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目录 1

生物化学实验室工作规程 1

第一篇　生物化学实验技术原理 3

第一章　生物化学实验样品的制备 3

一、动物样本的制备 3

二、植物材料的处理 4

三、微生物样品的处理 5

第二章　生命大分子物质的制备 6

一、材料的选择与处理 6

二、细胞的破碎 7

三、抽提 8

四、目的物初级分离 9

五、目的物的纯化与纯度鉴定 10

六、制品的浓缩、干燥和保存 11

第三章　光谱光度技术 14

一、光谱与光度 14

二、Lambert-Beer定律及应用 15

三、分光光度法在生物化学中的应用 16

四、分光光度计的结构 16

第四章　层析技术 18

一、原理 18

二、分类 18

四、主要层析技术 19

三、分配系数和迁移率 19

第五章　电泳技术 33

一、电泳的基本原理 33

二、影响电泳的主要因素 34

三、几种常见的电泳方法 36

第六章　离心技术 48

一、离心技术原理 48

二、离心技术分类 50

三、离心机的种类及其特点 51

四、离心操作时的注意事项 52

实验一 总糖和还原糖测定（3,5－二硝基水杨酸法） 53

第七章　糖和脂 53

第二篇　生物化学基础实验 53

实验二 蒽酮比色定糖法 55

实验三 血液葡萄糖含量的测定（Folin-Wu法） 56

实验四 血清中游离脂肪酸的测定 58

实验五 碘价的测定（Hanus法） 60

实验六 酸值的测定 63

第八章　蛋白质 65

实验七 蛋白质含量的测定 65

Ⅰ．凯氏定氮法测定蛋白质含量 65

Ⅱ．紫外吸收法测定蛋白质含量 69

Ⅲ．双缩脲（Biuret）法测定蛋白质含量 70

Ⅳ．Folin－酚法测定蛋白质含量 72

Ⅴ．考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量 74

实验八 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 75

实验九 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离预染的血清脂蛋白 78

实验十 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 81

实验十一 蛋白质相对分子质量的测定——凝胶层析法 84

实验十二 植物组织中游离氨基酸组分的分离鉴定（薄层层析法） 88

实验十三 蛋白质等电点的测定和两性解离 90

实验十四 酶联免疫吸附测定法 92

实验十五 影响酶作用的因素 97

第九章　酶 97

实验十六 过氧化氢酶活力的测定 99

实验十七 淀粉酶活力的测定 101

实验十八 蛋白酶活力的测定 103

实验十九 血清碱性磷酸酶总活性的测定 106

第十章　核酸 109

实验二十 植物组织中DNA的提取和纯度鉴定 109

实验二十一　DNA的琼脂糖凝胶电泳 111

实验二十二 酵母RNA的提取——苯酚法 113

实验二十三 酵母RNA的提取——浓盐法 114

实验二十四 紫外吸收法测定核酸含量 115

实验二十五 二苯胺法测定DNA含量 117

实验二十六　定磷法测定RNA含量 118

实验二十七 苔黑酚法测定RNA含量 120

第十一章　维生素 122

实验二十八 维生素C的定量测定 122

实验二十九 维生素B1的定量测定 124

第十二章　体内代谢 127

实验三十 酶促转氨基作用及其鉴定 127

实验三十一　胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 129

实验三十二 血清谷丙转氨酶（SGPT）活力测定（King氏法） 130

实验三十三 肝组织的生酮作用 133

实验三十四 糖酵解中间产物的鉴定 134

实验三十五　SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹 137

第三篇　生物化学综合实验 137

实验三十六 猪血超氧化物歧化酶的分离纯化、活性测定及同工酶鉴定 140

实验三十七　肝脏DNA的提取 145

实验三十八　PCR基因扩增 148

实验三十九　质粒DNA的提取及鉴定 150

Ⅰ．质粒DNA的小批量提取 150

Ⅱ．DNA的琼脂糖凝胶电泳 153

Ⅲ．质粒DNA限制性酶消化 155

附录 158

附录一 常用缓冲溶液的配制方法 158

附录二 硫酸铵饱和度的常用表 164

主要参考文献 166