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第一篇 电子显微镜方法 1

第1章 电子显微镜的基础知识 1

1.1 电子显微镜的发展过程 1

1.1.1 光学显微镜的局限 2

1.1.2 电子显微镜的产生基础 3

1.1.3 电镜中的信号物质 8

1.1.4 电镜的发展概况 8

1.2 电子透镜的光学参量和基本公式 10

1.3 电子透镜的聚焦性能 12

1.3.1 静电透镜 12

1.3.2 磁透镜 15

1.4 电子透镜的像差 19

1.5 景深和焦深 25

第2章 透射电子显微镜 29

2.1 透射电镜的基本原理 29

2.2 透射电镜的组成结构 30

2.2.1 照明系统 30

2.2.2 样品室 36

2.2.3 成像系统 37

2.2.4 观察和记录系统 40

2.2.5 真空系统 41

2.2.6 其他 45

2.3 透射电子像的衬度 45

2.3.1 振幅衬度——散射“吸收”衬度 45

2.3.2 明场和暗场成像方法 47

2.3.3 相位衬度 49

2.4 电镜中的电子衍射 50

2.5 透射电子像的分辨率 53

2.6 透射电镜的使用 56

第3章 扫描电子显微镜 60

3.1 扫描电镜的基本原理 60

3.2 扫描电镜的组成结构 62

3.2.1 照明系统 62

3.2.2 扫描系统 67

3.2.3 聚焦系统 68

3.2.4 探测系统 70

3.2.5 显示系统 72

3.2.6 其他 73

3.3 扫描电镜中的主要像衬度 73

3.3.1 二次电子像的衬度 74

3.3.2 背散射电子像的衬度 78

3.3.3 像衬度的模拟量处理 82

3.4 扫描电子像的分辨率 82

3.4.1 电子探针的直径 83

3.4.2 样品的衬度特性 83

3.4.3 信号电子的取样区 84

3.5 扫描电镜的使用 85

第二篇 标本制备方法 88

第4章 透射电镜样品制备技术 88

4.1 超薄切片法 88

4.1.1 取材 89

4.1.2 固定 90

4.1.3 清洗与脱水 97

4.1.4 浸透与包埋 98

4.1.5 超薄切片前的准备工作 109

4.1.6 超薄切片 111

4.1.7 超薄切片染色 115

4.1.8 和切片染色有关的几个方法介绍 116

4.2 负染色法 119

4.2.1 负染色剂 120

第5章 电镜细胞化学 126

5.1 电镜细胞化学原理 126

5.2 电镜细胞化学样品制备的一般过程 126

5.3 氧化还原酶 127

5.3.1 琥珀酸脱氢酶 127

5.3.2 细胞色素氧化酶 129

5.3.3 过氧化物酶 130

5.3.4 过氧化氢酶 131

5.3.5 单胺氧化酶 132

5.4 转移酶 134

5.4.1 胆碱乙酰转移酶 134

5.4.2 糖基转移酶 135

5.5 水解酶 136

5.5.1 乙酰胆硷酯酶 137

5.5.2 碱性磷酸酶 137

5.5.3 酸性磷酸酶 138

5.5.4 葡萄糖-6-磷酸酶 140

5.5.5 5′—核苷酸酶 141

5.5.6 硫胺素焦磷酸酶 141

5.5.7 N5+-K+-ATP酶 142

5.6 裂解酶——碳酐酶 144

第6章 免疫电镜方法 146

6.1 固定与包埋 147

6.1.1 固定 147

6.1.2 包埋（环氧树脂） 149

6.2 免疫电镜标记物 152

6.2.1 胶体金（胶体金制备，蛋白质一胶体金复合物制备） 152

6.2.2 铁蛋白 156

6.2.3 HRP 157

6.3 免疫电镜中的分子桥技术 158

6.3.1 种属特异抗体 159

6.3.2 蛋白A 159

6.3.3 生物素与抗生物素蛋白 159

6.3.4 不标记抗体 161

6.4 免疫标记过程 161

6.4.1 包埋前法 162

6.4.2 包埋后法 163

6.5 非特异性与对照实验 164

6.5.1 非特异结合及其阻断方法 164

6.5.2 对照实验 165

6.6 扫描电镜免疫细胞化学 166

6.6.1 标记物及成像原理 166

6.6.2 样品制备 168

6.7 电镜原位杂交 169

6.7.1 原理 170

6.7.2 核酸探针 170

6.7.3 探针的标记 170

6.7.4 探针的显示 171

6.7.5 样品制备 171

6.7.6 杂交前的预处理 173

6.7.7 杂交 173

第7章 电镜方法中的冷冻技术 176

7.1 冷冻断裂与冷冻蚀剂 176

7.1.1 样品预处理 177

7.1.2 冷冻 178

7.1.3 断裂 179

7.1.4 蚀刻 180

7.1.5 喷镀 181

7.1.6 复型膜的分离与捞取 182

7.1.7 复型膜上裂面的命名 182

7.2 冷冻超薄切片 182

7.2.1 固定 182

7.2.2 包裹 182

7.2.3 冷冻保护 183

7.2.4 冷冻 183

7.2.5 切片 183

7.2.6 染色 187

7.2.7 制备冷冻超薄切片的干法 187

7.3 冷冻置换 188

7.3.1 冷冻 188

7.3.2 置换 189

7.3.3 包埋 189

7.3.4 切片和染色 189

第8章 电镜放射自显影 190

8.1 原理 190

8.2 样品的标记 191

8.3 乳胶涂布，曝光与显影 192

8.4 分辨率 194

第9章 扫描电镜标本制备方法 196

9.1 暴露 196

9.2 干燥 197

9.2.1 临界点干燥法 197

9.2.2 冷冻干燥法 202

9.3 表面导电层的复盖 204

9.3.1 金属真空喷镀法 205

9.3.2 金属离子溅射镀膜法 207

9.4 扫描电镜特殊标本制备方法 209

9.4.1 血管铸型法 209

9.4.2 分散细胞的扫描电镜标本制备方法 212

9.4.3 对组织切面的观察——割断法 216

9.4.4 表面标记技术（免疫扫描电镜方法） 218

第三篇 电子显微镜进展 222

第10章 电子探针X射线微区分析 222

10.1 特征X射线及连续X-射线 223

10.2 仪器结构特点 225

10.2.1 电子光学系统 225

10.2.2 样品室 225

10.2.3 谱仪 225

10.3 标本制备方法 227

10.4 超薄切片的定量X-射线微区分析 231

10.5 X射线微区分析在生物医学中的应用 234

10.6 X射线微区分析方法的优缺点 235

第11章 其它类型电子显微镜 238

11.1 能量损失谱仪 238

11.2 俄歇电子谱仪 239

11.3 扫描透射电子显微镜 240

11.4 超高压电子显微镜 240

附、第12章 扫描探针显微镜 242

12.1 扫描隧道显微镜 243

12.2 扫描力显微镜 245