脑血管病实验方法学PDF电子书下载

第一章 脑血管病概述 1

一、脑血管病的概念和流行病学 1

二、脑血管病分类 2

三、脑血液循环调节及病理生理 2

四、脑的血管 4

五、脑血管病的病因 6

六、脑血管病的危险因素与预防 7

第二章 急性脑缺血模型 15

第一节 局灶性脑缺血模型 16

一、大鼠局灶性脑缺血模型 16

二、小鼠局灶性脑缺血模型 33

三、家兔局灶性脑缺血模型 35

第二节 全脑缺血模型 42

一、大鼠全脑缺血模型 42

二、小鼠全脑缺血模型 46

三、家兔全脑缺血模型 52

第三节 TIA模型 54

一、TIA模型的分类 55

二、TIA模型的评价标准 57

三、常用TIA模型的制作 57

第四节 脑缺血模型神经功能损伤的评价方法 60

一、运动、平衡功能评价 60

二、感觉功能评分法 64

第五节 脑梗死体积的评价方法 73

一、TTC染色测定脑梗死体积 73

二、苏木精-伊红染色法测定脑梗死体积 74

三、焦油紫染色 77

四、磁共振成像 78

第三章 慢性脑缺血模型 83

第一节 慢性脑缺血模型的制作方法 84

一、大鼠慢性脑缺血实验动物模型 84

二、小鼠慢性脑缺血实验动物模型 97

三、其他动物 99

第二节 神经功能评价 100

一、总体状态 100

二、记忆功能评定 100

第三节 神经损伤的评价 107

一、监测脑血流 107

二、神经电生理改变 108

三、P300的测定 110

四、眩晕潜伏期测定 111

五、苏木精-伊红染色 111

第四章 脑出血模型 114

第一节 脑出血模型的制作方法 114

一、实验动物的选择及出血部位选择 114

二、大鼠脑出血模型的制作 115

三、兔脑出血模型 122

四、脑出血模型制作技巧 123

五、脑出血模型制作的有关问题 124

第二节 脑出血模型的行为学评价 127

一、Bederson评分 128

二、平衡木行走试验 128

三、肌力测验 128

四、前肢放置检测 129

第三节 血肿的评定及组织学观察 129

一、头颅磁共振扫描 129

二、CT灌注成像 130

三、组织学观察 130

第五章 蛛网膜下隙出血模型 132

第一节 SAH动物模型的制作方法 132

一、脑池注血法 132

二、颅内动脉穿刺法 138

三、动脉周围置血法 141

第二节 神经功能评价方法 142

一、平衡木实验 142

二、转棒实验 143

三、抓握牵引实验 143

四、走横木实验 144

五、Bederson评分法 145

六、Kaoutzanis 11分评分法 146

七、Garcia 18分评分法 147

八、Katz 100分评分法 147

九、Morris水迷宫实验 148

十、Endo4级评价法 149

第三节 神经损伤的评价方法 150

一、大体病理观察 150

二、病理学检查 150

三、脑含水量测定 151

四、脑血流量的测定 151

五、常规生理参数的监测 152

六、血-脑屏障通透生的测定 153

七、大脑动脉血管截面积测量 154

八、磁共振成像扫描 155

九、经颅多普勒 156

十、数字减影血管造影 157

十一、三维CT血管造影 158

第六章 小动物脑的整体实验方法 160

第一节 激光多普勒检测脑血流 160

一、激光多普勒检测局部脑血流 161

二、激光多普勒检测特定位点的脑血流 162

第二节 高速摄像检测细静脉管径及红细胞流速动态观察 162

大鼠和小鼠软脑膜细静脉管径和红细胞流速动态观察 163

第三节 活体观察软脑膜细静脉血栓形成的动态变化 165

一、光化学刺激诱导小鼠脑细静脉血栓形成 165

二、ADP表面滴加诱导小鼠脑细静脉血栓的形成 167

第四节 脑血管新生的观察 168

一、可视化颅窗法观察脑血管形态变化 169

二、同步辐射X射线检测小动物脑微血管 169

第五节 活体观察脑血管通透性的动态变化 174

一、伊文思蓝法检测血-脑屏障通透性 174

二、FITC荧光标记的白蛋白在大鼠软脑膜细静脉漏出动态的连续观察 176

第六节 活体观察在微脑血管白细胞滚动及黏附的动态变化 178

第七章 标本的留取方法 180

第一节 血液的采集 180

一、眼眶采血法 181

二、尾部采血法 182

三、心脏采血法 183

四、大动脉血管采血法 184

五、静脉采血法 186

六、采血时的注意事项 186

第二节 脑脊液采集方法 187

一、大小鼠脑脊液的采集 187

二、家兔脑脊液的采集 188

第三节 外周血免疫细胞的分离 189

一、外周血中中生粒细胞、淋巴细胞、单核 189

细胞的分离 189

二、外周血中血小板的分离 192

第四节 脑组织单细胞悬液的制备方法 193

一、脑组织单细胞悬液的制备方法 193

二、流式细胞术急性分离小鼠小胶质细胞 194

第五节 脑组织石蜡切片的制备 195

第六节 脑组织冰冻切片的制备 199

