简明基因工程原理PDF电子书下载

第一章 绪论 1

一、基因工程的概念 1

二、基因工程发展史 2

三、基因工程的巨大意义 3

四、生物技术与基因工程 4

五、我国的基因工程 9

六、基因工程的安全性问题 10

七、我国的《基因工程安全管理办法》 12

第二章 基因工程的流程 15

一、基因工程的基本步骤 15

二、基因工程的上游工程——基因克隆 15

三、基因工程的流程 16

四、基因工程下游工程的分化 16

五、原核细胞表达系统 18

六、植物基因工程 19

七、昆虫或动物细胞表达系统 21

八、动物基因工程 22

九、基因治疗 23

第三章 DNA的分子特性与利用 25

一、脱氧核糖核酸 25

二、DNA变性 26

三、复性与杂交 27

四、DNA的复制 28

五、DNA的修复 29

六、生物的基因重组 29

七、基因 30

八、基因表达及其调控 31

九、启动子和增强子 33

十、DNA的分离和提取 34

十一、基因突变 39

十二、转座子及其在基因工程中的应用 42

第四章 各种工具酶 45

一、工具酶与基因工程 45

二、限制酶 46

三、DNA聚合酶 51

四、DNA连接酶 54

五、S1核酸酶 55

六、Bal31核酸酶 55

七、碱性磷酸酶 56

八、逆转录酶 56

第五章 目的基因的制取 58

一、目的基因 58

二、鸟枪法 60

三、物理化学法 61

1．物理化学法分离基因的基本原理 61

2．物理化学法分离基因的主要方法 61

四、化学合成基因 62

五、酶促逆转录合成法 63

六、聚合酶链式反应 63

七、基因文库的概念 68

八、基因文库的大小 68

九、基因组文库 70

十、cDNA文库 72

第六章 基因载体的选择与构建 75

一、基因克隆与基因重组 75

二、基因载体 75

三、载体的报告基因（标记基因） 76

四、细菌质粒载体 79

1．质粒的概念 79

2．质粒DNA的分子特性 79

3．质粒的复制和遗传 80

4．质粒的报告基因 81

5．质粒的转座子 82

6．质粒的改造 82

7．质粒载体的条件 82

8．质粒载体的多克隆位点 83

9．辨色鉴别重组克隆的质粒载体 84

10．常用的质粒载体 84

11．质粒DNA的提取 85

五、噬菌体载体 87

1．噬菌体和噬菌体载体的特点 87

2．λ噬菌体 88

3．溶菌性反应与溶源性反应 90

4．λ噬菌体的包装 91

5．野生型λ噬菌体的改造 92

6．单链噬菌体载体 95

7．粘性质粒载体 96

六、动物病毒载体 97

1．动物病毒载体的特点 97

2．杆状病毒载体 98

3．SV40载体 100

4．痘苗病毒载体 103

5．逆转录病毒载体 104

6．其他动物病毒载体 107

七、酵母质粒载体 107

1．酵母质粒载体的特点 107

2．整合载体 108

3．自我复制载体 108

4．酿酒酵母载体系统 109

第七章 基因与载体连接（重组与克隆） 112

一、基因重组的概念 112

二、亚克隆 113

三、基因重组对载体的要求 114

四、连接前的处理 116

五、粘性末端连接 118

六、平端连接 121

七、人工接头连接 122

八、同聚物加尾连接 124

九、人生长激素基因的克隆 126

第八章 重组DNA导入受体细胞 132

一、克隆与导入方法 132

二、受体细胞 133

三、大肠杆菌宿主菌 133

四、受体细菌的感受态 134

五、转化反应 135

六、磷酸钙沉淀法 137

七、体外包装转染法 138

八、共转化 139

九、电转化 141

十、微弹技术 142

十一、微注射技术 143

十二、脂质体导入法 144

十三、转化酵母菌 146

第九章 重组体的筛选 148

一、转化子与筛选的概念 148

二、筛选方法的类型 148

1．快速细胞破碎法 149

2．煮沸法 150

3．基因定位法 150

4．DNA序列测定 156

5．依赖具有筛选性的载体 161

6．MRNA翻译检测 163

7．核酸探针与菌落原位杂交 163

8．Southern印迹杂交试验 167

9．免疫化学方法 167

10．酶免疫检测分析 172

第十章 目的基因的表达 174

一、基因工程的目的 174

二、制约目的基因表达的因素 174

三、阅读框架 175

四、启动子与转录的影响 175

五、翻译过程对表达的影响 177

六、表达体系与表达产物的形式 179

七、大肠杆菌表达体系 180

八、人生长素基因在大肠杆菌中表达 181

九、构建分泌型表达载体 186

十、真核细胞表达体系的特点 187

十一、酵母表达体系 188

十二、昆虫或昆虫细胞表达体系 190

十三、哺乳动物细胞表达体系 192

十四、新型的胞浆表达体系 193

十五、表达检测系统 194

第十一章 克隆的策略 199

一、克隆方法的分类 199

二、用质粒载体进行克隆 202

三、用λ噬菌体进行克隆 204

四、用粘粒载体进行克隆 204

五、Northern杂交法 205

六、cDNA文库筛选法克隆 206

七、杂交筛选法 207

八、磁珠捕捉法 208

九、产物导向法 210

十、岛屿获救PCR法 211

十一、Notl连锁片段筛选法 213

十二、外显子捕捉法与外显子扩增法 214

十三、动物园杂交法（zoo blot） 216

十四、剪接位点筛选法 216

十五、作图克隆法 217

十六、利用杂种细胞克隆法 220

十七、消减杂交法 221

十八、相同序列克隆法 223

十九、差异显示法 224

二十、显微切割与微克隆法 226

二十一、互补克隆法 227

二十二、插入诱变法 228

二十三、其他克隆方法 230

第十二章 克隆DNA的定向诱变 232

一、基因突变与人工诱变技术 232

二、缺失突变和插入突变 234

三、碱基置换 236

四、寡核苷酸的定向诱变 239

五、定向诱变与蛋白质工程 242

第十三章 基因打靶、遗传标记与检测 243

一、基因打靶技术 243

二、限制性片段长度多态性 247

三、随机扩增多态DNA技术 248

四、单链DNA构象多态性技术 249

五、扩增阻滞突变系统 250

六、表面呈现技术 253

七、原位DNA合成技术 256

八、连接酶链反应 257

九、双标记寡核苷酸捕获分析法 260

第十四章 反义技术与ribozyme的应用 261

一、反义寡核苷酸 261

二、反义技术的原理 262

三、ASON的改造与反义药物 263

四、核酶（ribozyme） 263

1．ribozyme的克隆和应用价值 264

2．用于兽医和畜禽抗病育种 266

3．用于植物基因工程 267

4．用于基因治疗 268

主要参考文献 271

索引 274