生物大分子的液相色谱分离和制备 第2版PDF电子书下载

第一版前言 1

第一章 绪论 1

第二版前言 1

1.1 生物大分子液相色谱分离和制备的发展动向 2

1.2 分离介质的发展 3

1.3 分离模式的考虑 5

1.3.1 体积排阻色谱 5

1.3.2 离子交换色谱 6

1.3.3 反相色谱 6

1.3.4 疏水作用色谱 7

1.3.5 亲合色谱 8

1.4 分离规模的扩大 8

第二章 液相色谱的基本原理和参数 12

2.1 保留值 13

2.1.1 保留时间（tR）和保留体积（VR） 13

2.1.3 容量因子（R＇） 14

2.1.2 调整保留时间（tK）和调整保留体积（VR） 14

2.1.4 死时间lR的测定 16

2.1.5 选择性（α＇）和相对保留值（α） 17

2.2 柱效率 18

2.2.1 塔板理论的提出 18

2.2.2 塔板数和塔板高度的计算 18

2.3 分离效能总指标K1和分离度R 21

2.3.1 定义 21

2.3.2 K1（或R）与α＇（或α）和N之间的关系 22

2.4 谱带扩张 24

2.4.1 柱内谱带扩张 25

2.4.2 柱外谱带扩张 30

2.5 渗透性 32

第三章 高效液相制备色谱的分离选择 34

3.1 制备色谱分离的一般考虑 35

3.1.2 切割收集技术 36

3.1.1 制备色谱运行的模式 36

3.1.3 微量组分的制备 40

3.1.4 实验条件的一般选择 41

3.2 制备色谱模型的讨论 41

3.3 实验条件的选择与产量 44

3.3.1 柱体积与填料 44

3.3.2 流动相 47

3.3.3 样品的溶解度 54

3.3.4 样品量 56

3.3.5 样品纯度的确定 57

3.3.6 最佳制备量 57

3.4 制备色谱仪 59

3.4.1 泵系统 59

3.4.2 检测系统 61

3.4.3 进样系统 62

3.4.5 循环系统 66

3.4.4 样品的收集 66

3.5 中低压液相制备色谱 69

3.5.1 低压液相色谱 69

3.5.2 中压液相色谱 70

第四章 制备柱及相关技术 76

4.1 制备规模 76

4.1.1 在分析柱上的制备 76

4.1.2 小规模的制备 76

4.1.3 大规模的制备 77

4.2 色谱柱和装填技术 77

4.2.1 色谱柱 77

4.2.2 色谱柱的装填技术 82

4.3 径向流动色谱 84

4.3.1 径向流动色谱设计的原理 85

4.4.1 灌注色谱概念的提出 86

4.4 灌注色谱 86

4.3.2 径向流动和轴向流动的比较 86

4.4.2 灌注色谱的基本特征 87

4.5 柱容量及其影响因素 90

4.6 蛋白质定量与纯度标准 95

4.6.1 蛋白质定量 95

4.6.2 蛋白质纯度标准 96

第五章 顶替色谱 100

5.1 顶替色谱的原理 100

5.2 顶替色谱的特性 101

5.2.1 操作线 101

5.2.2 溶质的流速 102

5.2.3 总效率 104

5.3 顶替色谱实验条件 106

5.3.1 顶替剂及其选择 106

5.3.2 流动相的选择及影响 108

5.3.3 填料及其影响 109

5.3.4 柱直径及其影响 111

5.4 溶质-溶质顶替色谱 111

5.4.1 实验设计 111

5.4.2 操作参数 113

5.4.3 多次顶替 117

第六章 体积排阻色谱 119

6.1 体积排阻色谱理论 119

6.1.1 保留模型 119

6.1.2 保留机理 120

6.2 体积排阻色谱理论模型 122

6.2.1 硬球体溶质模型 123

6.2.2 刚性分子溶质模型 123

6.2.3 任意平面孔模型-刚性溶质 123

6.3 体积排阻色谱填料 124

6.3.1 有机填料 124

