人组织型纤溶酶原激活剂在鸡体内的表达特性PDF电子书下载
- 电子书积分:9 积分如何计算积分?
- 作 者:王晓利,廖成水著
- 出 版 社:中国原子能出版社
- 出版年份:2016
- ISBN:9787502276379
- 页数:180 页
第一章 绪论 4
1.1 tPA的研究进展 4
1.1.1 tPA发展简史 4
1.1.2 tPA的生物学活性 5
1.1.3 tPA的功能及应用 6
1.2 产蛋鸡卵黄中营养物的转运与沉积的研究 8
1.2.1 apo-B100对VLDLy组装过程的影响 8
1.2.2 VLDLy在卵黄中沉积的过程 9
1.3 绿色荧光蛋白的研究进展 11
1.3.1 绿色荧光蛋白的特点 11
1.3.2 绿色荧光蛋白的应用 12
1.4 减毒沙门氏菌载体系统 15
1.4.1 沙门氏菌的侵入途径 15
1.4.2 减毒沙门氏菌的研究 16
1.4.3 减毒沙门氏菌作为载体的研究 17
1.5 转基因家禽生物反应器的研究进展 20
1.5.1 转基因动物作为生物反应器 20
1.5.2 家禽作为生物反应器的独特优势 21
1.5.3 家禽转基因技术面临的困境 21
1.5.4 常规转基因动物技术在家禽转基因应用中的局限性 23
1.6 利用转基因动物生物反应器生产tPA 25
1.6.1 tPA在原核和真核细胞中的表达 25
1.6.2 tPA在转基因动物乳腺中的表达 25
1.6.3 tPA的纯化和检测 26
1.7 问题与展望 28
参考文献 29
第二章 pCDNA3-apo-△tPA特异性表达载体的构建 38
2.1 材料与方法 38
2.1.1 主要试剂 38
2.1.2 主要溶液及配制方法 38
2.1.3 主要仪器设备 40
2.1.4 DNA分析软件 40
2.2 试验方法 41
2.2.1 试验设计 41
2.2.2 引物设计与合成 42
2.2.3 对apo-B100和△tPA目的基因分别进行扩增、回收纯化、克隆 43
2.2.4 连接产物的转化、质粒提取、酶切鉴定 46
2.2.5 apo-△tPA基因融合与pCDNA3-apo-△tPA载体构建 50
2.3 结果与分析 51
2.3.1 目的基因的克隆和重组质粒的酶切鉴定 51
2.3.2 pMD18-T-apo-△tPA和pMD18-T-△tPA质粒的酶切鉴定 51
2.3.3 pMD18-T-apo-△tPA和pMD18-T-△tPA质粒的酶切鉴定 52
2.4 讨论 53
参考文献 55
第三章 重组菌△crp SL1344(pEGFP-N1-apo-tPA)的构建 55
3.1 材料 60
3.1.1 主要试剂与实验动物 60
3.1.2 主要溶液及配制方法 60
3.1.3 主要仪器设备 62
3.1.4 DNA分析软件 62
3.2 试验方法 63
3.2.1 基础载体和克隆载体 63
3.2.2 构建pMD18-T-apo-tPA载体 64
3.2.3 引物设计与合成 64
3.2.4 apo-tPA基因的扩增、回收纯化、克隆 64
3.2.5 连接产物的转化、质粒提取及鉴定 66
3.2.6 apo-tPA融合基因与pEGFP-N1-apo-tPA表达载体构建 69
3.2.7 重组菌△crp SL1344(pEGFP-N1-apo-tPA)的构建 69
3.3 结果与分析 71
3.3.1 目的基因的克隆 71
3.3.2 pMD18-T-apo-tPA质粒的PCR鉴定和酶切鉴定 71
3.3.3 pEGFP-N1-apo-tPA质粒的PCR鉴定和酶切鉴定 72
3.3.4 重组菌△crp SL1344(pEGFP-N1-apo-tPA)鉴定 73
3.4 讨论 74
3.5 小结 79
参考文献 80
第四章 减毒鼠伤寒沙门氏菌△crp SL1344作为载体的研究 84
4.1 材料与试剂 84
4.1.1 材料 84
4.1.2 主要培养基及抗生素的配制 84
4.2 试验方法 86
4.2.1 重组减毒沙门氏菌的稳定性 86
4.2.2 重组菌的转染 86
4.2.3 重组减毒沙门氏菌分布检测 86
4.2.4 减毒鼠伤寒沙门氏菌作为载体的研究 87
4.3 结果与分析 88
4.3.1 重组减毒沙门氏菌的稳定性 88
4.3.2 重组减毒沙门氏菌分布检测 88
4.3.3 减毒鼠伤寒沙门氏菌作为载体的研究 89
4.4 讨论 91
4.5 小结 93
参考文献 94
第五章 重组菌△crp SL1344(pEGFP-N1-apo-tPA)在鸡胚成纤维细胞的表达检测 94
