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第1章　人晶状体上皮细胞的培养 1

1 引言 1

2　材料 1

3　方法 2

3.1　外植体培养 2

3.2　收集细胞 3

3.3　细胞传代 3

3.4　细胞冻存 3

3.5　细胞运输 3

4　注意事项 4

参考文献 5

1 引言 6

第2章　人导气管上皮细胞的培养 6

2　材料 7

2.1　培养器皿的包被 7

2.2　人气管上皮细胞的培养 7

2.3　人气管黏膜下层腺体的培养 8

3　方法 9

3.1　培养器皿的包被 9

3.2　人气管上皮细胞的培养 9

3.3　人气管黏膜下层腺细胞的培养 10

参考文献 12

第3章　大鼠胃黏膜上皮细胞的培养 13

1 引言 13

1.1　新生大鼠胃上皮细胞原代培养 13

3.1　新生大鼠胃上皮细胞原代培养 14

3　方法 14

2　材料 14

2.2　成年大鼠胃上皮细胞原代培养 14

2.1　新生大鼠胃上皮细胞原代培养 14

3.2　成年大鼠胃上皮细胞原代培养 15

3.3　源自大鼠胃的非转化上皮细胞系 15

3.4　源自小鼠胃的非转化上皮细胞系 16

4　注意事项 17

参考文献 17

第4章　胸腺上皮细胞的培养 19

1 引言 19

2　材料 19

2.1 新生小鼠胸腺上皮细胞的无血清培养 19

2.2　胎鼠胸腺上皮细胞无血清培养 20

2.3　人胸腺上皮细胞的无血清培养 21

3　方法 21

3.1　新生小鼠胸腺上皮细胞无血清培养 21

3.2　胎鼠胸腺上皮细胞的无血清培养 22

3.3　人胸腺上皮细胞的无血清培养 23

4　注意事项 24

参考文献 25

第5章　胆管上皮细胞的培养 26

1 引言 26

2　材料 26

2.1 胆管结扎大鼠非转化性高度分化的胆管上皮细胞的分离和培养 26

2.2　基质 28

2.3　胆管结扎／呋喃处理大鼠非转化性高度分化的胆管上皮的分离和培养 29

3　实验方法 30

3.1 胆管结扎大鼠肝脏非转化性高度分化的胆管上皮细胞的分离培养 30

3.2　胆管结扎／呋喃饲喂大鼠非转化性高度分化的胆管上皮细胞的分离培养 33

3.3　从呋喃诱导的转移性胆管瘤建立一个新的大鼠胆管瘤细胞系 34

4　注意事项 34

参考文献 35

第6章　肝脏上皮细胞的培养 37

1 引言 37

2　材料 37

3　方法 38

3.1　从新生大鼠肝脏中分离细胞 38

3.2　从成年大鼠肝脏中分离细胞 39

3.3　肝脏上皮细胞的克隆 40

3.4　培养 41

3.5　肝脏上皮细胞的保存 41

4　注意事项 42

参考文献 43

第7章　肺上皮细胞的培养 45

1 引言 45

1.1 背景 45

2　材料 48

2.1　Ⅱ型肺泡细胞的分离 48

2.2　Ⅱ型肺泡细胞的纯化 48

2.3　类Ⅰ型肺泡细胞表型的培养 48

3.2　Ⅱ型肺泡细胞的纯化 49

3　方法 49

3.1　Ⅱ型肺泡细胞的分离 49

3.3　类Ⅰ型肺泡细胞表型的培养 50

4　注意事项 50

参考文献 52

第8章　前列腺上皮细胞的分离和培养 53

1 引言 53

2　材料 54

3　方法 55

3.1　组织的获得 55

3.2　组织的准备和消化 55

3.3　培养板中类器官的培养 56

4　注意事项 57

3.4　单细胞悬液的平板培养 57

参考文献 58

第9章　牛乳腺内皮／上皮细胞血／奶屏障的培养模型 59

1 引言 59

2　材料 59

2.1 内皮细胞的分离和培养 59

2.2　上皮细胞的分离 60

2.3　细胞的冻存和解冻 61

2.4　上皮细胞培养 61

2.5　免疫组织化学 62

2.6　细胞培养模型的准备 62

3.1　内皮细胞分离 63

3　方法 63

3.2　上皮细胞分离 65

