生物化学实验技术 第2版PDF电子书下载

第一部分 实验技术理论 3

1.1 离心技术 3

1.1.1 离心沉降速率影响因素 3

1.1.2 沉降系数 5

1.1.3 离心设备 5

1.1.4 离心分离方法 7

1.1.5 离心操作的注意事项 10

1.2 层析技术 12

1.2.1 层析的基本概念 12

1.2.2 层析的基本原理 12

1.2.3 层析技术的分类 13

1.2.4 柱层析简介 14

1.2.5 常用的层析方法 16

1.3 电泳技术 21

1.3.1 电泳的基本原理 21

1.3.2 影响电泳的主要因素 21

1.3.3 电泳的类型 22

1.3.4 醋酸纤维素薄膜电泳 23

1.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 23

1.3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 25

1.3.7 连续梯度电泳 25

1.3.8 等电点聚焦电泳 26

1.3.9 双向电泳 27

1.3.10 琼脂糖凝胶电泳 27

1.3.11 毛细管电泳 27

1.4 生物大分子的制备技术 29

1.4.1 生物大分子制备的样品前处理 29

1.4.2 生物大分子的分离纯化 32

1.4.3 生物大分子的保存 37

第二部分 基础性实验 41

2.1 基础训练 41

2.1.1 生物化学实验要求 41

2.1.2 生物样品的采取、处理与保存 42

2.1.3 高等植物材料丙酮粉的制备 45

2.1.4 缓冲液的配制和氨基酸两性性质测定 46

2.2 蛋白质和氨基酸实验 50

2.2.1 蛋白质的两性性质及等电点的测定 50

2.2.2 氨基酸的薄层层析 52

2.2.3 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量 53

2.2.4 紫外吸收法测定蛋白质含量 55

2.2.5 双缩脲法测定蛋白质含量 56

2.2.6 Folin-酚法测定蛋白质含量 58

2.2.7 蛋白质的沉淀与变性反应 60

2.2.8 蛋白质脱盐（透析和凝胶过滤） 62

2.2.9 用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N端氨基酸 65

2.2.10 等电点聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 66

2.3 酶学实验 71

2.3.1 酶的基本性质 71

2.3.2 过氧化氢酶活力的测定 74

2.3.3 脲酶Km值简易测定法 76

2.3.4 淀粉酶活力测定 79

2.3.5 转氨酶活性鉴定（纸层析法） 81

2.3.6 植物苯丙氨酸解氨酶（PAL）的提取及活性测定 84

2.3.7 同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 86

2.4 分子生物学基础实验 90

2.4.1 质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测 90

2.4.2 聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 93

2.4.3 大肠杆菌感受态的制备和转化实验 95

2.4.4 PCR产物的T-A克隆及重组子的蓝白斑筛选 98

2.4.5 植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 102

2.5 糖类、脂质和维生素实验 105

2.5.1 蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量 105

2.5.2 还原糖含量测定——砷钼酸比色法 107

2.5.3 糖的薄层层析 109

2.5.4 维生素A含量测定 111

2.5.5 维生素C含量测定——2，6-二氯酚靛酚法 114

2.5.6 粗脂肪含量的测定——索氏抽提法 116

第三部分 综合性实验 121

3.1 酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究 121

3.1.1 蔗糖酶的提取与部分纯化 122

3.1.2 离子交换层析纯化蔗糖酶 124

3.1.3 蔗糖酶各级分活力及蛋白质含量的测定 126

3.1.4 分离产物的SDS-PAGE电泳检测 130

3.1.5 反应时间对产物浓度的影响 131

3.1.6 pH对蔗糖酶活力的影响 133

3.1.7 温度对蔗糖酶活力的影响和反应活化能的测定 134

3.1.8 底物浓度对催化反应速率的影响及米氏常数Km和最大反应速率Vmax的测定 135

3.1.9 尿素（脲）抑制蔗糖酶的实验 137

3.2 溶菌酶的分离纯化与结晶 140

3.2.1 溶菌酶粗提液的制备 140

3.2.2 离子交换层析纯化溶菌酶 141

3.2.3 溶菌酶的透析与浓缩 143

3.2.4 凝胶过滤层析纯化溶菌酶 145

3.2.5 溶菌酶比活力测定 146

3.2.6 溶菌酶纯度的鉴定与结晶 147

3.3 猪血超氧化物歧化酶的分离纯化、活力测定及同工酶鉴定 152

3.3.1 猪血SOD的提取纯化 153

3.3.2 超氧化物歧化酶活力测定 154

3.3.3 SOD同工酶鉴定 156

3.4 种子蛋白质系统分析 159

3.4.1 种子蛋白质含量测定（凯氏定氮法） 159

3.4.2 种子蛋白质氨基酸组分分析（氨基酸自动分析仪法） 161

3.4.3 种子蛋白质组分分析（连续累进提取法） 162

3.4.4 种子蛋白质亚基分析（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法） 164

3.5 绿色荧光蛋白的重组表达与纯化 167

附录 173

附录一 实验室安全及防护知识 173

附录二 常用缓冲溶液的配制方法 174

附录三 硫酸铵饱和度的常用表 182

附录四 相对离心力与离心机转速测算表 184

附录五 常用酸碱试剂浓度信息 185

附录六 透析袋的前处理 185

附录七 常用蛋白酶抑制剂 186