杆状病毒表达载体系统PDF电子书下载

第1章 杆状病毒概论 1

1.1 杆状病毒的结构 2

1.2 杆状病毒的感染周期 5

1.2.1 对虫体的感染 5

1.2.2 离体复制 7

1.3 杆状病毒的基因组成 11

1.3.1 物理图谱 12

1.3.2 已经鉴定的杆状病毒基因 14

1.3.3 同源区 30

1.4.1 基因表达的时序性 31

1.4.2 转录的调节 32

1.5 杆状病毒DNA的复制 39

1.5.1 DNA复制原点 39

1.4 杆状病毒基因表达的调控 39

1.5.2 DNA复制的方式 41

1.6 杆状病毒感染对宿主基因表达的影响 42

第2章 利用杆状病毒作为基因表达载体的原理 43

2.1 杆状病毒作为基因表达载体的条件 44

2.2 受体系统—昆虫细胞系、幼虫和蛹 45

2.3 构建重组杆状病毒的技术原理和方法 47

2.4 杆状病毒介导外源基因表达的特点 50

第3章 杆状病毒转移载体 54

3.1 什么是杆状病毒转移载体? 54

3.2 杆状病毒转移载体的构建 57

3.3 杆状病毒转移载体的类型 60

3.3.1 单基因转移载体 61

3.3.2 多基因转移载体 99

4.1 转移载体的选择 107

第4章 构建重组病毒的策略 107

4.2 亲本病毒的选择 109

4.2.1 与polh位点型转移载体匹配使用的亲本病毒 110

4.2.2 与pl0位点型转移载体匹配使用的亲本病毒 112

4.2.3 转称载体与亲本病毒的匹配 113

4.2.4 穿梭载体 114

4.3 重组介体 115

第5章 昆虫细胞培养 121

5.1 昆虫细胞系 121

5.2 昆虫细胞培养基 123

5.2.1 增补血清培养基 123

5.2.2 无血清培养基 126

5.2.3 低血清培养基 127

5.2.4 培养基的配制 128

5.3.1 细胞培养的条件和操作规则 131

5.3 昆虫细胞的传代培养 131

5.3.2 单层培养 134

5.3.3 悬浮培养 135

5.3.4 由有血清培养转入无血清培养的过渡 136

5.4 昆虫细胞的冻存和复苏 137

5.4.1 昆虫细胞的液氮冻存和复苏 137

5.4.2 昆虫细胞的短期低温保存 139

第6章 杆状病毒在昆虫培养细胞中的增殖、滴定和纯化 141

6.1 杆状病毒对培养细胞的感染 141

6.1.1 影响杆状病毒感染培养细胞的因素 142

6.1.2 单层培养细胞的感染 144

6.1.3 悬浮培养细胞的感染 146

6.2 杆状病毒的滴定 146

6.2.1 空斑测定 147

6.2.2 TCID50测定 150

6.3 杆状病毒毒种的纯化 152

6.3.1 空斑纯化 153

6.3.2 终点稀释纯化 154

6.4 杆状病毒毒种的扩增 156

6.5 BVs的大量制备 158

第7章 外源基因与转移载体的嵌合 160

7.1 外源基因的分离和修饰 160

7.1.1 外源目的基因的分离 161

7.1.2 外源基因片段的修饰 163

7.2 转移载体的准备 165

7.3 外源基因与转移载体的连接 167

7.4 嵌合转移载体的筛选和鉴定 168

7.4.1 细菌的转化 168

7.4.2 嵌合转移载体的检测 170

7.5 嵌合转移载体的扩增和纯化 174

7.5.1 细菌的大量培养和裂解 175

7.5.2 嵌合转移载体DNA的纯化 177

第8章 重组病毒的构建 181

8.1 感染性亲本病毒DNA的准备 181

8.1.1 从BVs提取DNA 181

8.1.2 从PIBs提取DNA 184

8.1.3 亲本病毒DNA的线化 185

8.2 嵌合转移载体和亲本病毒DNA对昆虫细胞的共转染 186

8.2.1 磷酸钙—DNA共沉淀转染法 186

8.2.2 Lipofectin介导转染法 187

8.3 将嵌合转移载体和亲本病毒DNA导入酵母细胞 188

8.4 将供体质粒和亲本病毒DNA导入大肠杆菌细胞 192

8.5 重组病毒的筛选和纯化 194

8.5.1 重组病毒的筛选 194

8.5.2 重组病毒的纯化 195

9.1 重组病毒基因组的分析 198

9.1.1 从受感染细胞中提取病毒DNA 198

第9章 重组病毒的分析和鉴定 198

9.1.2 病毒DNA的限制性内切酶分析 200

9.1.3 病毒DNA的Southern杂交分析 202

9.2 外源基因表达产物分析 207

9.2.1 病毒感染细胞蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 208

9.2.2 病毒感染细胞蛋白质的放射性标记 212

9.2.3 病毒感染细胞蛋白质的免疫学分析 214

9.2.4 外源基因产物表达的时程分析 224

9.3 外源基因表达产物转译后加工的分析 225

9.3.1 糖基化分析 225

9.3.2 磷酸化分析 228

9.3.3 十六脂酸化和十四脂酸化分析 229

9.4.1 从病毒感染细胞中提取RNA 230

9.4 外源基因转录的分析 230

9.4.2 病毒RNA的Northern杂交分析 232

第10章 重组蛋白的扩大生产 236

10.1 利用培养细胞生产重组蛋白 237

10.1.1 利用悬浮培养细胞生产重组蛋白 237

10.1.2 利用生物反应器生产重组蛋白 239

10.2 利用昆虫虫体生产重组蛋白 241

10.2.1 鳞翅目昆虫的发育 241

10.2.2 鳞翅目昆虫的饲养 242

10.2.3 病毒感染 246

10.2.4 重组蛋白的收集 248

10.2.5 从虫体中分离纯化多角体 250

附录 常用贮备液、缓冲液和培养基 252

参考文献 256