3.3　细胞的冻存和解冻 66

3.4　上皮细胞培养 67

3.5　免疫细胞化学 67

3.6　细胞培养模型的制备 68

4　注意事项 68

参考文献 70

第10章　血液-脑脊液屏障的培养——脉络上皮细胞原代培养和跨上皮转运模式 72

1　引言 72

2.3　细胞原代培养 73

2.2　组织分离 73

2.1　培养皿的包被 73

2　材料 73

2.4　二室跨上皮模型 74

2.5　免疫细胞化学研究 74

2.6　RT-PCR 75

3　方法 75

3.1　培养皿的包被 75

3.2　组织分离 76

3.3　原代细胞培养 77

3.4　双室跨上皮模型 79

3.5　免疫细胞化学研究 79

3.6　RT-PCR分析 80

4　注意事项 82

参考文献 84

第11章　分化的人导气管上皮细胞原代培养模型 85

1 引言 85

1.1　导气管上皮 85

1.2　分化的人导气管上皮原代培养的形态 85

1.3　分化的导气管上皮原代培养的用途 87

1.4　人导气管上皮原代培养的发展 89

2　材料 90

3　方法 92

3.1　人导气管组织的收集和分离 92

3.2　分离和收集 92

3.3　底物的准备 93

3.4　在膜上接种细胞 94

3.5　常规培养与长期维持 95

3.6　导气管上皮的评价 96

4　注意事项 99

参考文献 100

第12章　小鼠角质细胞的原代培养 101

1 引言 101

2　材料 101

3　方法 102

3.1　准备胶原包被的培养皿 102

3.2　准备角质细胞培养 103

4　注意事项 104

参考文献 104

1 引言 106

第13章　培养的上皮细胞的凋亡分析 106

2　材料 107

2.1 通过检测caspase 3的激活和细胞核形分析确定贴壁细胞的凋亡 107

2.2　通过免疫组织化学计数脱落的凋亡细胞 107

2.3　通过检测annexin V分析细胞膜的极性 107

2.4　分离贴壁细胞的细胞质和线粒体 108

2.5　通过免疫组织化学检测Bax活性——向线粒体的转位 108

3　方法 108

3.1　通过检测caspase 3的激活和细胞核形分析确定贴壁细胞的凋亡 108

3.2　通过免疫组织化学计数脱落的凋亡细胞 110

3.3　通过检测annexin V分析细胞膜的极性 110

3.4　分离贴壁细胞的细胞质和线粒体 110

4　注意事项 111

3.5　通过免疫组织化学检测Bax活性——向线粒体的转位 111

参考文献 113

第14章　上皮细胞的标志——角蛋白 114

1 引言 114

2　材料 116

3　方法 117

3.1 生长在盖玻片上的上皮细胞固定及渗透处理 117

3.2　细胞角蛋白免疫细胞化学染色 117

3.3　细胞角蛋白的免疫荧光染色 118

3.4　细胞多种角蛋白的同时免疫荧光染色 118

4　注意事项 118

参考文献 120

2　材料 122

第15章　上皮细胞的整联蛋白 122

1 引言 122

3　方法 123

3.1　进行显微观察的细胞传代培养 123

3.2　检测非渗透细胞中整联蛋白的细胞准备 124

3.3　检测可渗透细胞中整联蛋白的细胞准备 124

3.4　与侧面整联蛋白的接触 125

3.5　整联蛋白表达的定量分析 125

3.6　激光共聚焦显微镜 126

3.7　流式细胞计数法 126

4　注意事项 127

参考文献 128

2　材料 129

2.1　溶液 129

1　引言 129

第16章　人类正常表皮角质细胞在无血清培养系统中的分离、培养和分化 129

2.2　设备 130

3　方法 130

3.1　皮肤的准备 130

3.2　人表皮角质细胞的分离 130

3.3　人表皮角质细胞的传代 131

3.4　将具有高增殖潜能的正常人类表皮角质细胞分化为重建表皮 131

