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目录 1

第一部分 DNA的提取与纯化 1

引言 1

第一章 细胞总DNA的分离提取 袁建刚 3

第一节 从培养的动物细胞中提取高分子量DNA 3

第二节 细菌细胞DNA的提取 6

第三节 从动物组织制备高分子量DNA 8

第二章 DNA的羟基磷灰石柱层析与DNA复性研究方法 袁建刚 12

第一节 DNA的羟基磷灰石柱层析 12

第二节 DNA复性动力学简介 15

第三节 与DNA复性研究有关的一些实验方法 20

第三章 质粒DNA的大量抽提与纯化 王年 26

引言 26

第一节 菌体的培养和质粒DNA的扩增 27

第二节 菌体的裂解 28

第三节 质粒DNA的纯化 30

第四章 λ噬菌体DNA的制备 强伯勤 36

第一节 裂解生长的λ噬菌体的感染及其纯化 36

第二节 溶原型噬菌体的诱导及其纯化 40

第三节 λDNA的抽提 41

第五章 动物病毒的组织培养及核酸提取 王淑凤 43

第一节 动物病毒的组织培养技术 43

第二节 病毒的提纯和病毒核酸的提取 48

第三节 病毒培养常用溶液的配制 52

参考文献 55

第二部分 真核生物mRNA的分离、纯化与鉴定 57

引言 57

第一章 真核生物mRNA的分离与纯化 张福徽 58

第一节 从聚核蛋白体中分离RNA 58

第二节 从细胞内直接分离RNA 59

第三节 mRNA的纯化 62

第四节 注意事项 64

第二章 mRNA的鉴定 张福徽 66

第一节 琼脂糖凝胶电泳法 66

第二节 无组胞体系蛋白质的生物合成 66

第三节 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 68

第四节 免疫沉淀法 70

参考文献 70

第三部分 限制性内切酶及其应用 72

第一章 限制性内切酶 强伯勤余曙华 72

第一节 酶的命名、分类和识别特异性 72

第二节 限制性内切酶的纯化方法 79

第三节 酶活力的测定和制剂质量检验 84

第四节 酶的反应条件和影响酶活性的因素 87

第二章 限制性内切酶的应用 余曙华强伯勤 100

第一节 DNA的酶切降解和再连接 101

第二节 DNA物理图谱分析 107

第三节 限制性内切酶降解DNA的有关公式 112

参考文献 115

第四部分 核酸的凝胶电泳 116

第一章 DNA的凝胶电泳 杨善蓉 116

第一节 电泳装置和基本技术 116

第二节 DNA凝胶电泳的应用 123

第三节 从凝胶上回收DNA片段 125

第二章 RNA的电泳 王申五 129

第一节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 129

第二节 RNA乙二醛变性琼脂糖凝胶电泳 134

参考文献 138

第五部分 核苷酸序列分析 139

第一章 化学法测定DNA的核苷酸序列 黄秉仁蔡良琬阎珺 139

第一节 化学法测定DNA核苷酸序列的基本程序 139

第二节 设备、材料及使用 140

第三节 DNA片段的制备 141

第四节 DNA片段的末端标记 143

第五节 单末端标记DNA片段的分离和提纯 147

第六节 特异性的碱基化学裂解反应 150

第七节 测序胶的制备及电泳 155

第八节 放射自显影X光片的固定 157

第九节 化学法测序的改进和展望 158

第十节 小结 158

参考文献 159

第二章 末端终止法测定DNA的核苷酸序列 琦祖和 160

第一节 概述 160

第二节 M13mp载体在末端终止法中的应用 162

第三节 被测DNA的分子克隆 169

第四节 制备引物 175

第五节 末端终止法序列测定 177

第六节 测序用聚丙烯酰胺凝胶电泳 184

第七节 序列的解读及常见问题 187

参考文献 190

第三章 RNA的核苷酸序列测定 程振起肖啸 191

第一节 器皿和溶液的准备 192

第二节 小分子RNA的提取与纯化 193

第三节 RNA的末端标记及大分子RNA的特异性降解 195

第四节 序列分析酶解直读法 202

第五节 化学裂解直读法 209

第六节 序列分析双向直读法 216

参考文献 221

第六部分 核酸的分子杂交 222

引言 222

第一章 标记探针的方法 袁建刚 223

第一节 缺口翻译标记DNA探针 223

第二节 ？I标记RNA和DNA 226

第二章 液相杂交 袁建刚 230

第一节 用于斑点杂交的直接点样法 234

第三章 固相杂交 袁建刚 234

第二节 DNA的吸印转移 237

第三节 RNA的吸印转移 239

第四节 DNA和RNA的电泳转移 240

第五节 硝酸纤维素膜固相杂交 242

参考文献 245

第七部分 核酸的电镜观察与应用 246

引言 246

第一章 核酸电镜标本的制作原理及其方法 蔡良琬梁杰宋国兴 248

第一节 基本原理 248

第二节 支持膜的制作方法及特点 248

第三节 样品制作方法 250

第一节 对制备核酸电镜标本的质量要求 254

第二节 病毒DNA与RNA的电镜标本的制备 254

第二章 核酸电镜标本的几种制备方法 蔡良琬梁杰宋国兴 254

第三节 DNA-蛋白质复合物的电镜标本的制备 255

第四节 核酸变性标本的制备 256

第五节 DNA的暗视野观察 258

参考文献 258

附录 259

一、常用的数据 259

二、DNA和RNA含量的测定 259

三、玻璃器皿和塑料器皿的处理 260

四、有机试剂及其处理 261

五、透析袋的处理 261

六、常用的同位素及标记化合物 262

七、几种常用的酶 267

八、限制性内切酶 269

名词缩写 274

索引 275