6.2.4 任意弯曲溶质模型 124

6.3.2 无机填料 125

6.3.3 适合生物大分子分离的填料 125

6.4 体积排阻色谱参数的讨论 126

6.4.1 峰容量 127

6.4.2 聚合物在体积排阻色谱上的分离 127

6.4.3 分子量的准确测定 129

6.5 体积排阻色谱操作条件 131

6.5.1 填料 131

6.5.2 柱长 131

6.5.3 洗脱液 132

6.5.4 流速 133

6.5.5 样品容量 133

6.5.6 蛋白质在变性洗脱条件下的分离 134

6.6.1 蛋白质的分离 135

6.6 蛋白质在体积排阻色谱上的保留行为 135

6.6.2 蛋白质的分子量与容量因子（R＇） 136

6.6.3 分配系数（Kd） 137

6.6.4 pH不同时的分配系数与离子强度 137

6.6.5 在一定pH条件下蛋白质的分离度和离子强度 138

6.6.6 离子强度恒定时pH对分配系数的影响 139

第七章 离子交换色谱 143

7.1 填料 143

7.1.1 有机树脂填料 144

7.1.2 无机-有机复合填料 145

7.1.3 表面改性的无机填料及合成方法 145

7.2 参数讨论 151

7.2.1 孔径的影响 151

7.2.2 柱长的影响 152

7.2.3 流速的影响 153

7.2.4 pH的影响 153

7.2.5 离子强度的影响 158

7.3 保留模型 160

7.4 离子交换色谱分离和纯化蛋白质 162

7.4.1 大豆中混合蛋白质的分离和纯化 162

7.4.2 细胞色素C663的分离和纯化 166

7.4.3 β-半乳糖苷酶和磷酸酶的分离和纯化 167

7.4.4 卵清蛋白（OVA）和大豆蛋白（STI）混合物的纯化 168

7.4.5 TGF-α-β-半乳糖苷酶的分离 169

7.4.6 肿瘤坏死因子（TNF）的分离 170

第八章 反相液相色谱 173

8.1 溶质保留机理与收敛性 173

8.1.1 保留机理 173

8.1.2 保留值收敛性 175

8.2 填料及一般合成方法 185

8.2.1 填料概述 185

8.2.2 填料合成的一般方法 187

8.3 分离和制备色谱的选择 189

8.3.1 柱容量与分离度 190

8.3.2 色谱柱的柱效率与蛋白质的分离度 192

8.3.3 流动相的选择 192

8.3.4 柱温的影响 195

8.3.5 流速的影响 197

8.4 蛋白质在柱上的回收率 198

8.4.1 上柱量与回收率的关系 198

8.4.2 洗脱系统与回收率的关系 199

第九章 高效疏水作用色谱 202

9.1 高效疏水作用色谱的原理 202

9.2 高效疏水作用色谱填料 205

9.2.1 基质 205

9.2.2 配基 206

9.3 实验条件 216

9.3.1 盐的影响 217

9.3.3 pH值的影响 219

9.3.2 离子强度的影响 219

9.3.4 柱温的影响 221

9.4 疏水作用色谱与反相色谱的区别 223

第十章 亲合色谱 229

10.1 亲合色谱的概念及其理论模型 229

10.1.1 概念 229

10.1.2 解离常数和分配系数 230

10.2 亲合色谱的基质及控制因素 232

10.2.1 理想基质的性质 232

10.2.2 基质的控制因素 233

10.2.3 具有实用价值的基质 235

10.3 亲合色谱填料的合成 235

10.3.1 配位体的选择 235

10.3.2 基质的活化和功能化 238

10.3.3 间隔臂分子 241

10.3.4 间隔分子与配位体偶联 242

10.4 亲合色谱的洗脱 246

10.4.1 平衡和平衡缓冲液 246

10.4.2 蛋白质的浓度和温度效应 246

10.4.3 流速和样品体积 247