4　注意事项 131

参考文献 132

2.3　外科手术 134

2.1 患者 134

2.2　人类表皮细胞培养 134

1 引言 134

第17章　临床应用培养的自体上皮细胞治疗烧伤和皮肤表面毁损 134

2　材料和方法 134

2.4　组织学检查 135

3　结果 135

3.1　培养的上皮细胞 135

3.2　移植物的接受 136

3.3　手术结果 136

4　注意事项 140

参考文献 141

第18章　培养上皮细胞的移植 142

1 引言 142

3.1　培养上皮的准备 143

2　材料 143

3　方法 143

3.2　移植物的准备 145

3.3　冷冻与解冻技术 145

3.4　患者 145

3.5　培养上皮的移植 146

4　注意事项 147

参考文献 151

第19章　正常人类上皮的扩展培养体系——一个研究细胞迁移与增殖协同性的体外模型 153

1 引言 153

3.1　准备培养皿 154

3　方法 154

2.3　培养液 154

2.2　工具和塑料器皿 154

2.1　正常人组织 154

2　材料 154

3.2　准备样品 155

3.3　扩展培养 155

4　注意事项 155

参考文献 156

第20章　上皮细胞培养在呼吸道药物转运研究中的应用 157

1 引言 157

2　材料 157

3　方法 159

3.1　气管上皮细胞培养 159

3.2　肺泡上皮细胞培养 160

3.3　培养的上皮细胞单层用于研究药物转运 161

3.4　数据分析和计算 162

4　注意事项 165

参考文献 167

第21章　上皮细胞培养物在药物转运研究中的应用 169

1 引言 169

2　材料 169

2.1　细胞 169

2.2　仪器和消耗品 170

2.3　化学药品和缓冲液 172

2.4　药物 174

3　方法 174

3.1　在透性支持物上培养上皮细胞 174

3.2　上皮细胞单层的特性 176

3.3　药物转运研究 179

3.4　计算 184

4　注意事项 192

参考文献 194

第22章　培养上皮细胞的X射线显微分析 197

1 引言 197

2　材料 200

2.1　X射线显微分析培养细胞的冰冻切片 200

2.2　X射线显微分析培养在固体基质上的细胞 200

2.3　X射线显微分析培养在滤网膜上细胞 201

2.4　X射线显微分析分离的人鼻腔上皮细胞 201

2.5　供应商 201

3.1　培养细胞冷冻切片的X射线显微分析 202

3　方法 202

3.2　培养在固体支持物上细胞的X射线显微分析 203

3.3　在滤网薄膜上培养的细胞的X射线显微分析 204

3.4　分离的人鼻腔上皮细胞的X射线显微分析 205

4　注意事项 206

参考文献 208

第23章　ENU诱导大鼠乳腺上皮细胞突变 210

1 引言 210

2　材料 210

2.1　细胞的来源与分离 210

2.6　染色体分析 211

2.5　细胞计数 211

2.4　DNA合成 211

2.2　致癌物质脉冲 211

2.3　流式细胞仪测定细胞DNA含量 211

2.7　克隆形成 212

2.8　肿瘤生成 212

2.9　组织学 212

2.10　支原体检测 212

3　方法 212

3.1　细胞的来源与分离 212

3.2　注入致癌物质 212

3.3　细胞DNA含量的流式细胞仪检测 214

3.4　DNA合成 214

3.7　在半固体琼脂培养基中克隆及克隆形成 215

3.8　肿瘤形成 215

3.6　染色体分析 215

3.5　细胞计数 215

3.9　组织学 216

3.10　支原体检测 216

3.11　统计分析 216

4　注意事项 216

参考文献 217

第24章　ENU诱导的卵巢癌 219

1　引言 219

2　材料 219