第七节 脑组织电镜标本的制备 203

第八节 脑组织蛋白的提取 209

一、脑组织取材 209

二、总蛋白提取 210

三、脑组织的膜蛋白、浆蛋白、核蛋白的提取 214

第九节 脑组织微血管的分离 215

第十节 脑组织线粒体的分离 216

一、二次蔗糖密度梯度离心纯化线粒体 217

二、试剂盒方法 219

第八章 脑血管病研究的在体实验方法 221

第一节 苏木精-伊红（HE）染色 221

一、石蜡切片的HE染色 222

二、冰冻切片的HE染色 223

第二节 尼氏染色观察神经元 223

一、焦油紫染色（石蜡切片） 224

二、甲苯胺蓝染色（石蜡切片） 225

三、改良后的甲苯胺蓝染色方法（石蜡切片） 225

四、硫堇染色（石蜡切片） 226

第三节 镀银法染色观察神经元纤维 227

一、Golgi-COX染色（可用石蜡或冰冻切片） 228

二、Cajal法神经原纤维镀银染色（可用石蜡或冰冻切片） 230

第四节 神经胶质细胞特异染色 231

一、Holzer神经胶质纤维染色方法（石蜡切片） 232

二、Penfield胶质细胞染色（冰冻切片） 233

三、改良的Holzer神经胶质纤维染色方法 234

第五节 神经髓鞘的特异染色 235

一、Luxol Fast Blue染色（冰冻切片） 235

二、多内给（Donaggio）法 236

三、玛气（Marchi）法 237

第六节 脑组织的TUNEL染色 237

一、石蜡切片的TUNEL荧光染色 238

二、冰冻切片的TUNEL荧光染色 239

第七节 脑组织的细胞增殖BrdU染色 240

第八节 脑组织的过氧化物DHE染色 242

一、利用荧光探针直接测定脑组织冰冻切片活生氧的形成 243

二、利用荧光探针直接测定线粒体活性氧的形成 244

第九节 脑内的淀粉样物质的染色 245

一、甲基紫法（石蜡切片） 245

二、刚果红甲醇法（石蜡切片） 246

三、改良刚果红甲醇法（石蜡切片） 247

第十节 免疫组织化学及免疫荧光化学 248

一、免疫组化（石蜡切片） 248

二、免疫组化（冰冻切片） 250

三、免疫荧光（石蜡切片） 252

四、免疫荧光（冰冻切片） 253

第十一节 酶联免疫吸附剂测定ELISA 253

第十二节 免疫印迹 255

第十三节 免疫共沉淀 259

第十四节 DNA的提取及PCR鉴定转基因小鼠基因表型 263

第十五节 RNA的提取及Rea1-time PCR 265

第十六节 DNA与蛋白质相互作用分析 270

第十七节 脑组织切片的原位杂交 273

第九章 脑血管病研究的离体实验方法 277

第一节 细胞培养室的基本条件及设备 277

一、细胞培养室布局规划 277

二、细胞培养基本设备 279

第二节 无菌操作 281

一、细胞培养室及相关设备的常规灭菌消毒 281

二、常用器皿清洗 281

三、各类实验用品的无菌处理 283

四、基本无菌操作技术及要求 285

五、常见污染种类及解决办法 286

第三节 常用液体配置 287

一、培养用液 288

二、培养基 291

三、抗生素 292

四、抗有丝分裂剂 292

第四节 细胞培养基本技术 293

一、原代培养 293

二、神经组织常见细胞系 293

三、细胞传代 296

四、细胞生长状态的观察 297

五、细胞冻存、复苏与运输 297

第五节 正常神经组织常见类型细胞的原代培养 299

一、神经元 299

二、脑微血管内皮细胞 302

三、小胶质细胞 305

四、星形胶质细胞 308

五、少突胶质细胞 310

六、神经干细胞 312

七、脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养建立体外血-脑屏障 314

第六节 脑血管病常见离体细胞模型制作 316

一、氧糖剥夺模型 316

二、凝血酶模拟急性脑出血模型 318

三、过氧化氢氧化应激损伤模型 320

四、兴奋性氨基酸损伤模型 320

五、炎症损伤模型 321

第七节 常用细胞分析检测 322

一、细胞活性实验 322

二、细胞凋亡实验 326

三、细胞迁移实验 331

四、细胞增殖实验 332

五、细胞周期实验 333

六、细胞形态学实验 335

第八节 脑血管病常用的电生理技术 338

一、膜片钳记录标本的制备 338

二、膜片钳电生理记录 345

第十章 非人灵长类动物脑血管病模型 352

第一节 动物模型的制作 352

一、基本准备和麻醉 352

二、MCAO（middle cerebral artery occlusion）模型制作和术后护理 360

三、自体抗凝血制备脑出血模型 362

四、蛛网膜下隙出血模型 362

五、磁共振扫描 363

六、组织学检测 364

第二节 非人灵长类动物模型的研究现状和评价 364

一、伦理问题 365

二、非人灵长类动物脑卒中模型的设计 365

第十一章 脑血管病转化医学研究的现状 371