生化实验方法和技术 第2版PDF电子书下载

目录 1

序 1

第一章 糖 1

实验一 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 1

实验二 细菌细胞壁糖的薄层层析 3

实验三 葡糖-1-磷酸的制备及其 8

纯度测定 8

第二章 脂类 11

实验四 红细胞膜的制备及其结构成分的分析 11

实验五 脂质体的制备 18

实验六 包裹药物脂质体的制备 20

实验七 靶向脂质体的制备 24

实验八 猪心肌线粒体、亚线粒体的制备及可溶性腺苷三磷酸酶的提纯 25

实验九 猪心线粒体腺苷三磷酸酶复合体在脂质体上的重组 29

第三章 蛋白质 34

实验十 苯甲酰L-酪氨酰胺的合成 34

实验十一 N-乙酰-L-酪氨酸乙酯的合成 38

实验十二 双甘二肽的合成 41

实验十三 胱氨酸的制备 45

实验十四 总氮量的测定？微量凯氏定氮法 47

实验十五 蛋白质及肽的N末端氨基酸FDNB分析法 52

实验十六 蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法——聚酰胺薄膜层析技术 60

实验十七 羧肽酶法测定蛋白质及肽的C末端氨基酸 66

实验十八 蛋白质及肽的序列分析 68

PTH分析法 68

实验十九 DABITC/PITC双偶合法测定蛋白质序列 72

实验二十 邻苯二甲醛荧光分析法及其在肽检测中的应用 76

实验二十一 血清蛋白质的纸上电泳 79

实验二十二 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离蛋白质 85

实验二十三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量（Mr） 100

实验二十四 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量（Mr） 106

实验二十五 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 111

实验二十六 蛋白质相对分子质量（Mr）的测定——凝胶层析法 116

实验二十七 细胞色素c的制备及测定 124

实验二十八 鸡卵类粘蛋白的制备 129

实验二十九 牛脑钙调素的分离纯化及活性测定 133

［附］蛋白质含量的测 136

定法： 136

［附1］双缩脲法 136

［附2］Folin-酚试剂法 137

（Lowry法） 137

［附3］考马斯亮蓝染色法 138

（Bradford法） 138

［附4］紫外吸收法 140

第四章 酶 143

实验三十 胰蛋白酶的动力学研究 144

实验三十一 脲酶的动力学研究 152

［附］康维微量等温蒸馏 156

定氨法 156

实验三十二 酰化酶Ⅰ的制备及活力测定 159

［附］氨基酸含量的测定法 163

［附1］茚三酮溶液显色法 163

［附2］甲醛滴定法 165

实验三十三 猪胰蛋白酶的结晶及 167

活力测定 167

实验三十四 亲和层析法纯化胰蛋白酶 175

实验三十五 乳酸脱氢酶同工酶的制备及活力测定 180

实验三十六 辣根过氧化物酶的制备及活力测定 188

实验三十七 大肠杆菌碱性磷酸酯酶的制备 192

实验三十八 羧肽酶Y的分离提纯 198

实验三十九 亲和层析法分离牛脾二肽酶Ⅰ 203

实验四十 亲和层析法纯化胃蛋白酶 209

实验四十一 限制性内切酶EcoRI的纯化及活力测定 212

实验四十二 铜锌超氧化物歧化酶的分离、纯化及其纯度鉴定 217

实验四十三 利用苯甲脒-琼脂糖凝胶亲和层析法纯化尿激酶 223

第五章 核酸 230

实验四十四 动物肝脏RNA的制备（苯酚法）和纯度测定 230

［附1］紫外吸收法测定核酸 232

含量 232

［附2］二苯胺显色法测定 233

DNA含量 233

RNA含量 234

［附3］地衣酚显色法测定 234

［附4］定磷法测定核酸 235

含量 235

实验四十五 酵母和白地霉RNA的制备（稀碱法和浓盐法） 237

实验四十六 酵母转移RNA的制备 238

（苯酚法） 238

实验四十七 用硫氰酸胍-酚-氯仿分离提取RNA及mRNA的纯化 240

实验四十八 小牛胸腺DNA的制备 243

（浓盐法） 243

实验四十九 细胞核的分离 245

实验五十 大鼠肝细胞染色质的分离 247

实验五十一 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 250

实验五十二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 253

实验五十三 脉冲电场凝胶电泳分离大分子DNA 257

实验五十四 离子交换柱层析法分离核苷酸 260

实验五十五 高压纸上电泳法分析鉴定核苷酸 266

实验五十六 DNA重复序列与单一序列的分离——DNA的羟基磷灰石柱层析与DNA复性动力学方法 269

实验五十七 肌二磷和胞二磷的化学合成 275

第六章 基因工程和蛋白质工程技术 281

实验五十八 质粒的分离、纯化和鉴定 282

［附1］质粒DNA的小量 290

制备 290

一、碱裂解法 291

二、煮沸法 292

三、小量一步提取法 293

［附2］质粒DNA的大量 294

提取 294

一、碱裂解法 294

二、SDS裂解法 295

一、氯化铯-溴乙锭梯度平衡 296

超速离心法 296

［附3］质粒DNA的纯化 296

