光蛋白基因表达载体的构建 104

实验二 绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 107

第二节 外源基因在枯草杆菌中的表达 109

实验三 枯草杆菌电击转化（高渗透法） 112

实验四 重组载体pHT43-lip在枯草杆菌中的分泌表达 114

第三节 外源基因在酵母中的分泌表达 116

实验五 绿色荧光蛋白重组表达载体pPIC9K-GFP的构建 121

实验六 绿色荧光蛋白在毕赤酵母中的诱导表达 123

主要参考文献 126

附录 127

附录一 常用试剂及缓冲液 127

附录二 氨基酸及遗传密码 132

附录三 常用的相对分子质量标记 133

附录四 分子生物学有关网络资源 135

附录五 分子实验常用仪器设备 136