生物化学与分子生物学实验技术教程 第3版PDF电子书下载

第一章定量分析技术 1

第一节 滴定分析法 1

一、基本原理 1

二、标准溶液 3

三、滴定分析的计算 4

四、减小滴定误差的方法 6

第二节紫外可见分光光度法 7

一、基本原理 7

二、分光光度计的主要部件 8

三、分光光度法的定性和定量 9

四、减小测定误差的方法 10

第三节 荧光分析法 11

一、基本原理 11

二、荧光仪的主要部件 12

三、荧光分析法的定性和定量 12

四、减小测量误差的方法 14

第四节 酶活力及动力学数据的测定 14

一、酶活力的测定 15

二、Km和Vmax的测定 17

三、其他动力学数据的测定 17

实验1-1粗脂肪的提取和定量测定 18

实验1-2碘价的测定（Hanus法） 19

实验1-3皂化价的测定 20

实验1-4酸价的测定 21

实验1-5蛋白质的测定（凯氏定氮法） 21

实验1-6 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量 23

实验1-7碘量法测定维生素C的含量 24

实验1-8血糖定量测定（GOD-PAP法） 25

实验1-9蒽酮比色定糖法 26

实验1-10 3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量 26

实验1-11血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法） 27

实验1-12血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法） 28

实验1-13双缩脲法测定蛋白质含量 29

实验1-14 Folin试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量 29

实验1-15考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 30

实验1-16紫外吸收法测定蛋白质含量 31

实验1-17紫外吸收法测定核酸含量 32

实验1-18二苯胺显色法测定DNA含量 33

实验1-19地衣酚显色法测定RNA含量 34

实验1-20荧光法测定维生素B2含量 34

实验1-21血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）的测定 35

实验1-22酸性磷酸酯酶的测定 37

第二章提取、沉淀和离心分离技术 38

第一节提取技术 38

一、材料的选择与处理 38

二、细胞的破碎 39

三、抽提 40

第二节 沉淀分离技术 42

一、蛋白质的沉淀分离 42

二、核酸的提取与沉淀分离 45

三、多糖的提取和分离 46

四、小分子活性成分的提取和分离 48

第三节 膜分离技术 56

一、膜分离技术的分类 56

二、膜的分类 57

三、膜的使用寿命 57

四、透析 58

五、微滤、超滤和反渗透 59

第四节 提取物的浓缩、结晶和干燥 60

一、浓缩 60

二、结晶 62

三、干燥 63

第五节 离心分离技术 64

一、离心机的种类与用途 64

二、离心分离方法的选择 65

三、离心条件的确定 66

四、离心操作的注意事项 68

实验2-1香菇多糖的制备 68

实验2-2卵磷脂的制备 69

实验2-3大蒜SOD的提取与分离 71

实验2-4菜花（花椰菜）中核酸的分离和鉴定 72

实验2-5酵母RNA的提取与分离 73

实验2-6从肝脏中提取DNA 74

第三章层析技术 76

第一节 吸附层析 76

一、吸附柱层析 77

二、大孔吸附树脂和聚酰胺柱层析 80

三、聚酰胺薄膜层析 81

第二节 分配层析 82

一、概述 82

二、纸层析 83

第三节 凝胶层析 86

一、基本原理 86

二、凝胶的选择 87

三、操作 88

第四节 离子交换层析 89

一、基本原理 89

二、离子交换剂 90

三、操作 93

第五节 亲和层析 95

一、配基与偶联凝胶的选择与处理 95

二、亲和层析的操作条件 96

第六节 薄层层析 96

一、支持剂的选择与处理 97

二、薄层板的制作 97

三、层析方法 98

第七节 气相色谱 99

一、基本原理 99

二、气相色谱的气路系统 100

三、色谱柱 100

四、检测器 102

五、定性和定量方法 102

第八节 高效液相色谱 103

一、概述 103

二、HPLC的特点 103

三、HPLC的分类 104

四、HPLC的仪器构成 105

五、定性定量方法 106

实验3-1氨基酸的纸层析 107

实验3-2微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸 108

实验3-3核苷酸的离子交换层析 109

实验3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 110

实验3-5凝胶层析测定蛋白质的Mr 111

实验3-6胰蛋白酶的亲和层析 112

实验3-7 HPLC法测定生物类黄酮含量 113

实验3-8 HPLC法测定维生素A含量 114

第四章 电泳技术 115

第一节 基本原理 115

一、泳动度 115

二、影响泳动度的因素 116

第二节 乙酸纤维素薄膜电泳 117

第三节 琼脂糖凝胶电泳 118

一、琼脂糖凝胶的特点 118

二、DNA的琼脂糖凝胶电泳 119

三、印迹转移电泳 120

四、交变脉冲电场凝胶电泳 120

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 121

一、聚丙烯酰胺凝胶的特点 121

二、凝胶聚合的原理及有关特性 122

三、PAGE原理 124

四、SDS-PAGE原理 125

五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理 126

六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理 129

第五节 高效毛细管电泳 130

一、基本原理 130

二、实验方法 131

三、分离类型及应用 132

第六节 免疫分析技术 133

一、抗体的性质和制备 133

二、抗原抗体反应 137

实验4-1血清蛋白的乙酸纤维素薄膜电泳 141

实验4-2垂直板PAGE分离血清蛋白 143

实验4-3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量 144

实验4-4等电聚焦电泳测定血清蛋白质等电点 145

实验4-5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 147

实验4-6 PAGE分离RNA 148

实验4-7对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白 149

实验4-8火箭免疫电泳法测定抗原含量 150

第五章 分子生物学基本技术 151

第一节DNA的体外合成 151

一、DNA的化学合成 151

二、聚合酶链反应技术 152

第二节 核酸的分子杂交 156

一、探针的种类与选择 156

二、标记物的选择 157

三、探针的放射性同位素标记 158

四、探针的非放射性标记 158

五、膜上印迹杂交的条件选择 159

六、杂交信号的检测 161

七、DNA芯片技术及应用 162

第三节 基因克隆 163

一、目的基因的来源 163

二、常用的克隆载体 164

三、DNA分子的体外连接 166

四、重组子导入受体细胞 167

五、重组子的筛选 167

六、基因组文库的构建 169

七、cDNA文库的构建 170

第四节 基因表达 172

一、原核生物的表达载体 173

二、用于原核细胞表达的外源基因 174

三、提高表达水平的措施 174

四、外源基因在酵母细胞中的表达 177

五、外源基因在昆虫杆状病毒中的表达 178

六、外源基因在哺乳动物细胞中的表达 179

第五节 转基因植物和转基因动物 182

一、转基因植物 182

二、转基因动物 183

第六节 核酸的序列测定 185

一、链终止法 186

二、新一代高通量测序技术 186

实验5-1植物基因组DNA的提取 188

实验5-2动物基因组DNA的提取 190

实验5-3细菌基因组DNA的提取 191

实验5-4质粒DNA的提取 192

实验5-5聚合酶链式反应（PCR） 194

实验5-6质粒DNA的酶切及电泳鉴定 195

实验5-7 DNA重组 196

实验5-8大肠杆菌的转化 196

实验5-9外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 197

第六章 综合性实验和设计性实验 198

实验6-1超氧化物歧化酶的分离纯化和同工酶分析 199

实验6-2蛋白质印迹分析 203

实验6-3蛋白质的双向凝胶电泳 205

附录一 实验数据的处理 206

附录二 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 211

附录三 常见生化物质电泳后的染色方法 212

附录四 常用缓冲液的配制 215

参考书目 220