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第一章 放射配体分析 1

第一节 放射配体分析的基本原理、技术条件、质量控制及有关问题 1

一、放射配体分析的基本原理 1

二、抗原和标准品 2

三、抗血清的制备和鉴定 5

四、抗原的标记 7

五、加样程序及分离技术 8

六、标准曲线、Scatchard作图及K值 10

七、放射免疫分析中的质量控制 13

八、放射免疫分析的有关问题 16

第二节 放射免疫测定 18

一、促甲状腺激素、滤泡刺激素、促黄体激素、生长激素和催乳素氯胺T碘化标记 18

二、促甲状腺激素、滤泡刺激素、促黄体激素、生长激素和催乳素放射免疫测定 19

三、睾丸酮放射免疫测定 20

四、抑制素放射免疫测定 22

五、孕酮放射免疫测定 23

六、雌二醇放射免疫测定 25

七、三碘甲状腺原氨酸（T3）放射免疫测定 27

八、甲状腺素（T4）放射免疫测定 28

九、促肾上腺皮质激素（ACTH）的碘化标记及其放射免疫测定 29

十、β-内啡呔（β-EP）的碘化标记及其放射免疫测定 33

十一、脑组织中神经肽放射免疫测定 35

十二、胰岛素放射免疫（双抗体法）测定 39

十三、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的氯胺T碘化法 40

十四、蛋白质酶促放射性标记法 42

十五、环磷酸鸟苷放射免疫测定 43

第三节 竞争性蛋白质结合分析 45

一、皮质醇（酮）测定 45

二、环磷酸腺苷蛋白质结合测定 46

第四节 放射受体分析 48

一、大鼠脾细胞糖皮质激素受体分析 48

二、大鼠肝细胞糖皮质激素受体分析 50

三、雌二醇受体分析 52

四、应用125I标记ACTH进行免疫细胞受体分析 53

第二章 组织培养技术 57

第一节 组织培养基本知识、实验室条件、培养用液及培养技术 57

一、组织培养概念 57

二、组织培养实验室设计和设备 61

三、培养用液 63

四、清洗与消毒 67

五、培养基本要领和操作要求 69

第二节 细胞、组织培养 74

一、大鼠垂体细胞单层培养及其分泌功能测定 74

二、Leydig细胞及Sertoli细胞离体培养 75

三、大鼠卵巢颗粒细胞单层培养及其功能的测定 76

四、肾上腺组织制备及培养 78

五、粒-巨噬系造血祖细胞体外培养 79

六、人骨髓成纤维细胞集落形成培养 80

七、小鼠脾淋巴细胞混合培养 81

八、人周围血液单核细胞分离 83

九、悬浮细胞在半固体琼脂内集落形成 86

第三节 杂交瘤技术 88

一、杂交瘤技术的基本原理 88

二、实验材料和方法 89

三、杂交瘤细胞的制备 90

四、杂交瘤细胞的选择性培养 92

五、杂交瘤细胞的筛选 93

六、杂交瘤细胞的克隆化 96

七、单克隆抗体的制备 98

八、杂交瘤细胞的冻存和复苏 99

九、污染和控制 100

十、单克隆抗体的特性 101

十一、单克隆抗体的纯化 102

十二、筛选和鉴定单克隆抗体的方法 105

附 聚乙二醇溶液、阿氏液、2-巯基乙醇溶液及几种染液配制 112

第三章 细胞遗传学实验技术 114

第一节 人淋巴细胞染色体技术 114

一、常规制备人外周血淋巴细胞染色体标本 114

二、姊妹染色单体差别染色 116

附 BudR参入后细胞分裂周期鉴别及SCE分析 117

三、人外周血淋巴细胞微核标本制备 118

附 微核判定标准 119

第二节 哺乳动物体细胞染色体标本制备方法 119

一、家兔外周血染色体标本制备 119

二、小鼠骨髓细胞染色体标本制备 120

三、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 122

第三节 生殖细胞染色体标本制备 123

一、雄性生殖细胞染色体标本制备 123

二、雌性生殖细胞染色体标本制备 126

第四节 染色体畸变类型和判定标准 127

一、人类染色体畸变类型 127

二、小鼠染色体畸变类型 128

