蛋白质的凝胶电泳实践方法PDF电子书下载

第1章 聚丙烯酰胺凝胶电泳导论 1

引言 1

聚丙烯酰胺凝胶的性质 2

化学结构 2

聚合催化剂 3

有效孔径 3

实验方法 3

柱胶和板胶 4

解离或非解离缓冲系统 5

连续或不连续（多相）缓冲系统 5

pH选择 8

聚合催化剂的选择 9

凝胶浓度的选择 9

分子量测定 11

仪器 14

成胶装置和贮液槽 14

电泳所需要的其它装置 16

聚丙烯酰胺凝胶的制备和电泳 18

试剂 18

贮备液 19

凝胶混合液的制备 20

柱胶的制备 21

板胶的制备 24

样品制备 26

加样和电泳 29

电泳后的凝胶分析 30

凝胶的取出 31

蛋白质的染色及定量 32

放射性蛋白质的检定 36

糖蛋白及磷蛋白的测定 43

应用免疫学方法检测蛋白质 44

酶的检测 44

分离蛋白质的回收 45

蛋白质区带的定位 45

蛋白质的洗脱 46

基本技术的改进 47

寡肽的分子量分析 47

特殊蛋白质的分离 47

组蛋白 48

浓度梯度凝胶 52

大批量凝胶 57

微型柱胶和微型板胶 57

琼脂糖-丙烯酰胺混合凝胶 59

均一性和同一性 59

矫作物及故障 62

综合性参考文献 63

第2章 “定量”和制备性的聚丙烯酰胺凝胶电泳 64

引言 64

定量PAGE电泳仪概述 64

凝胶的选择 66

缓冲系统的选择 67

不连续的和连续的区带电泳 67

可供选择的不连续缓冲系统：Jovin输出 68

定量PAGE方法 70

策略 70

最适pH 71

堆积界限的选择 77

对蛋白质稳定和分离最佳条件的选择 77

最适孔径：Ferguson曲线图 79

同一性试验 85

分子大小和电荷异构 87

物理特性 88

最适分离孔径 92

制备性PAGE 93

凝胶切片的提取 94

连续区带洗脱 96

第3章 等速凝胶电泳 100

引言 100

操作程序 100

稳态堆积条件的最佳化 100

堆积区内的分离试验 101

凝胶切片提取法进行制备性等速电泳 102

用连续区带洗脱法进行制备性等速电泳 105

连续区带洗脱法进行制备性稳态堆积 106

第4章 分析和制备性凝胶聚焦电泳 107

应用凝胶聚焦电泳的时机 107

仪器 108

柱胶与水平板胶装置 108

电压控制装置 109

梯度监测装置 110

凝胶 111

聚丙烯酰胺凝胶 111

Sephadcx凝胶 112

琼脂糖凝胶 112

pH梯度的形成 112

“Ampholine”与缓冲液 112

两性或非两性载体组分 113

平坦的和陡峭的pH梯度 114

pH梯度的直线性 114

高离子强度下电聚焦 114

去污剂存在下的聚焦电泳 116

阳极和阴极电解液的选择 116

聚焦电泳的动力学 117

pH梯度 117

蛋白质 119

导电性 119

分析性凝胶聚焦电泳程序 120

制备性凝胶聚焦电泳 126

仪器 126

程序 127

第5章 双向凝胶电泳 129

导言 129

仪器 129

第一向凝胶 130

第二向凝胶 130

双向凝胶电泳的一般技术 131

溶液和仪器 131

样品的制备 132

第一向凝胶的制备 133

平衡第一向凝胶以便进行第二向分离 133

第二向凝胶的制备 134

多肽分布的分析 134

双向凝胶电泳的比较分析 136

根据等电点及分子量进行蛋白质双向分离 136

第一向分离 137

第二向分离 138

基本技术的改进 140

影响分离的因素 142

膜蛋白分离的改进 143

特殊类型蛋白质的分离 144

核糖体蛋白 144

组蛋白 146

核蛋白 148

第6章 蛋白质部分水解后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳肽图 151

导言 151

仪器 152

方法学 152

实验步骤 152

基本技术的改进 155

资料的解释 157

第7章 免疫电泳 158

引言 158

抗原和抗体的制备 159

抗原 159

抗体的产生 159

抗血清商品 161

抗体活性分析 161

IgG抗体的纯化 161

简易免疫电泳 162

仪器 162

试剂 163

方法 164

放射免疫电泳 165

酶检测法 166

免疫电泳法的其它改进 167

对流电泳 167

“火箭”免疫电泳 167

双向免疫电泳（交叉免疫电泳） 167

故障 170

综合性参考文献 170

附录Ⅰ 多肽检测方法文献目录 171

多肽检测的一般方法 171

染色法 171

荧光染色法 172

直接检测法 172

以放射性同位素为基础的检测方法 173

特殊多肽的检测方法 174

糖蛋白 174

磷蛋白 174

核蛋白 175

具有可以进行反应的巯基蛋白质 175

含镉蛋白 175

胶原（蛋白）及原胶原蛋白 175

免疫方法 175

酶检测法 176

附录Ⅱ 同位素标记蛋白质用试剂 180

一览表 180

试剂 181

乙酸酐(3H或14C) 181

Bolton和Hunter试剂(125I) 181

溴乙酸(14C) 182

氯乙酸(14C) 182

对-氯汞苯磺酸(203Hg) 182

对-氯汞苯甲酸(20？Hg) 183

丹磺酰氯(5-二甲胺-1-萘磺酰氯) (3H或14C) 183

DHP(二异丙基氟磷酸)（3H） 184

乙基亚胺乙酯(14C) 184

N-乙基马来酰亚胺(？4C) 185

1-氟-2,4-二硝基苯(3H或14C) 185

甲醛(14C) 186

碘(12？I) 186

碘乙酰胺(14C) 187

碘乙酸(3H或14C) 187

乙磺酰乙酰亚胺(14C) 188

马来酸酐(14C) 188

甲基3,5-二碘羟基苯亚胺(12？I) 188

异硫氰酸苯酯(24C或？?S) 189

氢硼化钾（3H） 190

氢硼化钠（3H） 190

琥珀酸酐(14C) 191

N-琥珀酰亚胺丙酸（3H） 191

附录Ⅲ 选择蛋白质标志物的分子量及等电点 193

附录Ⅳ 供应电泳专用附件的厂商 195

参考文献 196