核酸序列测定 实验室指南PDF电子书下载

第一章 引言 叶寅 1

1.1 核酸的组成与结构 1

1.2 核酸的变性与复性 6

1.3 核酸酶与核酸的降解 6

1.4 核酸的磷酸化与去磷酸化 10

1.5 DNA合成与DNA聚合酶 11

1.6 用于序列测定的载体系统 14

1.7 分子克隆 16

第二章 序列胶及高压电泳系统 叶寅 18

2.1 引言 18

2.2 电泳装置系统 19

2.3 序列胶的制备 24

2.4 高压电泳 29

2.5 序列胶电泳后的处理 31

2.6 从序列胶片上读取DNA序列 33

第三章 DNA序列测定——测序策略 叶寅 36

3.1 引言 36

3.2 随机测序——建立随机重叠克隆文库 38

3.4 利用核酸外切酶BAL 31构建嵌套系列缺失体 66

3.5 利用外切核酸酶Ⅱ构建嵌套系列缺失突变体 71

3.6 利用DNase I构建嵌套系列缺失突变体 77

4.2 双脱氧链终止法测序原理 82

第四章 双脱氧链终止法——M13单链测序系统 王苏燕 叶寅 82

4.1 引言 82

4.3 Ｍ13系统——单链DNA的序列测定 87

4.4 单链模板DNA的制备 94

4.5 双脱氧测序反应 98

4.6 双脱氧测序反应和序列胶中出现的问题 113

4.7 多样品操作的程序化 117

第五章 双链DNA的序列测定 王苏燕 叶寅 121

5.1 引言 121

5.2 双链模板DNA的制备 127

5.3 质粒DNA的变性——单链模板的获得 136

5.4 测序反应 138

第六章 PCR用于序列测定 王铁辉 142

6.1 引言 142

6.2 对PCR双链产物测序 146

6.3 不对称PCR产生单链测序 152

6.4 直接PCR测序 158

第七章 银染测序 王苏燕 167

7.1 引言 167

7.2 银染测序 168

7.3 测序中出现的问题及解决方法 177

8.1 引言 179

第八章 非放射性标记的序列测定 范俊 179

8.2 测序反应 184

8.3 电泳及转膜 188

8.4 显色反应 189

8.5 结果举例及注意事项 191

第九章 DNA自动测序技术 沈天翔 193

9.1 引言 193

9.2 自动测序技术原理 193

9.3 DNA模板的制备 204

9.4 DNA聚合酶延伸反应 207

9.5 序列胶的制备 212

9.6 样品准备和电泳 213

第十章 DNA序列分析—M G法（化学降解法） 王苏燕 215

10.1 引言 215

10.2 化学降解法测序原理 215

10.3 DNA样品的制备 220

10.4 DNA样品的末端标记 221

10.5 单末端标记DNA片段的分离和提纯 224

10.6 合成的寡核苷酸DNA样品的5＇末端标记 228

10.7 特异性的碱基化学裂解反应 229

10.9 序列胶高压电泳及序列的阅读 235

10.8 合成的寡核苷酸的M G测序法 235

第十一章 RNA序列分析 周志宏 田华松 236

11.1 引言 236

11.2 RNA的提取与纯化 242

11.3 双向层析法 249

11.4 酶法及化学法 254

11.5 反转录酶法 266

11.6 末端鉴定法 273

第十二章 核酸序列的计算机分析 徐军 陈润生 276

12.1 计算机、软件和核酸数据库 276

12.2 组装一个新测得的序列 284

12.3 如何分析一个新测定的DNA序列 291

附录 308

一、各种不同用途的E.coli菌株 308

二、各种培养基及抗生素 310

三、放射性同位素 313

四、核酸的性质 314

五、一些经常使用的有机化合物的理化性质 318

六、纯化核酸的试剂 319

七、酶类及酶用缓冲液 319

八、电泳 321

九、序列载体 322