生物化学实验和技术PDF电子书下载

1实验室规则 1

2预习报告要求 1

第一篇 生物化学实验室规则及基本操作 1

3实验记录要求 2

4实验报告书写要求及参考格式 2

4.1 实验报告的格式 2

4.2实验报告的内容 3

4.3 实验结果 3

5仪器的清洗与清洁 3

5.1 初用玻璃仪器的清洗 3

5.2使用过的玻璃仪器的清洗 3

6清洗液的作用原理及配制 4

6.2其他洗涤液 4

6.1 洗液的配制 4

5.5玻璃和塑料器皿的干燥 4

5.4 塑料器皿的清洗 4

5.3 石英和玻璃比色皿的清洗 4

7移液器的种类和使用 5

7.1 滴管 5

7.2 移液管（吸管） 5

7.3微量进样器 5

7.4 自动取液器 6

8定量容器的种类和使用 7

8.1 量筒、量杯 7

8.2 容量瓶 7

10.1磷酸盐缓冲液 8

9.3 弹打式 8

10生物化学常用缓冲液的配制 8

9.1 搅拌式 8

9溶液的混匀 8

9.2 旋转式 8

10.2 Tris缓冲液 9

10.3有机酸缓冲液 9

10.4硼酸盐缓冲液 10

10.5氨基酸缓冲液 10

10.6 两性离子缓冲液 10

11实验室意外情况及处理措施 10

11.1 着火 10

11.2 爆炸 11

11.3 中毒 12

11.4 外伤 12

11.5 触电 13

1.1 机械破碎 14

1.2 物理破碎 14

1破碎技术 14

第二篇 基本生化实验技术 14

1.3化学与生物化学破碎 15

2萃取技术 15

2.1 液－液萃取 15

2.2 液－固萃取 16

2.3超临界流体萃取 16

2.4反胶束萃取法 18

2.5双水相分离技术 21

3沉淀和结晶技术 22

3.1 沉淀 22

3.2 结晶 26

4浓缩与干燥技术 30

4.1 浓缩技术 30

4.2 干燥技术 30

5.1 紫外和可见光光谱 36

5分光光度技术 36

5.2荧光光度分析 43

5.3原子吸收光谱 44

6电泳技术 46

6.1 电泳技术总论 46

6.2 纸电泳和乙酸纤维薄膜电泳 50

6.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 51

6.4琼脂糖凝胶电泳 56

6.5免疫电泳技术 56

6.6 等电聚焦电泳 58

6.7毛细管电泳 59

6.8 电泳结果处理 62

7层析技术 64

7.1层析技术概述 64

7.2 凝胶层析 71

7.3 离子交换层析 79

7.4 亲和层析 84

7.5具体的一些层析方法 91

7.6 高效液相色谱 94

8离心技术 104

8.1 离心原理 104

8.2 离心技术的类型 105

8.3离心机类型 106

9 PCR技术 109

9.1 PCR基本原理 109

9.2 PCR的基本过程 109

9.3 PCR实验技术要点 110

9.4 提高PCR扩增特异性 111

10膜分离技术 112

10.1 透析 113

10.2 超滤 114

11免疫技术——酶联免疫吸附测定法（ELISA） 115

11.1原理 115

11.2操作要点 115

12生物大分子制备技术 119

12.1概述 119

12.2 生物大分子制备的前处理 121

12.3 生物大分子的分离纯化 123

12.4样品的保存 124

第三篇 实验部分 126

糖类实验 126

实验一 还原糖和总糖的测定（3，5－二硝基水杨酸法） 126

实验二 可溶性总糖的蒽酮比色法测定 127

实验三 费林试剂法测定总糖 128

实验四 磷钼酸比色法测定血糖 130

实验五 黏多糖——肝素钠效价的测定 133

实验六 淀粉的提取及性质实验 134

实验七 淀粉与纤维素的测定 136

实验八 肝糖原的提取及鉴定 139

实验九 果胶的提取与胶冻的制备 140

实验十 可溶性糖的硅胶G薄层层析 141

实验十一 糖的聚酰胺薄层层析 142

实验十二 细菌细胞壁糖的薄层层析 143

实验十三 葡萄糖－1－磷酸的制备及其纯度的测定 147

脂类实验 149

实验十四 脂肪的碱水解及组分鉴定 149

实验十五 粗脂肪的定量测定——索氏抽提法 151

实验十六 皂化值的测定 152

实验十七 酸值的测定 153

实验十八 碘值的测定 154

实验十九 卵磷脂的提取及鉴定 156

实验二十 磷硫铁法测定血清胆固醇 158

实验二十一 分光光度法测定胆红素（改良J-G法） 159

实验二十二 红细胞膜的制备及其成分分析（磷脂、胆固醇） 160

氨基酸和蛋白质类实验 164

实验二十三 氨基酸的纸层析 164

实验二十四 薄层层析法分离氨基酸 166

实验二十五 甲醛滴定法测定氨基酸 167

实验二十六 华勃氏呼吸计法测定L－谷氨酸 169

实验二十七 旋光法测定谷氨酸 172

实验二十八 蛋白质的沉淀反应、颜色反应、两性反应、电荷及等电点的测定 173

实验二十九 粗蛋白的定量测定——微量凯氏定氮法 178

实验三十 紫外光吸收法测定蛋白质含量 181

实验三十一 双缩脲法测定蛋白质含量 183

实验三十二 考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）测定蛋白质含量 184

实验三十三 Folin－酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质 186

实验三十四 尿素对蛋白质的变性作用 187

实验三十五 蛋白质DNS分析法（DNS—Cl膜层析技术） 189

实验三十六 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 190

实验三十七 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 192

实验三十八 等电聚焦电泳测定蛋白质等电点 194

实验三十九 SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量 196

实验四十 凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量 198

