胶原蛋白实验方法PDF电子书下载

1章：胶原蛋白的提取与精制 1

1.1 胶原的性状及提取过程中的注意事项 1

1.1.1 可溶性胶原和不溶性胶原 1

1.1.2 有关胶原的术语 3

1.1.3 胶原溶液的性质 3

1.1.4 沉淀溶液内胶原时的注意事项 5

1.1.5 胶原溶液制备过程中的注意事项 6

1.1.6 精制胶原的保存 8

1.1.7 制备胶原用原材料的前处理 8

1.1.8 试剂及器具 8

1.2 前胶原的制备 9

1.2.1 概述 9

1.2.2 实验方法 11

1.3 硬组织中胶原的制备方法 20

1.3.1 概述 20

1.3.2 实验方法 23

1.3.3 注意事项和存在的问题 28

1.4 各型胶原的制备 30

1.4.1 Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型胶原 30

1.4.2 Ⅳ型、Ⅴ型、Ⅵ型胶原 39

1.4.3 Ⅶ型(LC:Long Chain)胶原 47

2章：胶原的分析 50

2.1 羟脯氨酸的定量 50

2.1.1 概述 50

2.1.2 Woessner的方法(第Ⅰ法) 51

2.1.3 Kivirikko,Laitinen.Prockop等人的方法 52

2.1.4 Inayama.Shibata,Ohtsuki Saito的方法 53

2.1.5 应用氨基酸分析仪的定量测定 54

2.2 离子交换及层析方法 55

2.2.1 概述 55

2.2.2 实验方法 56

2.3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE) 62

2.3.1 概述 62

2.3.2 一维SDS-PAGE 64

2.3.3 二维电泳 76

2.4 荧光自显影 86

2.4.1 概述 86

2.4.2 荧光自显影的原理 86

2.4.3 荧光自显影的实际操作 88

2.4.4 光密度检测的定量方法 92

2.4.5 荧光自显影时诸条件的探讨 93

2.4.6 PPO的回收 99

2.5 CB肽段的制备与分离 101

2.5.1 CB肽段的制备 101

2.5.2 CB肽段的分离 104

2.6 羟赖氨酸—糖化合物的分析 106

2.6.1 概述 106

2.6.2 实验方法 108

2.7 架桥的分析 118

2.7.1 还原性架桥的分析方法 118

2.7.2 非还原性架桥的分析方法 132

3章：免疫学的实验方法 142

3.1 抗胶原抗体的制备方法 142

3.1.1 概述 142

3.1.2 实验方法 142

3.2 抗体的检测方法 150

3.2.1 概述 150

3.2.2 实验方法 151

3.3 免疫组织化学的检测方法 164

3.3.1 概述 164

3.3.2 实验方法 165

3.4 免疫电镜的方法 180

3.4.1 概述 180

3.4.2 实验方法 180

3.5 迟发型过敏反应 188

3.5.1 概述 188

3.5.2 皮内试验 188

3.5.3 体外判断法:细胞移动抑制试验 194

4章: 胶原代谢的研究方法 199

4.1 应用细胞培养的胶原合成实验 199

4.1.1 组织(器官)细胞的分离 200

4.1.2 生物合成实验时培养系统的选择 201

4.1.3 放射性羟脯氨酸的定量 208

4.1.4 用细菌性胶原酶检测胶原合成率的方法 212

4.2 脯氨酸羟化酶、赖氨酸羟化酶 219

4.2.1 概述 219

4.2.2 脯氨酸羟化酶的测定方法 221

4.2.3 脯氨酸3-羟化酶活性的测定方法 228

4.2.4 赖氨酸羟化酶活性的测定方法 229

4.3 前胶原肽酶活性的测定 230

4.3.1 概述 230

4.3.2 实验方法 231

4.4 赖氨酰氧化酶 242

4.4.1 概述 242

4.4.2 实验方法 242

4.4.3 注意和存在的问题 247

4.5 胶原酶及有关胶原分解酶活性的测定方法 248

4.5.1 间质型胶原分解酶活性的检测方法 250

4.5.2 膜型(Ⅳ型及Ⅴ型)胶原分解酶活性的检测方法 263

4.5.3 明胶分解酶活性的测定方法 264

4.5.4 酶的活化 266