第四章 分子生物学实验技术 132

第一节 制备转基因小鼠技术 132

一、真核细胞DNA的快速制备 132

二、真核细胞DNA制备的一般方法 133

三、组织和培养细胞DNA提取、制备 134

四、限制性内切酶 135

五、琼脂糖凝胶电泳 137

六、Southem转印 138

七、缺口翻译 139

八、DNA分子杂交（Southern转印杂交） 140

九、细菌的转化 141

十、质粒DN A制备——Triton-Lysozyme法 143

十一、异硫氰酸胍法提取制备总RNA 145

十二、聚丙酰胺序列电泳凝胶的制备 146

十三、S1核酸酶保护测定 147

十四、转基因小鼠的制备 152

第二节 确定四膜虫rDNA特异序列位置技术 156

一、四膜虫rRNA基因（rDNA）提取 156

二、应用琼脂糖凝胶电泳纯化四膜虫rDN A片段 157

三、Southern转移确定四膜虫rDNA特异序列位置 159

四、应用分子杂交进一步确定四膜虫rDNA特异序列位置 160

第三节 几种检测DNA损伤技术 162

一、快速测定DNA损伤方法 162

二、DNA聚合酶活性测定 163

三、外周血淋巴细胞DNA非程序合成测定（液闪法） 164

第四节 有关rRNA合成测定及mRNA体外翻译技术 165

一、四膜虫核糖体RNA合成的测定 165

二、ConA活化淋巴母细胞mRNA的体外翻译技术 167

第五章 免疫学实验技术 170

第一节 免疫沉淀反应 170

一、血清中IgG、IgA和IgM测定（琼脂单相免疫扩散法） 170

二、双向免疫扩散 172

三、免疫电泳 173

第二节 T淋巴细胞功能测定 175

一、E玫瑰花结反应——一种计数T淋巴细胞方法 175

二、人T细胞亚群（Tr、Tμ）检测 176

三、α-醋酸萘酯酶（ANAE）染色检测T淋巴细胞 178

四、淋巴细胞转化试验3H-TdR参入法（微量全血法） 180

附氚衰变表 181

五、淋巴细胞转化试验形态学方法 182

六、双重双标记法检测淋巴细胞内三种大分子合成 184

七、单克隆抗体免疫荧光染色及流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞亚群 184

第三节 B淋巴细胞功能测定 186

一、酵母多糖-补体3复合物花环形成法（ZYC花环形成法）——一种检测B细胞方法 186

二、溶血空斑试验（液相单层玻片法） 187

第四节 淋巴因子测定 189

一、胸腺细胞对白细胞介素1反应性测定 189

二、脾细胞IL-2产生及活性测定 190

三、小鼠肿瘤坏死因子的诱生及检测 191

四、干扰素活性测定 192

第五节 细胞毒技术 196

一、抗体依赖细胞介导的细胞毒（ADDC）活性测定 196

二、小鼠脾脏NK细胞活性测定 198

三、淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）活性测定（125I-UdR释放法） 199

第六节 免疫组织化学及放射自显影术 200

一、组织石蜡切片 200

二、免疫组织化学技术 202

三、细胞贴附放射自显影术 205

四、组织切片放射自显影术 206

第六章 蛋白质及其他物质提取、纯化、鉴定及其测定技术 209

第一节 蛋白质及酶的提取和纯化 209

一、组织细胞破碎 209

二、样品的浓缩、干燥和保存 210

三、蛋白质及酶的提取和纯化 211

第二节 层析技术 213

一、纸层析 213

二、薄层层析 214

三、应用薄层吸附层析法检查氚标地基米松放化纯度 215

四、凝胶层析 216

五、离子交换层析 221

第三节 电泳技术 225

一、十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 225

二、聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 227

第四节 几种蛋白质的制备及其测定 228