2.1　动物与处理 219

2.2　细胞培养物的分离 219

3　方法 220

2.6　致癌性 220

3.1　动物与处理 220

2.3　流式细胞仪分析DNA分布 220

2.5　锚定依赖生长 220

2.4　染色体分析 220

3.2　细胞培养物的分离 221

3.3　DNA分布的流式细胞仪分析 222

3.4　染色体分析 222

3.5　非锚定依赖生长 222

3.6　致癌性 223

3.7　形态学研究 225

4　注意事项 225

参考文献 226

第25章　上皮细胞单层膜电容的测量 227

1　引言 227

1.1　阻抗分析理论 228

1.2　实际阻抗分析 229

2　材料 229

2.1　基本的电生理设备 229

2.2　电阻数据的获得 230

2.3　电阻数据分析 230

3　方法 231

3.1　预备试验 231

3.2　收集数据 232

3.3　参数评估 232

4　注意事项 233

参考文献 234

2　材料 236

第26章　应用光谱学评估上皮细胞融合 236

1　引言 236

2.1　细胞培养 237

3　方法 238

3.1　细胞培养 238

3.2　酚红的流量和通透性 238

4　注意事项 241

参考文献 241

第27章　肝脏上皮细胞和肝脏细胞的共培养 242

1　引言 242

2　材料 242

2.1　大鼠肝脏细胞的分离 242

3　方法 243

3.1　大鼠肝脏细胞的分离 243

2.2　共培养的准备 243

2.3　共培养糖原的染色 243

3.2　共培养的准备 244

3.3　共培养的糖原染色 245

4　注意事项 245

参考文献 248

第28章 内皮细胞与血管平滑肌细胞的共培养及由细胞内钙介导的胞间对话 250

1　引言 250

2　材料 250

2.1　VSMC的分离 250

2.4　用二维图像分析系统对Ca2＋进行测定 251

2.3　EC和VSMC的共培养 251

2.2　牛腹主动脉EC的原代培养 251

2.5　试剂应用的方案举例 252

3　方法 252

3.1 VSMC的分离 252

3.2　牛腹主动脉EC的原代培养 253

3.3　EC和VSMC的共培养 253

3.4　用二维图像分析系统对Ca2＋进行测定 254

3.5　试剂应用的方案举例 254

4　注意事项 256

参考文献 257

第29章　建立免疫细胞与上皮细胞共培养体系 258

1　引言 258

2.2　细胞培养 259

2.3　血液免疫细胞的分离和激活 259

2　材料 259

2.1 上皮细胞 259

2.4　主要的仪器 260

3　方法 260

3.1　上皮细胞培养 260

3.2　血液免疫细胞的分离 261

3.3　上皮细胞与免疫细胞共培养及免疫激活 262

3.4　通过Ussing小室分析上皮细胞离子的转移及渗透性 263

4　注意事项 264

参考文献 266

2.1　试剂 268

2　材料 268

1　引言 268

第30章　胚胎上皮细胞的外植体培养 268

2.2　取材与培养 269

3　方法 270

3.1　磁珠处理 270

3.2　细胞聚集物的准备 271

3.3　组织培养皿的处理 271

3.4　组织的分离 271

3.5　培养与固定 272

4　注意事项 273

参考文献 274

2　材料 275

2.1　上皮细胞与细菌的培养 275

1 引言 275

第31章　细菌与宿主上皮在体外的相互作用 275

2.2　上皮细胞的形态与功能的分析 277

2.3　上皮细胞的凋亡 278

2.4　主要设备 279

3　方法 279

3.1　上皮细胞和细菌的生长 279

3.2　上皮细胞的形态和功能的分析 281

3.3　上皮细胞的凋亡 283

4　注意事项 285

参考文献 287

索引 289