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第一章 概论 1

第一节 一般知识 1

一、玻璃仪器的洗涤 1

二、试剂、试剂的浓度及配制 2

三、实验记录、实验数据的整理和实验报告 3

四、实验的准确度和精密度 4

第二节 材料的选择与处理 6

一、材料的选择 6

二、材料的预处理 6

三、细胞破碎 7

第三节 悬浮介质的选择原则 8

一、维持渗透压 8

二、维持pH 8

三、消除有害因素 10

四、保持溶液一定的极性和离子强度 10

五、温度 10

第四节 实验方案的确定 11

第二章 离心技术 12

第一节 离心的基本原理 12

第二节 离心机 14

一、制备离心机 14

二、分析离心机 15

三、转头 15

四、离心机的操作和注意事项 16

第三节 常用离心技术 17

一、沉淀离心 17

二、差速离心 17

三、密度梯度离心 18

第四节 应用实例 20

一、叶绿体的分离与制备 20

二、线粒体的分离与制备 21

第三章 沉淀与浓缩技术 24

第一节 沉淀技术 24

一、沉淀技术的基本原理 24

二、盐析法 25

三、有机溶剂沉淀法 28

第二节 浓缩技术 30

一、沉淀浓缩法 30

二、吸附法 30

三、超过滤法 30

四、减压蒸馏浓缩法 31

五、冷冻干燥法 31

第三节 应用实例 31

一、酵母RNA的分离提取 31

二、动物组织中核酸的提取与鉴定 33

三、质粒DNA的提取、酶切与鉴定 35

四、蛋白质的两性性质及等电点的测定 37

第四章 电泳技术 39

第一节 概述 39

一、泳动度 39

二、影响泳动度的外界因素 39

三、电泳技术的分类 40

四、电泳技术相关仪器 41

第二节 常用电泳技术 42

一、纸电泳和醋酸纤维素薄膜电泳 42

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳 42

三、SDS-PAGE 45

四、琼脂糖凝胶电泳 46

五、等电聚焦电泳 46

六、双向电泳 47

第三节 染色方法 47

一、蛋白质染色方法 47

二、核酸染色方法 49

三、糖蛋白染色方法 50

第四节 应用实例 52

一、醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 52

二、醋酸纤维素薄膜电泳分离腺苷酸 54

三、聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离过氧化物酶同工酶 55

四、SDS-PAGE测定超氧化物歧化酶的相对分子质量 57

第五章 层析技术 59

第一节 概述 59

一、层析技术的原理和分类 59

二、层析的常用术语 59

三、柱层析的设备与操作 60

四、薄层层析的设备与操作 62

第二节 凝胶过滤 63

一、凝胶过滤的基本原理 63

二、常用凝胶过滤材料 65

三、凝胶过滤的操作 67

四、凝胶过滤法的应用 69

五、应用实例 69

第三节 分配层析 71

一、分配层析的基本原理 71

二、影响迁移率的因素 72

三、应用实例 72

第四节 吸附层析 75

一、吸附层析的基本原理 75

二、吸附剂 75

三、洗脱液 76

四、应用实例——植物组织中可溶性糖的硅胶G薄层层析 77

第五节 离子交换层析 78

一、离子交换层析的基本原理 78

二、离子交换剂 79

三、离子交换层析的操作 81

四、应用实例——血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定 83

第六节 亲和层析 85

一、亲和层析的基本原理 85

二、亲和层析的操作 86

第七节 气相色谱 87

一、气相色谱仪的基本装置和分析流程 87

二、气相色谱的基本原理 88

第八节 高效液相色谱 88

第六章 分光光度技术 90

第一节 概述 90

第二节 分光光度计的构造及使用 90

一、分光光度计的一般构造 90

二、721型分光光度计 92

三、紫外-可见分光光度计 92

第三节 应用实例 93

一、糖的定量测定 93

二、血液中葡萄糖的测定（福林-吴宪氏法） 99

三、蛋白质含量的测定 101

四、花椰菜DNA的提取与二苯胺显色法测定DNA的含量 107

五、淀粉酶活性的测定 109

六、转氨酶活性的测定（金氏法） 111

七、过氧化氢酶活性的测定 114

八、乳酸脱氢酶活性的测定 115

九、酵母发酵过程中无机磷的利用 118

十、植物组织中丙二醛含量的测定 119

十一、脯氨酸含量的测定 120

十二、血清总脂的测定（香草醛法） 122

十三、生物组织中固醇含量的测定（磷硫铁法） 123

第七章 滴定技术 126

第一节 概述 126

一、滴定分析法的概念 126

二、滴定技术的分类 126

第二节 应用实例 127

一、维生素C含量的测定 127

二、植物呼吸酶活性的测定 131

三、过氧化氢酶活性的测定 134

第八章 生物化学技术的综合应用 136

第一节 酶活性的测定 136

一、酶的专一性及影响酶促反应速度的因素 136

二、琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制作用的观察 138

三、大蒜中SOD的提取、纯化及活性测定 139

第二节 植物基因组DNA的提取 144

第三节 PCR技术扩增DNA片段 145

第四节 DNA琼脂糖凝胶电泳 146

第五节 Southern杂交 146

附录 149

一、常用的基本单位 149

二、常用化合物的性质 151

三、常用缓冲液的配制 152

参考文献 161