三、煮沸法 296

二、柱层析法 298

实验五十九 DNA探针的同位素 299

标记法 299

一、双链DNA探针的 300

标记 300

（一）切口移位法 300

［附］DE81滤纸吸附法测定 301

放射性标记的参入比 301

（二）随机引物延伸法 301

二、DNA末端标记法 303

（一）T4噬菌体多核苷酸 303

激酶标记DNA5′端 303

记双链DNA3′末端 305

（二）T4DNA聚合酶标 305

实验六十 用光敏生物素标记核酸探针检测基因 306

实验六十一 M13噬菌体载体DNA的 310

重组和克隆 310

实验六十二 核酸分子杂交及Southern印迹术 314

实验六十三 聚合酶链式反应（PCR）技术 319

实验六十四 cDNA的合成及克隆——逆转录与PCR偶联法 322

实验六十五 λgtll噬菌体表达文库的筛选 325

一、寡聚核苷酸探针筛 325

选法 325

二、免疫学筛选法 329

实验六十六 DNA序列分析——化学法 331

实验六十七 DNA序列分析——酶法 336

一、单链DNA模板法 337

二、双链DNA模板法 340

实验六十八 寡聚核苷酸引物诱导的定点突变 342

第七章 免疫化学 346

实验六十九 动物的常规免疫和抗血清IgG类的纯化 348

实验七十 双向免疫扩散法及免疫电泳 351

一、双向免疫扩散测定法 353

二、微量免疫电泳法 356

三、对流免疫电泳 359

四、单向定量免疫电泳 360

（火箭电泳） 360

五、双向定量免疫电泳 362

实验七十一 酶联免疫吸附测定法 364

实验七十二 免疫吸附亲和层析法分离纯化甲胎蛋白 371

实验七十三 用免疫荧光法观察甲胎蛋白在人胚肝中的分布 379

实验七十四 单克隆抗体技术 384

一、融合用细胞的制备 386

二、细胞融合 388

三、杂交瘤细胞的选择 390

培养 390

四、特异性抗体的检测 390

五、杂交瘤细胞的克隆化 393

六、杂交瘤细胞的冻存 395

七、杂交瘤细胞株染色体 396

检测 396

八、单克隆抗体的大量 396

制备 396

九、单克隆抗体的纯化 397

十、单克隆抗体的保存 401

十一、单克隆抗体Ig类型 401

的鉴定 401

实验七十五 固相免疫法检测抗原纯度和相对分子质量及Western印迹术 403

第八章 组织代谢 407

实验七十六 瓦氏呼吸计测压法及组织呼吸强度的测定 407

一、瓦氏呼吸计测压法 407

二、组织耗氧量的测定 413

实验七十七 D-系-α-氨基酸的氧化脱氨基作用 417

［附］等温蒸馏定氨法 420

实验七十八 用液氮固定法研究动物的新陈代谢——自然缺氧条件下机体乳酸含量变化的测定 422

实验七十九 用滤纸定量层析法研究大白鼠在自然缺氧状态下脑组织中游离氨基酸含量的变化 428

第九章 放射性同位素 439

实验八十 放射性焦磷酸盐（32PPi）的制备 446

实验八十一 酶促合成高比放射性γ-32磷-腺苷三磷酸 449

实验八十二 放射性焦磷酸（32PPi）-腺苷三磷酸交换法测定核糖核酸连接酶活性 454

附录 457

一、实验室安全及防护知识 457

二、实验室常识 458

三、玻璃仪器的洗涤及各种洗液的 459

配制法 459

四、缓冲溶液 460

五、生物化学中某些重要化合物的 468

Mr及pK值 468

六、某些重要生化物质的摩尔消光系数 469

七、氨基酸的一些物理常数 471

八、某些蛋白质的物理性质 473

九、核苷、核苷酸及其衍生物的一些物理常数 473

十、某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数 479

十一、指示剂 479

十二、冷却剂和干燥剂 481

十三、硫酸铵饱和度的常用表 482

十四、测压法常用物理常数表 483

十五、同位素资料 485

十六、离心机转数（r/min）与相对离心力（RCF）的换算 486

十七、试剂的配制及一些常用数据表 486

十八、层析法常用数据表及性质 491

（一）离子交换纤维素 491

（二）常用离子交换树脂某些物理 492

化学性质表 492

（三）各类常用离子交换树脂型号 495

对照表 495

（四）聚丙烯酰胺凝胶的技术 496

数据 496

（五）琼脂糖凝胶的技术数据 496

（六）各种凝胶所允许的最大 496

操作压 496

（七）如何选择层析介质 497

总览 498

（八）凝胶过滤层析介质分离范围 498

（九）凝胶过滤层析介质的技术 499

数据 499

（十）离子交换介质在纯化步骤 501

中的选择 501

（十一）离子交换层析介质的 501

技术数据 501

（十二）疏水层析介质的技术 502

数据 502

（十三）亲和层析介质的技术 503

数据 503

（十四）反相层析介质的技术 507

数据 507

（十五）在位清洗和在位消毒 507

（一）有关核酸的常用数据 508

十九、分子生物学及基因工程常用数据 508

（二）常见限制性内切酶酶切 509

位点 509

（三）酶类 512

（四）缓冲液 513

（五）贮存液 517

（六）与DNA凝胶电泳有关的 521

数据 521

（七）细菌培养基和抗生素 522

（八）杂交试验中用于降低背景 526

的封闭剂 526

（九）溴化乙锭溶液的净化处理 527

二十、一些常用单位 528

二十一、一些重要的生物化学期刊及 529

手册 529