一、滤泡刺激素的提取、纯化及其生物学特性测定 228

二、动物垂体促黄体激素的分离和纯化 229

三、抑制素的制备及其生物活性测定 231

四、免疫球蛋白IgG的提取、纯化和羊抗兔IgG的制备 232

五、植物血球凝集素（PHA）的制备 235

六、蛋白质定量测定——Lowry氏法 236

七、应用紫外光吸收法计算蛋白质浓度 237

第五节 组织中自由基及其抗氧化酶测定 238

一、体内的自由基反应 238

二、组织中自由基的测定——电子自旋共振法 241

三、TBA显色法测定组织中过氧化脂质 242

四、化学发光法测定组织中超氧化物歧化酶 243

五、DTNB直接法测定血液和组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力 244

第六节 色氨酸、抗坏血酸测定及氚化5-羟色胺在体内组织中分布实验 246

一、应用分光光度法测定游离或结合色氨酸 246

二、肾上腺抗坏血酸测定 247

三、氚化5-羟色胺在下丘脑、垂体及肾上腺中分布实验 248

第七章 仪器使用及动物模型建立 250

第一节 液体闪烁计数仪及γ计数仪 250

一、液体闪烁计数仪的主要部件和使用 250

二、γ计数仪的主要部件和使用 253

第二节 高效液相色谱法及其应用技术 257

一、概述 257

二、液相色谱法的基本原理 258

三、色谱柱及其参数的选择 260

四、检测器 261

五、定性与定量方法 262

六、高效液相色谱分离类型的选择 264

七、HPLC法测定组织中单胺类化合物 264

八、反相HPLC荧光检测法检测人血浆中α-生育酚 265

九、吉林红参中多肽的HPLC法分离 266

十、氨基酸的高效液相色谱分析 266

第三节 气相色谱法及其在医学研究的应用 267

一、气相色谱法基本原理 267

二、气相色谱仪的组成 268

三、气相色谱法的定性与定量分析 272

四、气相色谱法在医学上的应用 272

第四节 双光束紫外可见分光光度计及分光光度法的应用 274

一、分光光度法的基本原理 274

二、双光束紫外-可见分光光度计构造 274

三、分光光度法 275

四、分光光度法的应用 276

第五节 荧光分析法及荧光分光光度计的应用 278

一、概述 278

二、化学结构和荧光 278

三、浓度与荧光强度的关系 279

四、荧光仪器 279

五、荧光分析的应用 282

六、荧光法测定核黄素（维生素B2） 282

七、荧光法测定组织中吲哚胺 283

第六节 流式细胞仪原理与应用 284

一、流式细胞仪的工作原理和基本构造 284

二、细胞的分析与分选 285

三、流式细胞仪主要特点 285

四、流式细胞术的应用范围及样品测定步骤 285

五、样品制备 287

六、微量全血溶解染色法测量T淋巴细胞亚群（间接荧光法） 289

七、单荧光染色的细胞周期测定方法 290

第七节 原子吸收分光光度计及应用原子吸收分光光度法测定发锌含量 290

一、原子吸收分光光度计的工作原理 291

二、原子吸收分光光度计 291

三、毛发中锌的测定——火焰原子吸收分光光度法 293

第八节 多道分析器及其核分析技术在生物医学中的应用 294

一、多道分析器的工作原理 294

二、核分析方法概述 295

三、中子活化分析 295

四、同位素源激发X射线荧光分析 296

第九节 超薄切片机及超薄切片术 302

一、超薄切片机 302

二、标本的制作 302

三、超薄切片步骤 303

四、制备优良的超薄切片条件 305

五、超薄切片的常规染色法 305

六、半薄切片的制作及染色 306

第十节 超速离心机及菲利普深部X光治疗机的应用 306

一、超速离心机的使用 306

二、菲利普深部X光治疗机在实验中的应用 308

第十一节 动物模型的建立 310

一、小鼠实体瘤模型制备 310

二、大鼠去垂体术 311

三、大鼠睾丸摘除术 312

四、初生期大鼠胸腺摘除术 312

五、鼠类动物弓状核药物损毁模型 313

六、吗啡耐受动物模型 313

