细胞因子研究方法学PDF电子书下载

第一章 概论 1

第一节 细胞因子的概念 5

一、细胞因子的共同特点 5

二、细胞因子的分类 8

三、细胞因子的临床应用 9

第二节 细胞因子受体 13

一、细胞膜受体 13

二、可溶性受体 16

第三节 细胞因子的研究方法 18

第二章 细胞因子的免疫测定法 20

第一节 应用免疫检测法的注意事项 21

一、免疫检测法与生物学活性检测法的比较 21

二、标准品的应用 21

三、影响检测结果的因素 22

四、固相的包被和洗涤 23

五、细胞因子和抗细胞因子抗体的标记 24

第二节 放射免疫测定 25

一、标记细胞因子的碘原法 26

二、放射免疫测定法（竞争抑制实验） 27

第三节 免疫放射测定法 28

一、抗细胞因子lgG的纯化 29

二、放射标记lgG的氯胺T法 29

三、免疫放射测定法 30

第四节 酶联免疫吸附试验 31

一、双抗体夹心法 32

二、竞争抑制法 35

三、同源ELISA 36

四、标记抗体的方法 37

第五节 时间分辨荧光免疫检测法 40

第六节 免疫沉淀法和Western印迹实验 42

二、免疫沉淀 43

一、抗原制备 43

三、SDS-PAGE电冰 44

四、Western印迹实验 48

第三章 研究细胞因子调节细胞生长活性的方法 53

第一节 研究细胞因子调节细胞生长活性方法的要点 53

一、用于检测细胞因子的细胞株 53

二、测定细胞数的方法 58

三、细胞因子的标准品 59

四、关于待测样品 61

五、待测细胞因子和细胞因子标准品的系列稀释 62

六、结果的表达方式 62

第二节 细胞因子调节细胞生长活性的检测法 62

一、细胞株的培养、冻存和复苏 63

二、[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数 64

三、MTT检测法 65

四、XTT检测法 67

五、MTS检测法 68

六、NAG检测法 70

七、Alamar BlueTM摄入法 70

八、碱性磷酸酶检测法（AKP法） 71

九、三磷酸腺苷检测法（ATP法） 72

十、染料染色法测定细胞数 73

十一、直接计数细胞 75

第三节 细胞因子活性单位的计算 76

一、直接作图法 77

二、概率单位分析法 78

第四节 研究细胞增殖的其它方法 79

一、关于[3H]脱氧胸苷摄入法 79

二、标记细胞核的放射自显影术 80

三、用荧光细胞计数仪检测细胞数 81

四、有丝分裂指数分析 82

第五节 集落形成实验 83

一、分离骨髓细胞 84

二、集落形成试验 86

第四章 细胞因子介导细胞毒活性的研究方法 92

第一节 细胞因子溶细胞和抑制细胞生长作用的检测法 92

第二节 细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法 93

一、CMC中效应细胞的制备 94

二、靶细胞的制备（分离肿瘤细胞和TIL） 98

三、4小时51Cr释放法检测CMC活性 99

四、[3H]脱氧胸苷释放法 102

五、LDH释放法 103

六、时间分辨荧光分析法 104

七、用MTT检测法测定CMC 108

九、单个细胞的CMC试验 110

八、荧光法检测CMC 110

第三节 细胞凋亡的研究方法 111

一、琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 112

二、用荧光激活的细胞分类仪检测凋亡细胞 113

第五章 细胞因子抗病毒活性的研究方法 118

第一节 测定细胞因子抑制细胞病变的活性 120

一、微孔板检测法 120

二、多孔检测法 123

第二节、病毒蚀斑形成实验 124

第三节 用抑制病毒产量法测定干扰素 125

一、用病毒感染经干扰素处理的细胞 125

二、病毒滴度的检测 126

三、浓缩病毒保存液的制备 127

第六章 细胞因子趋化活性的研究方法 129

第一节 琼脂糖小滴化学动力学试验 129

一、从外周血中分离多核粒细胞 129

二、琼脂糖小滴化学动力学试验 131

一、琼脂平皿的制备 132

第二节 琼脂糖中的趋化实验 132

二、琼脂糖中的趋化实验 133

第三节 微孔小室中的趋化实验 134

一、分离外周血单个核细胞 136

