细胞分子生物学实验操作指南PDF电子书下载

人和哺乳动物细胞基因组DNA制备法 1

一、从培养物和组织细胞中提取DNA 1

二、从人全血细胞中提取基因组DNA 4

从真核细胞中抽提总RNA 7

一、异硫氰酸胍-超离心法 7

二、NP40法 10

三、胍酚氯仿法 13

制备高纯度mRNA—寡脱氧胸苷纤维素柱层析法 18

制备高纯度mRNA-寡脱氧胸苷乳胶法 21

寡聚脱氧胸苷纤维素柱精制mRNA 24

质粒DNA的提取 27

氯化铯密度梯度超离心提取质粒DNA 33

噬菌体DNA的制备和纯化 37

小量酵母DNA制备法 43

聚合酶链反应技术 45

聚合酶链反应-单股构型多态性方法 51

反转录聚合酶链反应法 54

原位杂交技术 56

缺口平移和多头引物 64

缺口平移法制备α-32P标记的探针 66

随机引物法制备α-32P-dNTP标记DNA探针 69

末端标记法 70

琼脂糖凝胶电泳 72

DNA连接前的脱磷反应 74

一、脱磷反应Ⅰ 75

二、脱磷反应Ⅱ 76

DNA序列分析 81

DNA酶Ⅰ“足迹”法 86

核失控转录测定法 92

分离酵母人工染色体插入片段 99

人基因组限制性酶切片段的制备和分离 102

DNA的部分酶解 104

哺乳动物细胞基因的导入 107

一、磷酸钙共转染法 107

二、DEAE-葡聚糖法导入基因 109

三、脂质转染 110

四、电穿孔法 112

融合蛋白表达及其多克隆抗体的制备 115

附一 120

附二 124

Southem印迹杂交 125

用Southem印迹法分析DNA分子上的DNA酶Ⅰ高敏感位点 130

Northern印迹杂交 134

感受态细菌制备及转化实验 137

cDNA的合成和克隆 141

一、单链cDNA的合成 141

二、双链cDNA的合成 144

三、核酸酶S1消化双链cDNA 145

四、核酸酶S1消化产物的分离——蔗糖密度梯度离心法 146

五、双链DNA加尾 147

七、转化 149

六、退火 149

λgtll cDNA文库扩增及免疫法筛选 151

一、文库扩增 151

二、免疫筛选λgtll cDNA文库 153

十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳和Western印迹 156

一、十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳 157

二、Western印迹 158

一、35S-甲硫氨酸标记 162

35S和32P标记细胞 162

二、32P-正磷酸盐标记 163

附录一 常用试剂配制 165

附录二 有关技术 171

附录三 名词解释 172

附录四 限制性内切酶的使用方法说明 178

附录五 常用限制酶识别序列 179

附录六 遗传密码 187

附录七 氨基酸符号及密码子 188

附录八 相关技术资料 189