层析技术及其在医药学上的应用PDF电子书下载

第一章 层析法概述 1

一 层析法的产生及发展 1

二 层析法的定义 2

三 层析过程 2

四 层析法的分类 3

（一）按分离原理分类 3

（二）按操作形式分类 3

（三）按两相所处的状态分类 3

第二章 反流分布法 4

一 基本原理 4

二 溶剂的选择 8

三 反流分布仪器 9

（一）分液漏斗 9

（二）不锈钢反流分布分析器 10

（三）玻璃反流分布分析器 10

四 应用 10

（一）分离混合物 10

（二）提纯化合物 13

（三）判断化合物的纯度 13

（四）鉴定化合物 13

第三章 柱层析法 14

第一节 吸附柱层析法 14

一 基本原理 14

二 吸附等温线 14

三 分配系数与保留体积 16

四 吸附剂 16

五 溶剂与洗脱剂 20

六 操作方法 22

第二节 分配柱层析法 23

一 基本原理 23

二 分配系数与保留体积的关系式 23

三 支持剂 24

四 固定液 24

五 流动相与溶剂 25

六 操作方法 25

第三节 应用实例 26

一 菠菜叶色素的分离 26

二 中药青蒿化学成分的提取与分离 27

三 脂蛋白脂酶（LPL）和肝一甘油三酯酶（H—TGL）的分离 27

四 血清蛋白质成分的分离 27

五 多核甘酸磷酸化酶的分离 28

第四章 纸层析法 28

一 基本原理 28

（一）化学结构与分配系数的关系 29

（二）溶质的极性与分配系数的关系 31

（三）溶质与溶剂间的互相作用与分配系数的关系 32

（四）PH与分配系数的关系 33

（五）展开方式与Rr值的关系 33

二 层析滤纸的选择与处理 34

三 固定相 35

四 展开剂的选择 35

五操作方法 36

（一）点样 36

（二）展开 37

（三）显色 39

（四）比移值（Rf）的测定 39

六 定性、定量分析 41

（一）定性分析 41

（二）定量分析 41

七 应用实例 41

（一）磺胺类药物的分离与鉴定 41

（二）香豆精类化合物的分离 42

（三）强心甙的分离 42

（四）羟基蒽醌类的分离 42

（五）氨基酸的分离与鉴定 43

（六）对合成CDP一胆碱的鉴定 44

第五章 薄层层析法 44

一 基本原理 44

二吸附剂的选择 45

（一）吸附剂的种类 45

（二）吸附剂颗粒的大小 46

（三）吸附剂的选择 46

三 展开剂的选择 46

四 固定相、展开剂（流动相）和被分离物质三者的关系 46

五 操作方法 47

（一）制板 47

（二）点样 50

（三）展开 50

（四）显色 54

（五）Rr值的测定 54

六 定性、定量分析 54

（一）定性分析 54

（二）定量分析 55

七 应用实例 57

（一）药剂制剂中维生素A与维生素E的分离 57

（二）苦参素针剂中氧化苦参碱和氧化槐果碱的分离 57

（三）心律片中苦参碱和槐果碱的分离与测定 57

（四）四季青和丹参中原儿茶醛的分离 58

（五）生物碱的分离 58

（六）单核苷酸的分离 59

第六章 离子交换层析法 60

一 基本原理 60

二离子交换剂的种类、结构及性质 61

（一）无机离子交换剂 62

（二）有机物离子交换剂 62

（三）电子交换树脂（氧化还原交换树脂） 66

（四）选择性离子交换树脂 67

（五）吸附树脂 68

三 离子交换树脂的特性 68

（一）交联度 68

（二）交换容量及测定方法 68

四 离子交换理论 70

（一）选择性 70

（二）分配系数 72

五 离子交换树脂的选择 72

（一）阳离子交换树脂 72

（二）阴离子交换树脂 72

六 离子交换树脂的处理与再生 72

（一）强酸性阳离子交换树脂的预处理 73

（二）强碱性阴离子交换树脂的预处理 73

（三）弱酸性阳离子交换树脂的预处理 73

（四）弱碱性阴离子交换树脂的预处理 73

（五）再生 74

七 操作方法 74

（一）装层析柱 74

（二）样品量与树脂量的比例 74

（三）洗脱 74

八应用实例 74

（一）氨基酸的分离 74

（二）核苷酸的分离 75

（三）人血清胰蛋白酶抑制剂的分离纯化 76

（四）蛋白质的分离 76

第七章 凝胶层析法 77

一 基本原理 77

（一）分子筛作用 77

（二）凝胶层析内水和外水体积的计算 78

（三）分配系数（KD）的测定 79

（四）Rf值的测定和意义 80

（五）分离体积 80

（六）上样体积的预测 80

