氧化应激状态下维持黑素小体蛋白低免疫原性的分子机制研究PDF电子书下载

引言 1

第一章 Dct突变对黑素小体蛋白表达及其相关生物学功能的影响 3

1.1实验材料 3

1.1.1细胞来源 3

1.1.2主要仪器设备 4

1.1.3主要试剂及其配制 5

1.2实验方法 17

1.2.1细胞培养 17

1.2.2胞内ROS水平测定 17

1.2.3过氧化氢酶酶活力测定 18

1.2.4不连续蔗糖梯度离心[23] 19

1.2.5蔗糖梯度离心片段酪氨酸酶活性测定 20

1.2.6蔗糖梯度离心片段Det活性测定[25-26] 21

1.2.7蔗糖梯度离心片段电镜检查[18] 22

1.2.8 Western蛋白印迹检测蔗糖梯度离心片段Tyr、Tyrp1、Dct蛋白表达[27] 22

1.3统计学处理与结果 24

1.3.1 slaty与melan-a黑素细胞Tyr、Dct和过氧化氢酶活力比较 24

1.3.2 slaty MC与melan-a MC过氧化氢处理前后胞内ROS水平比较 26

1.3.3 slaty MC与melan-a MC蔗糖梯度离心片段超微结构观察 26

1.3.4 slaty MC与melan-a MC早期和晚期黑素生成蛋白表达水平及酶活性比较 28

1.4讨论 30

第二章 Dct调控的氧化应激改变对黑素小体蛋白免疫原性的影响 33

2.1实验材料 33

2.1.1 CB6F1小鼠来源 33

2.1.2主要仪器设备 33

2.1.3主要试剂及其配制 34

2.2实验方法 38

2.2.1 CB6F1（H2d×2b）小鼠免疫 38

2.2.2 CB6F1（H2d×2b）小鼠T淋巴细胞分离及培养 39

2.2.3 CB6F1（H2d×2b）小鼠眼眶静脉丛血样采集 40

2.2.4黑素小体蛋白诱导的体液免疫反应测定 40

2.2.5黑素小体蛋白诱导的细胞免疫反应测定 41

2.3统计学处理与结果 42

2.3.1黑素小体蛋白免疫CB6F1小鼠后解剖学观察 42

2.3.2黑素小体蛋白免疫CB6F1小鼠后T淋巴细胞形态学观察 43

2.3.3 slaty MC和melan-a MC早期与晚期黑素小体蛋白免疫原性的比较 45

2.3.4氧化应激对黑素小体蛋白免疫原性的影响 47

2.4讨论 50

第三章 合成的DHI/DHICA（1：1）-优黑素在维持黑素小体蛋白低免疫原性中的作用 53

3.1实验材料 53

3.1.1 CB6F1小鼠来源 53

3.1.2主要仪器设备 53

3.1.3主要试剂及其配制 54

3.2实验方法 58

3.2.1 CB6F1（H2d×2b）小鼠免疫 58

3.2.2 CB6F1（H2d×2b）小鼠T淋巴细胞分离及培养 59

3.2.3 CB6F1（H2d×2b）小鼠眼眶静脉丛血样采集 60

3.2.4黑素小体蛋白诱导的体液免疫反应测定 60

3.2.5黑素小体蛋白诱导的细胞免疫反应测定 61

3.3统计学处理与结果 61

3.3.1合成的DHI与DHI/DHICA（1：1）-优黑素对小鼠免疫反应的初步观察 62

3.3.2合成的DHI/DHICA（1：1）-优黑素对维持黑素小体蛋白低免疫原性影响 63

3.4讨论 67

第四章 结论 70

参考文献 71

致谢 79