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第一章 绪论 1

第一节 疾病的分子机理 1

一、疾病的基因诊断 3

二、疾病的基因治疗 4

三、疾病的基因预防 7

第二节 分子生物技术 8

一、基因获取 8

二、基因检测 9

三、基因工程 9

四、基因探测 9

五、基因转移 9

六、基因信息技术 10

第三节 分子生物技术在现代医学发展中的意义 10

一、分子生物学技术使临床思维方式不断更新 11

二、分子生物学技术促进实验医学和经验医学的融合 11

第二章 核酸技术 13

第一节 核酸的提取与分离 13

一、基因组DNA的提取与纯化 13

二、RNA的提取和cDNA合成 16

第二节 PCR技术 26

一、PCR扩增反应的基本原理 26

二、PCR扩增反应的实施 34

第三节 核酸的电泳技术 39

一、原理 39

二、实验操作 42

第三章 蛋白质技术 45

第一节 概述 45

一、蛋白质的研究历史 45

二、蛋白质的理化性质和生物学特性 45

第二节 蛋白质的提取和粗分离 46

一、材料的预处理 46

二、细胞的破碎 49

三、蛋白质的沉淀 53

四、蛋白质的浓缩 57

第三节 层析法分离纯化蛋白质 60

一、层析技术的原理及分类 60

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 67

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理简介 67

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳的分类 68

三、SDS-聚丙烯凝胶电泳的操作 73

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点 74

第五节 蛋白质分析 75

一、蛋白质浓度测定的方法 75

二、测定蛋白质纯度的方法 78

三、测定蛋白质的活性 79

第四章 分子杂交与印迹技术 80

第一节 核酸杂交的基本理论 80

一、DNA变性、复性与杂交 80

第二节 常用印记杂交方法 89

一、Southern印记杂交法 89

二、Northern印记杂交法 97

三、菌落原位杂交法 102

四、斑点杂交法 102

五、狭缝杂交法 103

六、核酸原位杂交法 103

七、Western印记杂交法 107

第五章 重组DNA技术 110

第一节 概述 110

一、重组DNA技术基本步骤 110

二、重组DNA技术研究的内容 111

第二节 重组DNA操作需要的工具酶 115

一、限制性核酸内切酶 116

二、DNA聚合酶 119

三、逆转录酶 122

四、DNA连接酶 123

五、其他DNA修饰酶 124

第三节 克隆载体 124

一、质粒载体 125

二、噬菌体载体 138

三、柯斯质粒 138

四、人工染色体 139

第四节 基因克隆的方法 139

一、获得目的基因的方法 139

二、选择和修饰克隆载体 154

三、重组体的构建——目的基因与载体连接 156

四、重组体向宿主细胞的导入 160

五、含重组体的细菌菌落的筛选与鉴定 164

六、重组体的表达 169

第五节 重组DNA技术与分子医学 171

一、疾病相关基因分析 171

二、制造生物活性蛋白 173

三、疾病的基因诊断与基因治疗 174

第六章 细胞培养技术 176

第一节 细胞培养的一般过程 176

一、准备工作 176

二、取材 177

三、培养 177

四、冻存及复苏 178

五、常用仪器设备 178

第二节 环境、培养器皿清洗消毒及使用 178

一、清洗 179

二、消毒和灭菌 181

三、无菌室 182

四、超净工作台 183

第三节 细胞培养液 183

一、细胞培养基的基本要求 183

二、天然细胞培养基 185

三、合成细胞培养基 185

第四节 细胞培养的基本方法 188

一、培养细胞的细胞生物学 188

二、体外培养细胞的分型 188

三、培养细胞的生长和增殖过程 189

四、原代培养 191

五、传代培养 192

六、细胞的冻存与复苏 193

第五节 细胞计数及活力测定 197

一、原理 197

二、仪器、用品与试剂 197

三、操作步骤 198

第六节 细胞运输的准备 199

第七节 抗生素在培养基中的应用 200

第八节 常见组织细胞的培养方法 200

一、上皮细胞培养 200

二、内皮细胞培养 201

三、神经细胞培养 202

四、肌组织细胞培养 204

五、巨噬细胞培养 205

六、肿瘤细胞的培养 206

第七章 基因组学技术 211

第一节 概述 211

第二节 基因组学研究技术 212

一、基因组作图 212

二、新基因的分离（RACE） 216

三、基因组测序技术 219

四、基因定位技术 222

五、功能基因组学 224

六、比较基因组学 231

七、基因芯片（gene chip）技术 233

第三节 基因组学技术发展趋势 237

第八章 蛋白质组学技术 240

第一节 概述 240

一、蛋白质组学 240

第二节 蛋白质组学相关技术原理 242

一、蛋白质样品制备技术 242

二、蛋白质样品分离技术 245

三、蛋白质样品鉴定技术 251

四、蛋白质组生物信息学 252

第九章 测序及人工合成技术 253

第一节 DNA序列测定 253

一、基因组测序 253

第二节 DNA的化学合成 267

一、固相亚磷酸酰胺三酯法 267

第三节 蛋白质和多肽的氨基酸序列测定 269

一、测定蛋白质的一级结构前的准备工作 269

二、氨基酸组成分析 270

三、蛋白质的末端测定 272

四、亚基拆离、肽链降解和肽段的分离 273

五、肽段的氨基酸顺序测定 274

第四节 蛋白质多肽的固相合成 275

一、多肽的固相合成 276