二 凝胶的种类 81

（一）天然高聚物 81

（二）人工合成的高聚物 81

三 葡聚糖凝胶的化学结构与性质 81

四 凝胶层析中的其他作用 83

（一）离子交换作用 83

（二）结构效应 85

五 操作方法 85

（一）凝胶层析柱的制备 85

（二）加样 89

（三）洗脱 90

（四）凝胶的再生 91

六应用实例 91

（一）免疫球蛋白的轻链和重链的分离 91

（二）兔网组织细胞可溶性RNA的分离 92

（三）环状核苷酸的分离 92

（四）猪四肢骨中抗炎蛋白肽的分离 93

（五）葡萄糖中淀粉的分离 93

第八章 气相层析法 94

第一节 概述 94

一 气相层析法的分类 94

二气相层析法的特点 94

三气相层析仪的一般流程 95

四气相层析法的一般分离原理 95

第二节 层析理论 96

一 基本概念 96

（一）色谱峰 96

（二）基线 96

（三）保留值 96

（四）色谱峰区域宽度 98

二 塔板理论 98

（一）分配平衡 99

（二）塔板理论 100

三 速率理论一范氏方程（Van Deemtor） 104

（一）涡流扩散项 104

（二）分子扩散项 105

（三）传质阻力项 106

第三节 气相层析仪 107

一 层析柱 107

（一）层析柱的分类 107

（二）固定液 107

（三）载体（担体） 110

（四）填充柱的制备 113

二 检测器 113

（一）检测器的分类 113

（二）检测器的性能指标 114

（三）热导池检测器（TC D） 116

（四）氢焰离子化检测器（FID） 118

第四节 气相层析分离条件的选择 120

一气相层析分离条件选择的指标 120

（一）柱效能 120

（二）选择性 121

（三）分离度 121

（四）分离度与柱效能、选择性及容量因子间的关系 122

二 气相层析分离条件的选择 123

（一）固定相的选择 123

（二）柱长的选择 123

（三）柱温的选择 123

（四）载气及线速的选择 124

（五）气化室温度及检测室温度的选择 124

（六）进样量的选择 125

第五节 样品的预处理 125

一 分解法 125

二 衍生物制备法 125

（一）酸类 125

（二）氨基酸 126

（三）羟基衍生物 126

（四）胺类 127

（五）醛酮类 127

（六）酯类 127

第六节 定性、定量分析 128

一 定性分析 128

（一）利用保留值定性 128

（二）利用化学反应定性 128

二 定量分析 130

（一）峰面积的测量方法 130

（二）定量校正因子 135

（三）定量方法 136

第七节 误差和数据处理 139

一 准确度与精密度 140

二 误差与偏差 140

（一）误差 140

（二）偏差 140

（三）可信度 143

三 试验数据的取舍 144

四 定量分析误差的来源 144

（一）系统误差 144

（二）非系统误差 145

（三）过失误差 145

五 提高分析结果准确度的方法 145

（一）增加平行测定次数，减小非系统误差 145

（二）检查并消除测定过程中的系统误差 145

六 定量分析允许偏差范围 146

第八节 气相层析仪故障的产生及排除方法 147

第九节 应用实例 154

一 冰醋酸的含水量测定 154

二 强力素霉含量测定 155

三 药品中糖精的分离与测定 155

四 七种常见巴比妥和导眠能的分析 156

五 中草药有效成分一砂仁挥发油的分析 157

六17α一乙炔雌三醇3一环戊醚的测定 157

七 尿中17—酮类固醇的测定 158

八 血小板中甘碳五烯酸（20： 5， W3）与花生四烯酸（20： 4，W6）比值的分析 159

九 血液中甲硫醇（M T）、乙硫醇（ET）和甲硫醚（DMS）的分离 160

十 孕妇羊水中软脂酸的测定 160

十一 对疾病的快速诊断 161

第九章 高效液相层析法 161

第一节 概述 161

一 高效液相层析法的分类 161

二 高效液相层析法的特点 162

三 高效液相层析仪的一般流程 162

第二节 基本原理 163

一 四种类型液相层析的保留值 163

（一）保留时间 163

（二）保留体积 164

（三）比移值（Rr） 164

二 四种类型液相层析的分配系数（K） 164

（一）分配层析 164

（二）吸附层析 164

（三）离子交换层析 165

（四）凝胶层析 165

三 分离度 166

（一）分离度与α值的关系 167

