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第一篇 生化分离技术 1

第一章 生物大分子的是取与沉淀分离技术 1

第一节 细胞破碎 1

第二节 蛋白质和酶的提取与沉淀分离 3

第三节 核酸的提取与沉淀分离 10

第四节 实验 12

实验 1—1 大肠杆菌细胞的超声波破碎 12

实验 1—2 枯草杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析 12

实验 1—3 枯草杆菌 DNA 的提取与分离 14

实验 1—4 酵母 RNA 的提取与分离 15

实验 1—5 大蒜细胞 SOD 提取与分离 16

实验 1—6 大鼠肝 rRNA 的提取与会分离 18

第二章 层析分离技术 19

第一节 吸附层析 19

第二节 分配层析 23

第三节 离子交换层析 38

第四节 凝胶层析 42

第五节 亲和层析 46

第六节 实验 47

实验 2—1 蛋白质溶液的凝胶层析脱盐 47

实验 2—2 氨基酸的纸层析 48

实验 2—3 核苷酸的离子交换层析 50

实验 2—4 胰蛋白酶的亲和层析 52

实验 2—5 凝脱层析测定蛋白质的相对分子质量 53

实验 2—6 DNS—氨基酸的聚酰胺薄膜层析 55

实验 2—7 醇酯成分的气相层析 57

实验 2—8 胆酸混合液的薄层层析 59

第三章 电泳技术 60

第一节 电泳的基本原理 60

第二节 纸电泳 61

第三节 薄层电泳 63

第四节 薄胶电泳 64

第五节 凝胶电泳 64

第六节 等电点聚焦电泳 68

实验 3—1 核苷酸的纸电泳 71

第七节 实验 71

实验 3—2 蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳 72

实验 3—3 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 73

实验 3—4 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 75

实验 3—5 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 77

实验 3—6 蛋白质的二元凝胶电泳 78

第四章 离心分离技术 81

第一节 离心机的种类与用途 81

第二节 离心方法的选择 82

第三节 离心条件的确定 84

第四节 实验 86

实验 4—1 细菌核糖体的分离 86

实验 4—2 大肠杆菌细胞膜的分离 87

实验 4—3 RNA 的蔗糖密度梯度离心分离 88

实验 4—4 大鼠肝细胞核的分离 89

第五章 化学检测技术 91

第一节 糖类的化学检测 91

第二篇 生化检测技术 91

第二节 蛋白质和氨基酸的化学检测 95

第三节 蛋白质的免疫化学检测 104

第四节 核酸的化学检测 106

第五节 实验 108

实验 5—1 斐林试剂置换法测定还原糖 108

实验 5—2 葡萄糖淀粉酶的活力测定 109

实验 5—3 微量凯氏定氨法测定总氮量 111

实验 5—4 福林-酚试剂法测定蛋白质含量 112

实验 5—5 丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸 113

实验 5—6 异硫氰酸苯酯分析法测定肽链的氨基酸排列次序 114

实验 5—7 茚三酮显色法测定氨基酸含量 116

实验 5—8 双向免疫扩散法测定抗血清效价 117

实验 5—9 定磷法测定核酸含量 118

实验 5—10 地衣酚显色法测定 RNA 含量 119

实验 5—11 二苯胺显色法测定 DNA 含量 120

第六章 光学检测技术 122

第一节 旋光检测技术 122

第二节 荧光检测技术 123

第三节 分光光度检测技术 126

第四节 实验 127

实验 6—1 旋光法测定味精的纯度 127

实验 6—2 荧光法测定核黄素含量 128

实验 6—3 荧光法测定氨基酸含量 129

实验 6—4 紫外吸纠法测定核酸含量 130

实验 6—5 紫外吸收法测定蛋白质含量 131

第七章 气体检测技术 132

第一节 华勃氏呼吸仪检压法 133

第二节 范· 斯莱克检测仪测定a-氨基酸含量 135

第三节 实验 136

实验 7—1 酵母细胞耗氧量的测定 136

实验 7—2 华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸脱羧酶活力 137

实验 7—3 华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸含量 138

第八章 放射性同位素检测技术 140

第一节 基本知识 140

第二节 放射性同位素的检测 142

第三节 放射性同位素的掺入 145

实验 8—1 p-32P-ATP 的酶促合成 146

实验 8—2 3H-蛋白质的生物合成 146

第四节 实验 146

实验 8—9 3H-蛋白质凝胶的放射荧光显影 147

第九章 生物检测技术 149

第一节 生物检测的主要内容 149

第二节 抗生素的生物检测 151

第三节 生长促进物质的生物检测 152

实验 9—1 卡那霉素的效价测定 153

第四节 实验 153

实验 9—10 二环素的杀菌能务测定 154

第十章 核磁共振检测技术 156

第一节 核磁共振的基本原理 156

第二节 核磁共振的操作要点 160

第三篇 酶、基因和细胞操作技术 163

第十一章 酶技术 163

第一节 酶生物合成的调节 163

第二节 酶反应动力学的研究 167

第三节 酶、细胞和原生质体固定化技术 171

第四节 酶分子修饰 175

第五节 实验 183

实验 11—1 β-半乳糖苷酶的诱导合成 183

实验 11—2 无机磷酸对枯草杆菌碱性磷酸酶生物合成的阻遏作用 184

实验 11—3 碱性磷酸酶的反应动力学性质 185

实验 11—4 L- 谷氨酸脱羧酶的固定化 187

实验 11—5 枯草杆菌细胞固定化 188

实验 11—6 谷氨酸棒杆菌原生质体固定化 188

实验 11—7 固定化原生质生产谷氨酸脱氢酶 189

第十二章 克隆技术 191

第一节 基因的获取技术 191

第二节 载体的制备技术 193

第三节 限制性内切核酸酶的应用 195

第四节 基因重组 197

第五节 细胞转化和基因表达 197

实验 12—1 大肠杆菌 Col EI 质粒的分离 199

第六节 实验 199

实验 12—2 重组 DNA 的细胞转化 201

第十三章 细胞和原生质体融合技术 202

第一节 细胞融合 202

第二节 原生质体分离 204

第三节 原生质体融合 205

第四节 细胞壁的再生 206

实验 13—2 酵母原生质体的分离与再生 207

实验 13—1 枯草杆菌原生质体的制备 207

第五节 实验 207

实验 13—3 从胡萝卜细胞分离原生质体 208

附录 210

一、常用缓冲液的配制 210

二、指示剂的配制 217

三、气体检测常用的物理常数 219

四、氨基酸的一些理化常数 220

五、某些有机溶剂的一些物理常数 221

主要参考书目 222