RNA干扰 原理与应用PDF电子书下载

1 RNA干扰的发展历史与意义 3

1.1 RNAi的发现 3

第1部分 RNA干扰理论 3

1.2 RNAi的意义 8

2 微小RNA概述 12

2.1 miRNA的发现过程 12

2.2 miRNA的生物学特征 14

2.3 miRNA的基因组学 17

2.4 miRNA的成熟及效应过程 22

2.5 miRNA的功能 25

2.6 展望 29

3.1 RdRP在基因沉默中作用的发现及相关证据 35

3 依赖于RNA的RNA聚合酶 35

3.2 RdRP的生化物理性质及其晶体结构 36

3.3 RdRP与RNA病毒 38

3.4 RdRP和RNA沉默 39

3.5 降级性PCR、过渡性RNAi及系统性RNAi 42

3.6 RdRP作用过程中的问题 45

4 微处理器 49

4.1 微处理器的相关蛋白成分及其对miRNA的加工 49

4.2 pre-miRNA从细胞核输出的过程 52

5 干扰性小RNA产生的关键性蛋白——Dicer 55

5.1 DCR的发现背景 55

5.2 DCR的一般生化属性及相关生物学功能 56

5.3 DCR的作用方式及在不同生物体中的作用 60

5.4 DCR作用的底物——dsRNA及pre-miRNA的特征及来源 68

5.5 DCR的加工产物——siRNA和miRNA 71

5.6 不同生物体中DCR的同源物及其基因 72

6 RNA诱导的沉默复合体 78

6.1 RISC的发现背景 79

6.2 参与RISC组装的小RNA分子及其可能的组装模式 81

6.3 RISC的主要成分——AGO蛋白 85

6.4 RISC在果蝇体内的组装模型 93

6.5 RNAi的剪切模型 95

6.6 RISC指导的靶向性剪切的动力学研究 97

6.7 参与RISC组装及效应过程的相关蛋白质及影响因子 99

6.8 RISC的功能 113

6.9 小结与展望 115

7 细胞核内的RNA干扰途径 124

7.1 RNA指导的DNA甲基化 124

7.2 RNAi和异染色质的形成 128

7.3 RNAi和DNA切除 135

7.4 减数分裂性沉默、配对和RNAi 137

7.5 细胞核内RNAi途径的作用方式 138

7.6 其他生物体中的相关机制 139

7.7 小结与展望 140

第2部分 RNA干扰技术原理与方法 149

8 siRNA或dsRNA的设计与筛选策略 149

8.1 重组质粒方法筛选siRNA 151

8.2 高通量筛选siRNA的微阵列方法 154

9 化学方法合成siRNA 157

9.1 2′-tBDMS方法 158

9.2 2′-TOM方法 159

9.3 2′-ACE方法 159

10 siRNA的体外转录及生物合成方法 161

10.1 PCR siRNA合成法 162

10.2 T7 RNA聚合酶转录法 165

10.3 应用重组人Dicer体外合成siRNA 168

11 基因工程方法制备siRNA 170

11.1 表达元件的构建 170

11.2 载体构建 180

12 siRNA的实验技术方法 191

12.1 siRNA的体外合成及转染方法 191

12.2 体外转录制备dsRNA 198

12.3 基因工程方法制备siRNA及转染细胞的方法 202

12.4 RNAi在其他生物体中的应用研究方法 213

13 miRNA的实验技术方法 234

13.1 miRNA的提取 234

13.2 miRNA克隆 238

13.3 miRNA分子杂交检测技术——Northern印迹 246

第3部分 RNA干扰的应用研究 259

14 RNA干扰在研究基因组功能方面的应用 259

14.1 动植物中的RNAi 259

14.2 RNAi在线虫全基因组功能研究中的应用 262

14.3 RNAi在果蝇研究方面的应用 286

14.4 RNAi技术在锥虫研究中的应用 294

14.5 PTGS在植物基因及基因组功能方面的研究 301

15 RNA干扰在研究胚胎发育方面的应用 319

15.1 RNAi在小鼠卵母细胞和胚胎中的应用 319

15.2 RNAi在鸟类胚胎发育中的研究 336

16 RNA干扰在抗病毒研究中的应用 358

16.1 RNAi抗HIV-1病毒感染 358

16.2 RNAi抗禽类逆转录病毒感染 373

16.3 RNAi抗肝炎病毒感染 377

16.4 RNAi抗流感病毒感染 392

16.5 RNAi抗SARS相关冠状病毒感染 397

16.6 RNAi抗轮状病毒感染 400

17 RNA干扰在肿瘤研究中的应用 410

17.1 目前常用的肿瘤相关基因功能的研究方法 410

17.2 RNAi在肿瘤生物学中的应用 413

17.3 RNAi在基因治疗中遇到的主要问题 435

18 RNA干扰在其他领域的治疗研究 444

18.1 RNAi在心血管疾病中的应用研究 444

18.2 RNAi在神经系统疾病中的应用研究 446

18.3 RNAi在内分泌系统疾病中的研究进展 454

18.4 RNAi在自身免疫性疾病中的应用研究 456

18.5 RNAi在生物学和医学中的应用前景 458

索引 465