二、趋化试验 136

三、用显色反应计数趋化的中性粒细胞 137

四、IL-16诱导T淋巴细胞趋化实验 139

第四节 用β葡萄糖醛酸或过氧化物酶检测趋化因子 140

第七章 细胞因子和T淋巴细胞 142

第一节 T细胞的分离和纯化 142

一、用淋巴细胞分离液分离单个核细胞 143

二、从单个核细胞中分离T细胞 145

第二节 建立抗原特异性T细胞株或T细胞克隆 149

一、建立T细胞株 149

三、T细胞亚群的分离 149

二、用有限稀释法建立T细胞克隆 151

第三节 T细胞产生细胞因子的研究 153

一、T细胞亚群及其产生的细胞因子 153

二、研究T细胞产生的细胞因子的方法 156

第四节 细胞因子对T细胞的作用 158

一、调节T细胞生长 158

二、调节T细胞分化和活性 159

三、T细胞与免疫耐受 160

第八章 细胞因子和B淋巴细胞 162

第一节 研究B细胞反应的常用试剂 163

第二节 制备和纯化B细胞 164

一、制备单个核细胞 164

二、用尼龙毛法分离B细胞 166

三、从单个核细胞中去除T细胞 167

四、用粘附法分离单核细胞 168

五、按细胞比重分离B细胞 169

六、用单克隆抗体分离B细胞亚群 170

七、用于检测BCGF和BCDF的人B细胞株 173

第三节 B细胞活化、增殖和分化试验 174

一、B细胞活化试验 174

二、细胞因子的BCGF活性检测 176

三、细胞因子的BCDF活性检测 178

四、细胞因子的T细胞取代因子（TRF）活性检测 181

第四节 固相酶免疫测定检测人B细胞分泌的免疫球蛋白 182

一、测定人B细胞分泌的免疫球蛋白(Ig) 182

二、测定IgG的亚类 183

三、检测特异性抗体的酶免疫测定法 183

第九章 细胞因子和单核巨噬细胞 185

第一节 单核巨噬细胞的分离和纯化 185

一、巨噬细胞的分离 186

二、巨噬细胞的纯化 189

第二节 活化巨噬细胞的检测 192

一、呼吸爆发活性的检测 192

二、检测MHC-Ⅱ类分子表达 194

三、检测甘露岩藻糖受体 196

四、巨噬细胞吞噬功能的检测 199

五、检测巨噬细胞分泌的细胞因子 201

六、巨噬细胞杀伤肿瘤细胞活性的研究 201

第三节 巨噬细胞移动抑制活性的测定 203

一、琼脂糖小滴培养法 203

二、琼脂糖平皿打孔法 205

第十章 内皮细胞粘附实验和血小板活化因子 207

第一节 内皮细胞的研究方法 208

一、内皮细胞的分离和培养 208

二、内皮细胞趋化实验 210

三、血管内皮细胞的前凝血活性 213

四、内皮细胞粘附试验 215

第二节 PAF的测定 220

一、从EC中提取PAF 221

二、鉴定PAF 222

三、定量检测PAF的生物活性 222

第六节 单克隆抗体的制备 225

第十一章 细胞内和细胞膜上细胞因子的研究 225

第一节 检测单个细胞结合的细胞因子 225

一、生物素-抗生物素蛋白技术 226

二、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶技术 228

三、间接免疫荧光法 229

四、酶联免疫过滤法（EIF） 233

第二节 检测单个细胞分泌的细胞因子 234

一、反相溶血空斑试验 234

二、细胞斑点试验 238

三、酶联免疫斑点试验（ELISPOT） 239

第三节 检测细胞内的细胞因子 243

一、细胞培养和固定 243

二、用荧光标记的单克隆抗体染色 244

第十二章 抗细胞因子抗体的制备和鉴定 247

第一节 选择免疫原 247

第二节 多肽和载体蛋白的连接 249

一、同源双功能交联剂 249

二、异源双功能交联剂 251

第三节 选择动物 252

第四节 佐剂 252

第五节 免疫程序 253

一、免疫动物 253

二、动物采血 254

一、与细胞配合有关的因素及溶液配制 256

二、杂交瘤的制备方法 259

一、抗体的结合能力测定 266

第七节 鉴定抗体和测定蛋白含量 266

二、抗体的蛋白质含量测定 270

第八节 抗体的纯化 273

一、IgG的纯化 273

二、IgM的纯化 276

第十三章 细胞因子受体及其信号传导的研究 278

第一节 IFN-r与受体结合的研究 279