（二）分离度与k的关系 167

（三）分离度与n的关系 169

四速率理论方程简介 169

第三节 高效液相层析仪 170

一 高压输液泵 170

（一）对高压输液泵的技术要求 170

（二）高压输液泵的种类 171

（三）各种高压输液泵的伏缺点比较 174

二 层析柱及其填装 174

（一）层析柱 174

（二）进样器 175

（三）柱出口接头 175

（四）柱子与检测器的连接管 175

（五）层析柱的填装 175

（六）柱效检查 179

三 检测器 179

（一）紫外吸收检测器（UV） 179

（二）示差折光检测器（RI） 181

（三）移动式氢火焰离子化检测器 183

（四）荧光检测器 185

（五）介电常数检测器 186

（六）微吸附热检测器 187

（七）电导检测器 188

四 国外生产高效液相层析仪的厂家、型号及性能 191

第四节 固定相与流动相 197

一 固定相 197

（一）液一固吸附层析所用的固定相 197

（二）液一液分配层析所用的固定相 197

（三）离子交换层析所用的固定相一离子交换树脂 199

（四）凝胶层析所用的固定相 199

二 流动相 205

（一）对流动相的一般要求 205

（二）流动相的分类 205

（三）溶剂的极性 206

（四）混合溶剂 207

（五）程序洗提 207

（六）流动相的除气方法 208

第五节 高效液相层析条件的选择 208

一 液相层析分离类型的选择 208

（一）按分子量大小范围来选择层析类型 209

（二）按样品溶解度来选择层析类型 209

（三）按样品分子结构来选择层析类型 209

二 流动相的选择 210

（一）流动相与层析柱的稳定性 210

（二）流动相对固定相不能有不可逆的作用 210

（三）流动相要适用于所选择的检测器 210

（四）流动相对所分析的样品要有一定的溶解能力 210

三 固定相的选择 211

（一）固定相的形状 212

（二）填充剂的颗粒直径和表面积 212

四 操作条件的选择 212

（一）层析柱长度的选择 212

（二）层析柱内径的选择 213

（三）柱压力的选择 213

（四）进样量（进样体积）的选择 213

（五）流动相流量的测定与最佳线速 214

（六）多组分复杂的化合物的分离技术 215

第六节 定性、定量分析 216

一 定性分析 216

（一）利用保留值（V R或tR）定性 216

（二）同系列化合物的保留值对数对取代基碳原子数作图定性 216

（三）利用其他分析仪器结合定性 216

（四）利用官能团化学反应定性 217

（五）利用已知物内标法定性 217

二 定量分析 217

（一）定量操作注意事项 217

（二）定量分析方法 218

第七节 应用实例 220

一 维生素类药物的分离 220

二 激素类药物的分离 220

三 制剂中的肾上腺素类和抗组织胺类药物的测定 221

四 多烯抗真菌素的分离 222

五 三尖杉酯碱类的分离与测定 222

六 胆盐的分离和定量 223

七 青蒿素及其衍生物的含量测定 224

八 血清皮质醇和11一脱氧皮质醇的测定 225

九 血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中胆固醇的快速测定 225

第十章 液滴逆流层析 226

一 液滴逆流层析的原理 226

二 液滴逆流层析的装置 228

三 液滴逆流层析的应用 229

第十一章 电泳法 232

第一节 基本原理 232

一 电泳法的产生及发展 232

二 电泳分类 233

三 电泳的原理 233

四 影响电泳的因素 234

（一）电场强度 235

（二）质点颗粒 235

（三）缓冲溶液的离子强度 236

（四）缓冲容量和PH值 236

（五）电渗 237

第二节 几种常见的电泳 238

一 纸上电泳 238

（一）原理 238

（二）操作方法 239

（三）应用实例 241

二 醋酸纤维素薄膜电泳 243

（一）原理 243

（二）操作方法 243

（三）应用实例 244

三 聚丙烯酰胺凝胶电泳 245

（一）聚丙烯酰胺凝胶的聚合、结构及其性质 245

（二）聚丙烯酰胺凝胶的分子筛作用 248

（三）连续缓冲体系和不连续缓冲体系 248

（四）操作方法 250

四 对流免疫电泳 253

（一）原理 253

（二）操作方法 253

五 等电点聚焦电泳 255

（一）原理 255

（二）操作方法 257