5.1 材料 98
5.1.1 试验材料 98
5.1.2 主要试剂 98
5.2 试验方法 102
5.2.1 鸡胚成纤维细胞的分离和体外培养 102
5.2.2 重组菌△crp SL1344(pEGFP-N1-apo-tPA)感染鸡胚成纤维细胞 103
5.2.3 鸡胚成纤维细胞中表达产物的定性检测 103
5.2.4 鸡胚成纤维细胞中表达产物的ELISA检测 104
5.2.5 鸡胚成纤维细胞中表达产物的体外活性检测 105
5.3 结果与分析 106
5.3.1 鸡胚成纤维细胞的体外培养 106
5.3.2 表达产物的SDS-PAGE电泳检测 107
5.3.3 表达产物的荧光显微镜检测 107
5.3.4 表达产物的ELISA检测 107
5.3.5 表达产物的活性检测 108
5.4 讨论 109
5.5 小结 112
参考文献 113
第六章 重组菌△crp SL1344(pEGFP-N1-apo-tPA)在鸡体内表达及卵黄中沉积 113
6.1 试验方法 119
6.1.1 材料 119
6.1.2 主要器械及仪器 119
6.1.3 主要溶液及配制方法 119
6.2 试验方法 121
6.2.1 采用减毒鼠伤寒沙门氏菌介导法 121
6.2.2 融合蛋白在鸡蛋中的定性表达检测 121
6.2.3 融合蛋白在鸡蛋中的定量检测 122
6.2.4 融合蛋白在卵黄中的活性表达检测 123
6.3 结果分析 124
6.3.1 卵黄中融合蛋白的SDS电泳及其荧光镜检 124
6.3.2 apo-tPA-GFP融合蛋白在卵黄表达含量的检测 125
6.3.3 融合蛋白在卵黄中的活性表达检测 126
6.4 讨论 127
6.5 小结 134
参考文献 135
第七章 展望 142
参考文献 142
附录 147
附录一 英文缩写词表 147
附录二 pMD 18-T Vector碱基序列 149
附录三 pcDNA3.1 (-)碱基序列 152
附录四 pEGFP-N1载体序列 157
附录五 tPA碱基序列 161
附录六 tPA氨基酸序列 164
附录七 apo碱基序列 165
附录八 apo氨基酸序列 175
后记 179
- 《组织学与胚胎学习题集 第3版》周忠光主编;刘黎青,汪涛,李健副主编 2019
- 《激活语言思维》李蒨,王宏年,汤青编著 2017
- 《食品接触材料中成分迁移特性及实践》张双灵著 2018
- 《别输在不会表达上》篱落编 2019
- 《形态学实验 组织学与胚胎学分册》郝利铭,邓香群 2018
- 《动物解剖学及组织胚胎学》陈耀星,崔燕主编 2018
- 《静电纺纳米纤维与组织再生》莫秀梅主编 2019
- 《高考英语书面表达分类指导》赫贵祥 2019
- 《岩体力学特性尺寸效应与工程实践》张春生等著 2019
- 《世界贸易组织讲席计划丛书 “一带一路”沿线国家投资仲裁案例集》李天一责任编辑;(中国)陶立峰 2019
- 《润滑剂生产及应用》张远欣,王晓路主编 2012
- 《出征》宗昊,王晓龙著 2020
- 《生物化学》梁金环,徐坤山,王晓凌 2019
- 《北美分社 中国行 从传统走向现代 上》王晓钧 2018
- 《面部美容手术常见并发症及防治策略》(美)埃里·费尔内里尼,王晓军,龙笑 2019
- 《教育心理学》王晓戎主编 2018
- 《高等数学 第4版》罗晓晖,王晓艳 2018
- 《秘书实用英语》刘敏主编;崔立平,王晓宇副主编 2011
- 《民国十大悍将》王晓华,张庆军著 2019
- 《幼儿行为观察与分析》王晓芬主编 2019
- 《中国当代乡土小说文库 本乡本土》(中国)刘玉堂 2019
- 《异质性条件下技术创新最优市场结构研究 以中国高技术产业为例》千慧雄 2019
- 《中国铁路人 第三届现实主义网络文学征文大赛一等奖》恒传录著 2019
- 《莼江曲谱 2 中国昆曲博物馆藏稀见昆剧手抄曲谱汇编之一》郭腊梅主编;孙伊婷副主编;孙文明,孙伊婷编委;中国昆曲博物馆编 2018
- 《中国制造业绿色供应链发展研究报告》中国电子信息产业发展研究院 2019
- 《中国陈设艺术史》赵囡囡著 2019
- 《《走近科学》精选丛书 中国UFO悬案调查》郭之文 2019
- 《清至民国中国西北戏剧经典唱段汇辑 第8卷》孔令纪 2018
- 《中国少数民族唢呐教学曲选》胡美玲编 2019
- 《莼江曲谱 1 中国昆曲博物馆藏稀见昆剧手抄曲谱汇编之一》郭腊梅主编;孙伊婷副主编;孙文明,孙伊婷编委;中国昆曲博物馆编 2018