一、干扰素的磷酸化标记 279

二、受体结合实验 280

三、[32P]Mu-IFN-r共价交联到细胞上 282

四、克隆化Mu-IFN-r受体 283

第二节 GM-CSF受体的研究 284

一、用地高辛标记重组人GM-CSF 285

二、受体结合试验 285

一、用125I标记的重组IL-2研究IL-2受体 287

第三节 用125I标记的IL-2研究IL-2受体 287

三、受体-配体交联物的SDS-PAGE分析 287

二、IL-2受体分子量的测定 289

第四节 可溶性细胞因子受体的测定 291

一、可溶性IL-2受体的测定 291

二、检测可溶性IL-1受体 291

第五节 细胞中受体信号传导的研究 292

一、肌醇磷酸的测定 294

二、G蛋白和信号传导 296

三、磷脂的分析 299

四、细胞内钙的测定 300

五、测定cAMP 302

六、转录调节因子的研究 304

第十四章 细胞因子的分子生物学研究 306

第一节 细胞因子基因的克隆和表达 307

一、建立细胞因子cDNA文库 307

第二节 细胞因子基因的DNA印迹检测 310

二、建立细胞因子基因文库的原则 310

一、DNA分离、纯化和限制性酶消化 311

二、凝胶电冰和Southern转移 314

三、标记探针和Southern杂交 318

四、影响结果的因素 322

第三节 细胞因子mRNA的 RNA印迹实验 325

一、提取和保存RNA时的注意事项 325

二、总RNA的提取 325

三、RNA的琼脂糖凝胶电泳 330

四、Northern转移 331

五、探针的制备和纯化 332

六、DNA探针与膜上的RNA杂交（Northern杂交） 332

第四节 原位杂交 334

一、组织或细胞样品的处理 334

二、探针的选择和标记 336

三、杂交和结果观察 338

四、原位杂交研究细胞因子mRNA的实例 341

第五节 研究细胞因子mRNA的聚合酶链反应 346

一、RNA纯化（微量法） 347

二、逆转录 349

三、PCR和结果分析 349

四、定量PCR 352

第六节 细胞因子的基因研究和基因治疗 360

一、转基因动物 360

二、基因敲除动物 360

三、细胞因子的基因治疗 362

第十五章 白细胞介素及其研究方法 367

第一节 白细胞介素1 367

一、IL-1的结构特点 368

二、IL-1的产生及其调节 371

三、IL-1的受体 373

四、IL-1的生物学功能 374

五、IL-1的诱导和纯化方法 377

六、IL-1的检测和研究方法 379

七、IL-1的临床应用研究 386

第二节 白细胞介素2 387

一、IL-2的结构和特点 388

二、IL-2的产生和调节 389

三、IL-2的受体 389

四、IL-2的生物学活性 393

五、IL-2的诱导和纯化方法 395

六、IL-2的检测和研究方法 397

七、IL-2的临床应用和研究 403

第三节 白细胞介素3 406

一、IL-3的结构和特点 406

二、IL-3的产生和调节 408

三、IL-3的受体 409

四、IL-3的生物学活性 411

五、IL-3的诱导和纯化方法 413

六、IL-3的检测和研究方法 415

七、IL-3的临床应用和研究 417

第四节 白细胞介素4 418

一、IL-4的结构和特点 418

二、IL-4的产生和调节 420

三、IL-4的受体 420

四、IL-4的生物学活性 423

五、IL-4生物活性的检测 426

六、IL-4的纯化 430

七、IL-4的临床应用研究 431

第五节 白细胞介素5 432

一、IL-5的结构和特点 432

三、IL-5受体 434

二、IL-5的产生和调节 434

四、IL-5的生物学活性和应用研究* 435

五、IL-5的研究方法 436

第六节 白细胞介素6 443

一、IL-6的结构和特点 444

二、IL-6的产生和调节 446

三、IL-6的受体 447

四、IL-6的生物学活性和应用研究 449

五、IL-6的研究方法 453

第七节 白细胞介素7 458

一、IL-7的结构和特点 459

二、IL-7的产生和调节 460

三、IL-7受体 460

四、IL-7的生物学活性和应用研究 462

