现代分子生物学模块实验指南 第2版PDF电子书下载

模块一 目的基因的克隆及序列分析 1

1-1 RNA的提取及检测 4

1-2 RT-PCR方法扩增目的基因 13

1-3 cDNA末端快速扩增法（RACE）合成目的基因 22

1-4目的基因的克隆 37

1-5目的基因的序列测定及初步分析 54

1-6 cDNA文库的构建及目的基因的筛选 57

1-7 mRNA差别显示克隆差异表达基因 72

1-8电子克隆法获得目的基因 80

1-9化学合成法获得目的基因 84

模块二 核酸分子杂交 87

2-1 Southern杂交 90

2-2 Northern杂交 108

2-3原位杂交 114

2-4原位RT-PCR 127

模块三 大规模基因差异表达分析 132

3-1基因芯片分析 135

3-2基于第二代高通量测序技术的转录组测序分析 140

3-3差异表达基因功能富集分析 146

3-4实时荧光定量PCR检测基因表达 151

模块四 单核苷酸多态性的检测 157

4-1衍生酶切扩增多态性序列法 160

4-2 Taqman荧光探针法 165

4-3高分辫率熔解曲线法 171

4-4定向诱导基因组局部突变技术 178

模块五 目的基因的遗传转化 182

5-1 PCR法克隆目的基因全长 185

5-2 Gateway技术构建表达载体 188

5-3农杆菌真空渗入法遗传转化 193

5-4水稻愈伤组织的遗传转化 197

5-5 RNAi发夹式载体构建及转化 203

5-6 CRISPR/Cas9技术构建表达载体 208

5-7大规模突变体库的构建 214

模块六 蛋白质样品的制备、分离与鉴定 219

6-1蛋白质样品的制备 222

6-2蛋白质的定量 227

6-3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 231

6-4双向电泳分离蛋白质 238

6-5荧光标记差异分析凝胶电泳法分析差异表达蛋白质 253

6-6蛋白质样品的质谱鉴定 264

模块七 目的蛋白质表达、纯化与检测 281

7-1目的基因原核表达质粒的构建 284

7-2谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白的表达与纯化 289

7-3组氨酸标签融合蛋白的表达与纯化 293

7-4麦芽糖结合蛋白（MBP）融合蛋白的表达与纯化 296

7-5免疫印迹检测目的蛋白质的表达 300

模块八 蛋白质相互作用的研究 305

8-1经典酵母双杂交 308

8-2 Pull-down分析蛋白质相互作用 319

8-3蛋白质亚细胞共定位 328

8-4免疫共沉淀 333

8-5 T7噬菌体展示筛选技术 339

8-6细胞质酵母双杂交系统 349

模块九 激光扫描共聚焦显微镜的应用 355

9-1激光扫描共聚焦显微镜的基本使用 358

9-2花粉管内钙离子梯度分布的观察 363

9-3动物细胞微丝微管细胞核共定位观察 369

9-4激光扫描共聚焦显微镜检测荧光蛋白 372

模块十 生物信息学软件与数据库应用 377

10-1常用分子生物学数据库检索 380

10-2常用分子生物学软件使用 391

10-3蛋白质结构及其相互作用预测 405

附录 409