10.4.4 洗脱方法 248

10.5 蛋白质及其它生物大分子的分离和纯化 250

10.5.1 纯化调节细胞功能的大分子和复杂的生物结构 250

10.5.2 亲合色谱在分析化学中的应用 253

第十一章 蛋白质的制备色谱设计 262

11.1 蛋白质分析色谱和蛋白质制备色谱 262

11.2 吸附-解附的理论 263

11.2.1 疏水作用色谱中的吸附-解附 267

11.2.2 亲合色谱中的吸附/解附 268

11.3 制备规模的扩大 268

11.3.1 样品的来源 268

11.3.3 色谱柱超载 269

11.3.2 循环系统 269

11.3.4 柱体积的增大 271

11.3.5 蛋白质的产量与产率 271

11.4 混合蛋白质在反相色谱上的制备 272

11.4.1 实验方法运行设计 272

11.4.2 实验条件 272

第十二章 高效液相色谱的应用 279

12.1 核苷和核苷酸的分离 279

12.1.1 pH对保留行为的影响 279

12.1.2 流速对核苷分离的影响 280

12.1.3 甲醇含量的变化对容量因子R＇的影响 281

12.1.4 核苷和核苷酸的分离 282

12.2 糖蛋白的分离和纯化 290

12.2.1 基因重组人体白细胞IL-2的分离和纯化 291

12.2.2 立体排阻色谱纯化膜糖蛋白抗原 293

12.2.3 亲合色谱分离纯化多糖人体免疫球蛋白的亚类 295

12.2.4 基因重组人体白细胞干扰素的反相色谱分离和纯化 296

12.3 灌注快速蛋白质色谱 299

12.3.1 灌注反相色谱分离血管扩张素异构体 299

12.3.2 灌注离子交换色谱快速分离蛋白质 302

12.3.3 灌注疏水作用色谱快速分离免疫球蛋白 302

12.3.4 灌注免疫生物金属络合物亲合色谱 304

12.3.5 灌注生物特异性的亲合色谱 304

12.4 单克隆抗体的分离和纯化 305

12.4.1 分析分离系统 305

12.4.2 分离纯化系统 308

12.4.3 腹水和组织培养中单克隆抗体的分离和纯化 310

12.5 人体血清中脱脂蛋白质的分离和纯化 313

12.5.1 样品的制备 313

12.5.2 色谱分离纯化系统 314

12.6 α-淀粉酶的分离和纯化 316

12.6.1 亲合色谱分离纯化α-淀粉酶 316

12.6.2 疏水作用色谱分离纯化α-淀粉酶 319

12.6.3 离子交换色谱快速纯化α-淀粉酶 321

第十三章 生物样品的制备 325

13.1 材料选择及预处理 325

13.2 细胞的破碎 326

13.2.1 物理法 326

13.2.2 生物化学法 327

13.2.3 化学处理法 327

13.3 提取 327

12.3.1 蛋白质和酶的提取 328

12.3.2 核酸的提取 330

13.4 蛋白质和酶的初步提纯 331

13.4.1 核酸沉淀法 331

13.4.4 选择变性法 332

13.5 核酸的水解 332

13.4.5 盐析法 332

13.4.2 蛋白质沉淀法 332

13.4.3 改变pH值 332

13.6 生物多糖的分离提取 334

附录一 国外常用的适于生物大分子分离分析的高效液相色谱填料 335

表1 高效体积排阻色谱（SEC）填料 335

表2 反相色谱（PRC）填料（大孔） 338

表3 疏水作用色谱（HIC）填料 341

表4 离子交换色谱（IEC）填料 342

1.亲合色谱常用的底物（基体） 346

表5 亲合色谱（AFC）填料 346

2.一些代表性的亲合色谱填料举例 347

附录二 典型蛋白质性质 348

表1 一些蛋白质的分子量 348

表2 几种蛋白质的等电点 349

表3 不同类型的蛋白质的溶解度 349

索引 350

英文目录 354