实验四十一 酪蛋白的提取 200

实验四十二 植物叶蛋白的提取 201

实验四十三 细胞色素C的制备及其测定 203

核酸类实验 207

实验四十四 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化 207

实验四十五 植物组织中核酸的提取和测定 209

实验四十六 酵母RNA的分离与组分鉴定 211

实验四十七 DNA的琼脂糖凝胶电泳 213

实验四十八 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 215

实验四十九 DNA重组 216

实验五十 PCR聚合酶扩增DNA 218

实验五十一 逆转录聚合酶（PCR）链反应 220

酶类实验 221

实验五十二 过氧化氢酶和过氧化物酶的作用 221

实验五十三 温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响 223

实验五十四 大麦萌发前后淀粉酶活力的比较 225

实验五十五 枯草杆菌蛋白酶活力的测定 227

实验五十六 转氨酶GPT、GOT活性的测定 228

实验五十七 脲酶的动力学研究 230

实验五十八 糖化型淀粉酶活力的测定 235

实验五十九 蛋清溶菌酶的制备及活力测定 236

实验六十 正交法测定对酶活力影响的几种因素 238

实验六十一 碱性磷酸酶的分离与纯化 241

实验六十二 结晶乳酸脱氢酶（LDH）的制备 243

实验六十三 琥珀酸脱氢酶的活性测定及丙二酸的抑制作用 245

实验六十四 辣根过氧化物酶的制备及酶比活力的测定 246

实验六十五 发色底物测定大曲中α－葡萄糖苷酶活力 250

实验六十六 酵母蔗糖酶的纯化及性质研究 251

实验六十七 固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测 256

实验六十八 亲和层析法纯化胰蛋白酶 257

维生素类实验 261

实验六十九 维生素A的测定（三氯化锑比色法） 261

实验七十 还原型维生素C的测定 263

实验七十一 总维生素C的测定——2，4－二硝基苯肼比色法 264

实验七十二 荧光法测定维生素B2（核黄素） 265

实验七十三 高效液相色谱法测定脂溶性维生素 267

代谢类实验 269

实验七十四 肌糖原的酵解作用 269

实验七十五 发酵过程中无机磷的利用 272

实验七十六 糖酵解中间产物的鉴定 273

实验七十七 氨基转移反应的定性鉴定 274

实验七十八 脂肪酸的β－氧化 277

实验七十九 辛酸－硫酸铵法从人血清中纯化免疫球蛋白（IgG） 278

其他实验 278

实验八十 免疫电泳技术 279

实验八十一 ELISA法测定单克隆抗体的效价 281

实验八十二 分光光度法测定叶绿素含量 283

附录 285

附录1一些常用化合物的溶解度（20℃） 285

附录2酸、碱溶液的配制 285

附录3常用酸碱体积分数、相对密度和物质的量浓度的关系 286

附录4某些有机溶剂的主要物理常数 287

附录5一些常用酸碱指示剂 287

附录6混合指示剂 288

附录8染料和荧光标准试剂 289

附录9生物发色团 289

附录7氧化还原染料 289

附录10某些重要生化物质的摩尔消光系数 290

附录11氨基酸的一些物理常数 291

附录12元素的相对原子质量表 292

附录13调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 293

附录14调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 294

附录15气体干燥剂 294

附录16液体干燥剂 294

附录17易变质及需要特殊方法保存的试剂 295

附录18冷却剂 295

附录19常用缓冲溶液的配制 296

1 0.05mol/L甘氨酸－盐酸缓冲液 296

2 0.05mol/L邻苯二甲酸－盐酸缓冲液 296

3 磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液 296

5 0.1mol/L柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液 297

6 乙酸－乙酸钠缓冲液 297

4 柠檬酸－氢氧化钠－盐酸缓冲液 297

7磷酸盐缓冲液（PB） 298

8磷酸盐缓冲生理盐水（PBS） 298

9 0.05mol/L磷酸二氢钾－氢氧化钠缓冲液 299

10 巴比妥钠－盐酸缓冲液（18℃） 299

11 0.05mol/L Tris－盐酸缓冲液（25℃） 299

12 硼酸－硼砂缓冲液（0.2mol/L硼酸根） 300

13 0.05mol/L甘氨酸－氢氧化钠缓冲液 300

14 硼砂－氢氧化钠缓冲液（0.05mol/L硼酸根） 300

15 0.1mol/L碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液 300

附录20凝胶数据表 301

1 Sephadex G型交联葡聚糖凝胶的数据 301

2 Sephadex G型交联葡聚糖凝胶溶胀所需时间 301

3琼脂糖凝胶数据 302

4 Superose的数据 302

6 Bio-Gel P型号凝胶的数据 303

5琼脂糖凝胶Bio-Gel A型的数据 303

7交联聚苯乙烯凝胶Bio-BeadsS-X型的数据 304

8制备级Superdex凝胶过滤介质的数据 304

9 聚乙烯醇型凝胶Toypearl的数据 304

10 各种凝胶所允许的最大操作压力 305

附录21凝胶过滤用标准蛋白 305

1 凝胶过滤用低分子质量标准的组成 305

2凝胶过滤用高分子质量标准的组成 305

3凝胶过滤用分子质量标准品 306

附录22薄层层析分离各类物质常用的展层溶剂 306

附录23各类物质常用的薄层显色剂 307

附录24腐蚀性万能薄层显色剂 308

附录25主要蛋白质的分子质量 308

附录26生物化学国内外常用网址 309

主要参考书 310