五、IL-7的研究方法 464

第八节 白细胞介素8和趋化因子家族 466

一、白细胞介素8 467

二、C-X-C趋化因子 473

三、C-C趋化因子 477

四、C趋化因子和C-X2-C趋化因子 479

五、趋化因子受体 480

六、趋化因子的生物学活性 482

七、趋化因子的临床研究 484

八、IL-8和趋化因子的研究方法 485

第九节 白细胞介素9 487

一、IL-9的结构和特点 487

二、IL-9的产生和调节 488

三、IL-9受体 488

四、IL-9的生物学活性及其应用 489

五、IL-9的研究方法 490

第十节 白细胞介素10 492

一、IL-10的结构和特点 493

二、IL-10的产生和调节 494

三、IL-10受体 495

四、IL-10的体外生物学功能 496

五、IL-10的研究方法 497

六、IL-10的体内研究和临床研究 499

第十一节 白细胞介素11 501

一、IL-11的结构和功能 502

二、IL-11的产生和调节 503

三、IL-11的受体 503

四、IL-11的生物学活性和应用研究 504

五、IL-11的研究方法 505

一、IL-12的结构和特点 507

第十二节 白细胞介素12 507

二、IL-12的产生和调节 509

三、IL-12的受体 510

四、IL-12的生物学活性和动物体内研究 511

五、IL-12的临床研究 514

六、IL-12的研究方法 514

第十三节 其它白细胞介素 519

一、白细胞介素13 519

二、白细胞介素14 525

三、白细胞介素15 527

四、白细胞介素16 530

五、白细胞介素17 533

六、白细胞介素18 536

第十六章 干扰素及其研究方法 540

一、IFN-α的结构和特点 541

第一节 α干扰素 541

二、IFN-α的产生和调节 544

三、IFN-α的受体 545

四、IFN-α的生物学活性 547

五、IFN-α的诱导和纯化 552

六、IFN-α的临床应用研究 556

第二节 β干扰素 561

一、IFN-β的结构和特点 562

二、IFN-β的产生和调节 563

三、IFN-β的受体 563

四、IFN-β的生物学活性 564

五、IFN-β的诱导和纯化 564

六、IFN-β的临床应用研究 568

第三节 γ干扰素 569

一、IFN-γ的结构和特点 569

二、IFN-γ的产生和调节 570

三、IFN-γ的受体 571

四、IFN-γ的生物学活性 572

五、IFN-γ的诱导和纯化 574

六、IFN-γ的临床应用研究 576

第四节 干扰素的研究方法 577

一、用基因工程技术检测干扰素的方法 577

二、用细胞株检测干扰素活性 579

三、检测IFN-γ诱导NO的活性 581

第十七章 肿瘤坏死因子家族及其研究方法 584

第一节 肿瘤坏死因子α 584

一、TNF-α的结构和特点 584

二、TNF-α的产生和调节 587

三、TNF-α受体 588

四、TNF-α的生物学活性 592

六、TNF-α和TNF-β活性的检测方法 600

七、TNF-α的临床应用和研究 605

第二节 肿瘤坏死因子β和淋巴毒素 609

一、TNF-β和LT-β的结构和特点 609

二、TNF-β和LT-β的产生和调节 611

三、TNF-β受体和LT-β受体 612

四、TNF-β的生物学活性和临床应用研究 612

五、TNF-β的研究方法 613

第三节 TNF超家族和TNFR超家族 613

一、TNF超家族 614

二、TNFR超家族 615

第十八章 集落刺激因子及其研究方法 619

第一节 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 619

一、GM-CSF 的结构和特点 620

二、GM-CSF 的产生和调节 621

三、GM-CSF 的受体 621

四、GM-CSF 的生物学活性 623

五、GM-CSF 的诱导和纯化 626

六、用细胞株检测造血生长因子活性 627

七、GM-CSF 的临床应用研究 628

第二节 粒细胞集落刺激因子 633

一、G-CSF 的结构和特点 633

二、G-CSF 的产生和调节 635

