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上篇 生物化学实验技术概论 1

一、生物化学的概念、研究对象、研究内容 1

二、生物化学常用的实验研究技术 1

（一）生物大分子的制备和保存技术 1

（二）分光光度技术 10

（三）色谱技术 11

（四）电泳技术 12

（五）离心技术 13

（六）免疫组化技术 15

中篇 生物化学基础性实验 16

第一部分 核酸 16

实验一 利用CTAB法提取植物总DNA 16

实验二 利用SDS-苯酚法提取动物基因组总DNA 19

实验三 质粒DNA的制备与纯化 21

实验四 酵母RNA的分离及组分鉴定 24

实验五 离子交换层析分离核苷酸 26

实验六 醋酸纤维素薄膜电泳分离核苷酸 28

实验七 DNA的琼脂糖凝胶电泳 30

实验八 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 32

实验九 PCR技术扩增DNA 34

实验十 Southern印迹杂交 36

第二部分 蛋白质 39

实验十一 氨基酸的纸层析 39

实验十二 氨基酸的纤维素薄层层析 42

实验十三 氨基酸的硅胶G薄层层析 43

实验十四 利用茚三酮溶液显色法测定植物组织氨基酸总量 45

实验十五 谷物种子中赖氨酸含量的测定 47

实验十六 玉米种子中色氨酸含量的测定 49

实验十七 植物组织中脯氨酸含量的测定 50

实验十八 蛋白质的盐析与透析 52

实验十九 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 53

实验二十 Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量 56

实验二十一 考马斯亮蓝法测定植物组织中可溶性蛋白质含量 58

实验二十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 60

实验二十三 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 63

实验二十四 免疫印迹 66

第三部分 酶及维生素 70

实验二十五 环境条件对酶促反应的影响 70

实验二十六 小麦幼苗淀粉酶活性的测定 72

实验二十七 脂肪酶活性的测定 75

实验二十八 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 77

实验二十九 硝酸还原酶活性的测定 78

实验三十 超氧化物歧化酶活性的测定 81

实验三十一 植物呼吸酶活性的测定 83

实验三十二 脲酶米氏常数的简易测定 86

实验三十三 亲和层析纯化胰蛋白酶 88

实验三十四 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离植物过氧化物酶同工酶 90

实验三十五 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法分离酯酶 93

实验三十六 还原型维生素C含量的测定 96

实验三十七 荧光法测定维生素B1含量 98

第四部分 糖类 101

实验三十八 还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法） 101

实验三十九 可溶性糖的硅胶G薄层层析 103

实验四十 蒽酮比色法测定植物组织可溶性糖含量 106

实验四十一 谷物淀粉含量的测定（旋光法） 108

实验四十二 植物组织淀粉和纤维素含量的测定 110

实验四十三 糖酵解中间产物的鉴定 113

第五部分 脂类 115

实验四十四 粗脂肪的定量测定 115

实验四十五 油料种子油脂含量的快速测定 116

实验四十六 卵黄中卵磷脂的提取、纯化与鉴定 118

实验四十七 油脂皂化值的测定 120

实验四十八 油脂碘值的测定 121

实验四十九 油脂酸值的测定 123

下篇 综合性、设计性与研究性实验 126

实验五十 植物叶片膜脂脂肪酸组分对低温的响应 126

实验五十一 植物细胞基因组DNA的提取与定量测定 127

实验五十二 植物苯丙氨酸解氨酶的提取、纯化及活力测定 129

实验五十三 天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定 132

实验五十四 种子蛋白质的系统分析 134

实验五十五 大米蛋白质的分离及含量测定 139

实验五十六 血清γ球蛋白的分离、纯化与分析 141

实验五十七 探讨不同因素对植物抗氧化酶活性的影响 144

实验五十八 果蔬维生素C的提取及体外抗氧化作用研究 148

附录1 常用缓冲溶液的配制 151

附录2 实验室安全及防护知识 156

附录3 实验场地警告标志 157

参考文献 162