生物化学实验技术PDF电子书下载

实验室规则 1

实验误差与数据处理 2

实验记录及实验报告 4

第一章 生化基本技能实验 5

实验一　血液及组织样品的制备 5

实验二　蛋白质的沉淀反应 8

实验三　蛋白质的两性反应和等电点测定 9

实验四　酪蛋白的制备 11

实验五　氨基氮的测定——甲醛滴定法 12

实验六 总氮量的测定——微量凯氏定氮法 14

实验七 温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 17

实验八　琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 19

实验九　淀粉酶的活力及比活力测定 20

实验十　维生素C的定量测定 21

实验十一　费林试剂热滴定定糖法 23

实验十二　肝糖原的提取与鉴定 25

实验十三　果胶的提取 26

实验十四　粗脂肪的定量测定——索氏抽提法 28

实验十五　脂肪碘值的测定 29

实验十六　脂肪酸价的测定 31

第二章　分光光度技术 32

第一节 基本原理 32

一、光的基本知识 32

二、朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律 32

第二节 分光光度计结构简介 34

一、光源 34

二、单色器 34

三、狭缝 34

四、比色杯 34

五、检测系统 35

第三节 分光光度技术的应用 35

一、测定溶液中物质的含量 35

二、用紫外光谱鉴定化合物 36

第四节　分光光度法的误差 36

第五节 常见国产分光光度计的使用 37

一、721型分光光度计 37

二、722型分光光度计 38

三、751型分光光度计 38

四、使用分光光度计时的注意事项 39

实验十七　双缩脲法测定蛋白质含量 40

实验十八　Folin－酚法测定蛋白质含量 41

实验十九　紫外吸收法测定蛋白质含量 43

实验二十　蛋白酶活力测定 45

实验二十一　血清转氨酶活性测定 47

实验二十二　血糖的定量测定 49

实验二十三　总糖和还原糖测定 51

实验二十四　血清总脂测定 52

实验二十五　动物组织中核酸的提取与鉴定 54

实验二十六　酵母核糖核酸的提取及组分鉴定 57

实验二十七　紫外吸收法测定核酸的含量 59

实验二十八　二苯胺显色法测定DNA含量 61

实验二十九　地衣酚显色法测定RNA含量 62

实验三十 定磷法测定核酸含量 63

实验三十一　血清无机磷的定量测定 64

第三章　电泳技术 66

第一节 基本原理 66

第二节 醋酸纤维薄膜电泳 69

第三节　琼脂糖凝胶电泳 70

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 70

第五节 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 73

第六节　免疫电泳 73

第七节 等电聚焦电泳 74

实验三十二　乙酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质 74

实验三十三　聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离蛋白质 77

实验三十四　血清乳酸脱氢酶同工酶的分离与测定 80

实验三十五　DNA的琼脂糖凝胶电泳 82

实验三十六　等电聚焦法测定蛋白质等电点 84

实验三十七　对流免疫电泳 87

第四章　层析技术 90

第一节 基本原理 90

第二节　吸附层析 91

一、原理 91

二、吸附剂的选择 91

三、吸附能力 91

第三节　分配层析 92

一、原理 92

二、操作要点 92

第四节 离子交换层析 93

一、原理 93

二、离子交换剂的类型 93

三、离子交换层析基本操作 94

第五节　凝胶层析 95

一、原理 95

二、凝胶的种类 97

三、操作方法 100

四、应用 101

第六节　亲和层析 101

一、原理 101

二、操作方法 102

第七节 高效液相色谱法 103

一、原理 103

二、高效液相色谱仪 103

三、色谱方法的选择 104

四、操作及注意事项 105

实验三十八　纸层析法分离氨基酸 105

实验三十九　薄层层析法分离氨基酸 107

实验四十 血清脂类硅胶G薄层层析 108

实验四十一　葡聚糖凝胶SephadexG-25柱层析法脱盐和分离蛋白质 109

实验四十二　葡聚糖凝胶SephadexG-100柱层析法测定蛋白质相对分子质量 111

实验四十三　离子交换柱层析法分离混合氨基酸 113

实验四十四　离子交换柱层析法制备无离子水 114

第五章　离心技术 117

第一节　基本原理 117

一、相对离心力 117

二、沉降系数 118

三、沉降速度 119

四、沉降时间 119

第二节 离心机的性能及用途 119

一、低速离心机 120

二、高速离心机 120

三、超速离心机 120

第三节 离心方法 121

一、差速离心 121

二、速度区带离心 121

三、等密度梯度离心 122

四、离心操作要领 122

实验四十五 细胞核的分离和纯化 123

实验四十六 质粒DNA的提取 125

第六章　生物大分子制备技术 128

第一节 材料的选择和预处理 128

第二节 细胞的破碎及细胞器的分离 128

一、细胞的破碎 128

二、细胞器的分离 130

第三节 提取和纯化 130

一、蛋白质（包括酶）的提取 130

二、蛋白质的分离纯化 131

三、核酸的提取 132

四、核酸的纯化 133

五、核酸的浓缩 133

第四节　浓缩、干燥及保存 134

一、样品的浓缩 134

二、干燥 134

三、保存 135

实验四十七　动物组织DNA与RNA的分离和提纯 136

实验四十八　蛋清溶菌酶的制备及活力测定 138

实验四十九　血清免疫球蛋白G的分高纯化及鉴定 140

实验五十 细胞色素c的制备及测定 144

实验五十一　碱性磷酸酶的分离纯化 149

附录 153

一、试剂的配制 153

（一）常用溶液浓度的单位及计算 153

（二）标准溶液的配制与标定 154

（三）常用缓冲溶液的配制 155

（四）玻璃仪器的清洗及各种洗液的配制 160

二、常用参数 162

（一）一般化学试剂的分级 162

（二）易变质和需要特殊方法保存的试剂 162

（三）常用酸碱的相对密度和质量分数，物质的量浓度的关系 163

（四）硫酸铵饱和度常用表 163

（五）指示剂 165

（六）元素原子量表 167

（七）离心机转速与相对离心力的换算 168