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1 导论 1

1.1 酶学研究简史 1

1.2 酶作为催化剂的显著特点 3

1.2.1 催化能力 3

1.2.2 专一性 3

1.2.3 调节性 5

1.3 辅(助)因子 7

1.4 酶的分类和命名 8

1.4.1 酶学委员会的分类系统 8

1.4.2 酶学委员会推荐的命名法 12

1.4.3 同工酶 13

1.4.4 多酶体系 13

2.1.1 建立一个适当的测活方法 15

2.1 导论 15

2 酶的分离与纯化 15

2.1.2 酶源选材要以含酶丰富,取材方便、经济为原则 16

2.1.3 酶的提取 16

2.1.4 酶的提纯 16

2.1.5 酶的纯度检验 17

2.2 酶的提取 17

2.2.1 生物组织的破碎 17

2.2.2 ?提 18

2.3 酶的提纯 19

2.3.1 调整酶溶解度的方法 19

2.3.2 根据酶分子大小、形状不同的方法 21

2.3.3 根据酶分子电荷性质的方法 25

2.3.4 根据酶分子专一性结合的方法 28

2.3.5 其他分离方法 34

2.3.6 酶纯化方法的选择 35

2.3.7 酶纯度的评价 36

2.3.8 纯化过程实例 39

3 酶活力测定 49

3.1 酶活力测定 49

3.1.1 初速度 49

3.1.2 终止法测定酶活力 50

3.1.3 连续法测定酶活力 52

3.1.4 酶分析的自动化 55

3.1.5 酶活力的定义与表示方法 57

3.1.6 酶活性测定实例 58

3.2 酶反应速度常数的测定 59

3.2.1 酶反应的分析 59

3.2.2 流管法 61

3.2.3 弛豫时谱法 62

3.2.4 恒态前动力学 63

4 酶作用动力学 68

4.1 酶动力学数据 68

4.2 单底物酶促反应动力学 70

4.2.1 引言 70

4.2.2 初速度和底物浓度的关系 71

4.2.3 米氏方程中Km、Vm??的测定 75

4.2.4 可逆反应的Haldane关系式 78

4.3 酶作用于多底物时的动力学 78

4.3.1 酶促反应按底物数分类 78

4.3.2 多底物反应动力学分类 79

4.3.3 Cleland命名和表示法 81

4.3.4 双底物反应恒态动力学 81

4.3.5 多底物反应机制的鉴别 88

4.4 King-Altman法 93

5 酶的抑制作用 101

5.1 引言 101

5.2 酶的可逆抑制作用 101

5.2.1 竞争性抑制 101

5.2.2 反竞争性抑制 108

5.2.3 非竞争性抑制 109

5.2.4 混合型抑制 112

5.2.5 部分抑制 114

5.2.6 底物抑制 115

5.2.7 产物抑制 116

5.2.8 变构抑制 117

5.3 酶的不可逆抑制作用 117

5.3.1 非专一性的不可逆抑制作用 118

5.3.2 专一性的不可逆抑制作用 119

6 pH值和温度对酶作用的影响 127

6.1 在稳态条件下pH值对反应速度的影响 127

6.1.1 单底物、单产物只形成一种中间物ES的块平衡系统 128

6.1.2 啤酒酵母葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的双底物反应 135

6.2 温度对酶作用的影响 141

6.2.1 温度对反应速度的影响 141

6.2.2 求解离基团的ΔH0 142

7 酶的作用机制 144

7.1 概论 144

7.1.1 酶促反应过渡态 144

7.1.2 基元催化反应 145

7.1.3 与酶高效率有关的一些因素 151

7.1.4 辅(助)因子在酶促反应中的作用 155

7.2.1 动力学研究 168

7.2 酶作用机制的实验探测 168

7.2.2 捕捉 酶-底物复合物 170

7.2.3 X-射线晶体衍射法 171

7.2.4 氨基酸侧链的化学修饰 172

7.2.5 定点突变 178

7.2.6 蛋白水解酶作用(酶的修饰) 179

7.3 酶反应机制实例 180

7.3.1 丝氨酸蛋白酶 180

7.3.2 乳酸脱氢酶 193

7.3.3 酪氨酰-tRNA合成酶 198

7.3.4 超氧化物歧化酶 202

8 酶活性的调控 208

8.1 通过配体诱导酶构象改变的活性调节 208

8.1.1 配体和蛋白质的结合 208

8.1.2 变构酶 217

8.2 通过酶共价结构改变的活性调节 224

8.2.1 共价结构不可逆改变的活性调节 224

8.2.2 共价结构可逆改变的活性调节 226

9 应用酶学 229

9.1 固定化酶 229

9.1.1 酶的固定化方法 229

9.1.2 固定化酶的性质 235

9.2 酶在医药上的应用 242

9.2.1 药用酶 242

9.2.2 诊断用酶 265

9.3 酶制剂工业生产及其工业应用 269

9.3.1 概述 269

9.3.2 酶制剂生产技术 272

9.3.3 酶在工业上的应用 292