七、大鼠肾上腺摘除术 314

第十二节 大鼠脑立体定位 315

一、大鼠脑立体定位术 315

二、大鼠第三脑室定位插管 315

第十三节 大鼠剖腹探查及颈静脉插管 316

一、大鼠剂腹探查诊断妊娠 316

二、大鼠颈静脉插管术 317

第八章 医学生物学中的数学模型及其计算机拟合 318

第一节 数学模型 319

一、数学模型的分类及建立数学模型的方法与步骤 319

二、医学生物学中的数学模型实例 321

第二节 计算机拟合程序 337

一、XFIT单变量的最小二乘拟合 337

二、LINFIT直线的最小二乘拟合 338

三、POLFIT多项式的最小二乘拟合 340

四、LEGFIT勒让德多项式的最小二乘拟合 343

五、REGRES多重线性回归拟合 348

六、FCTN用于REGRES的幂级数拟合函数 352

七、FCTN用于REGRES的勒让德多项式拟合函数 353

八、FCHISQ拟合的约化x2 x2u 354

九、GRIDLS非线性函数网格寻优最小二乘拟合 356

十、FUNCTN（高斯函数＋二次多项式）非线性拟合函数 358

十一、GRADLS非线性函数的梯度寻优最小二乘拟合 359

十二、CHIFIT采用x2抛物线外推法的最小二乘拟合 362

十三、CURFIT拟合函数线性化的最小二乘拟合 366

十四、FDERIV（高斯函数＋二次多项式）拟合函数的导数 370

十五、FDERIV无解析形式的拟合函数的导数 371

十六、SMOOTH平滑化过程 372

十七、INTERP数据的内插与外推 373

十八、AREA面积的数值积分 375

十九、INTEG面积积分子程序 377

二十、DETERM方矩阵的行列式 378

二十一、MATINV矩阵求逆 380

附录 383

1 常用缓冲液配制、药物浓度计算、酒精稀释法、各种酸碱浓度及人工培养基 383

一、常用缓冲液配制 383

二、药物浓度计算 388

三、酒精稀释法 389

四、各种酸碱浓度 389

五、常用人工合成培养基 390

2 化学试剂分级、激素国际标准、国外测定药盒及激素正常值 391

一、化学试剂分级 391

二、激素的国际标准和国际参考制剂 392

三、国外测定药盒的指标值 394

四、人体26种激素正常值 396

3 冷却剂、干燥剂、需特殊保存的试剂、指示剂、滤纸、滤膜及相对离心力换算 402

一、冷却剂 402

二、干燥剂 402

三、硝酸纤维素膜与尼龙膜的比较表 403

四、易变质和需用特殊方法保存的常用试剂 404

五、常用酸碱和混合指示剂 405

六、层析滤纸的规格与性能 407

七、离心转数与相对离心力（g）的换算 407

4 度量衡单位、医学许用和非许用单位及医学检验新旧单位换算 408

一、常量、微量和超微量度、量、衡单位名称 408

二、与医学有关的许用和非许用单位 409

三、医学检验新旧单位换算 414

5 辐射剂量单位、放射性衰变表及放射性去污方法 434

一、辐射剂量单位 434

二、放射性衰变表 438

三、放射性去污方法 441

6 动物近交品系命名法、精液采取法、肿瘤接种法、常用麻醉剂、主要传染病及某些生物学数据 442

一、近交品系命名法 442

二、各种动物精液采取方法和精液特点 444

三、常用动物肿瘤接种方法 444

四、动物常用麻醉剂 445

五、动物主要易患传染病 446

六、成年动物正常体温、呼吸、脉博、尿比重、体表面积及血压值 447

七、实验动物红细胞、血红蛋白、白细胞及血小板数 449

八、实验动物生化指标参考值 452

九、实验动物染色体数目、正常组织细胞分裂各间期的时间及细胞更新速度 454

十、不同种类生物的LD50 456

十一、实验动物繁殖生理数据及其寿命 457

十二、实验动物重要脏器重量、与体重之比以及年龄与体重的关系 459

十三、实验动物饲料、饮水要求量和排便排尿量及1次灌胃能耐受的最大容量 461

十四、实验动物的营养需要量、循环时间及所需的活动面积 462

十五、供实验用的各种动物体重要求及采血量 463