三、G-CSF 的受体 636

四、G-CSF 的生物学活性 638

五、G-CSF的纯化 639

六、G-CSF 的临床应用研究 640

第三节 巨噬细胞集落刺激因子 644

一、M-CSF的结构和特点 644

二、M-CSF的产生和调节 646

三、M-CSF的受体 647

四、M-CSF的生物学活性 649

五、M-CSF的纯化和检测方法 651

六、M-CSF的临床应用研究 652

第四节 红细胞生成素 653

一、EPO 的结构和特点 653

二、EPO的产生和调节 654

三、EPO的受体 654

四、EPO 的生物学活性 656

五、EPO的检测和纯化方法 657

六、EPO 的临床应用和研究 661

第五节 干细胞因子 663

一、SCF的结构和特点 663

二、SCF的产生和调节 664

三、SCF受体 665

四、SCF的生物学活性 666

五、SCF的检测和纯化 667

六、SCF的临床应用研究 671

第六节 其它造血生长因子 672

一、与血小板生成有关的造血生长因子 672

二、与红细胞有关的造血生长因子 673

第一节 表皮生长因子 675

一、EGF的结构和特点 675

第十九章 促生长因子及其研究方法 675

二、EGF家族和EGF相关蛋白 676

三、EGF的产生和调节 678

四、EGF的受体 678

五、EGF 的生物学活性 680

六、EGF的纯化方法 683

七、EGF 的检测方法 684

第二节 转化生长因子α 686

一、TGF-α的结构和特点 686

八、EGF 的临床应用 686

二、TGF-α的产生和调节 687

三、TGF-α的受体 688

四、TGF-α的生物学活性和临床应用 688

五、TGF-α的研究方法 690

第三节 神经生长因子 694

一、NGF的结构和特点 694

二、NGF的产生和调节 696

三、NGF的受体 696

四、NGF的生物学活性 699

五、NGF的纯化方法 700

六、NGF的检测方法 702

七、NGF的临床应用研究 704

八、其它神经生长因子 704

第四节 血小板衍生的生长因子 707

一、PDGF的结构和特点 707

二、PDGF的产生和调节 709

三、PDGF的受体 709

四、PDGF的生物学活性 711

五、PDGF的纯化方法 712

六、PDGF的检测方法 713

七、PDGF的临床应用研究 714

第五节 成纤维细胞生长因子 715

一、FGF的结构和特点 716

二、FGF的产生和调节 718

三、FGF的受体 718

四、FGF的生物学活性 719

五、FGF的纯化方法 722

六、FGF的检测方法 723

七、FGF的临床应用 724

第六节 血管内皮细胞生长因子 724

一、VEGF的结构和特点 725

二、VEGF的产生和调节 726

三、VEGF的受体 726

四、VEGF 的生物学活性和应用研究 727

五、VEGF 的诱导和纯化方法 727

六、VEGF 的检测方法 729

第七节 肝细胞生长因子 730

第二十章 其它细胞因子及其研究方法 734

第一节 转化生长因子β 734

一、TGF-β的结构和特点 735

二、TGF-β的产生和调节 738

三、TGF-β的受体 739

四、TGF-β的生物学活性 742

五、TGF-β的纯化方法 746

六、TGF-β的检测和研究方法 748

七、TGF-β受体的研究方法 751

八、TGF-β的临床应用研究 754

第二节 白血病抑制因子 755

一、LIF的结构和特点 755

二、LIF的产生和调节 756

三、LIF的受体 757

四、LIF的生物学活性 758

五、LIF的诱导和纯化方法 759

六、LIF的检测方法 761

七、LIF的临床应用研究 762

第三节 转移因子 762

一、从胎盘提取TF 763

第四节 其它细胞因子 764

一、巨噬细胞移动抑制因子 764

二、从脾脏中提取TF 764

二、巨噬细胞活化因子 765

三、抑瘤素M 766

四、双向调节素 767

主要参考文献 771

附录1氨基酸的英文缩写 779

附录2本文中常见的英文及缩写 780

附录3常用试剂的配制 789

五、TNF-αTNF-α的诱导和纯化方法 997