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第一篇 医学细胞生物学 1

第一章 原代细胞培养 1

第一节 基本知识 1

一、原代培养的一般过程 1

二、体外培养细胞的生长方式 2

三、培养细胞生命期（Life Span of Culture Cells） 3

四、每代细胞的生长过程 4

第二节 培养用液 5

一、细胞培养基和血清的选择 5

二、培养基的介绍 6

三、血清——天然细胞培养基 7

四、培养基的配置 8

五、其他常用液体的配置 9

第三节 原代细胞基本培养技术和要领 11

一、组织块贴壁法 12

二、消化培养法 13

第四节 细胞培养的污染及检测 14

一、细胞污染的种类和判定 14

二、微生物污染的排除 16

第二章 传代细胞的培养 18

第一节 基本知识 18

一、基本概念 18

二、建立细胞系（或株）的要求 19

三、已建立细胞系或株的鉴定、管理和使用 20

四、国内外的主要细胞库 21

第二节 细胞培养液 21

第三节 传代细胞的培养 25

一、传代细胞的复苏 25

二、细胞传代 26

三、细胞的冻存 26

第四节 传代细胞污染鉴定 27

第三章 淋巴细胞分离培养 28

第一节 基本知识 28

一、淋巴细胞分离液与淋巴细胞的分离 28

二、流式分选技术 29

三、磁珠分离技术 30

第二节 淋巴细胞分离液分离淋巴细胞 30

一、原理 31

二、材料和仪器 31

三、实验方法 31

四、结果分析 35

第三节 流式细胞分选技术 36

一、原理 36

二、材料和仪器 37

三、实验方法 37

四、结果分析 38

第四节 免疫磁珠法分离淋巴细胞 38

一、原理 38

二、材料和仪器 41

三、实验方法 41

四、结果分析 41

第四章 细胞学实验 43

一、细胞接种孔板的相关参数 43

二、细胞培养板培养细胞操作中的注意事项 44

第二节 细胞的增殖与抑制情况检测 45

一、实验原理 45

二、操作步骤 45

三、细胞增殖和抑制实验中的试剂配制 46

四、细胞增殖和抑制实验中对细胞的要求及细胞悬液的制备 47

第三节 细胞计数方法 48

一、传统细胞计数板进行计数的方法 48

二、新兴的细胞计数仪对细胞进行计数的方法 49

第四节 免疫组织化学技术 54

一、免疫组织化学技术基本介绍 54

二、免疫组织化学技术的具体操作步骤举例 56

三、关于抗原修复相关问题 57

四、细胞爬片和细胞涂片的制作及免疫细胞化学固定液的选择 58

第五节 肿瘤细胞迁移、侵袭实验 59

一、Transwell迁移及侵袭实验 59

二、实验中所用结晶紫染料的配方 63

第六节 肿瘤细胞黏附实验 64

第五章 细胞凋亡的检测方法 66

第一节 概述 66

一、细胞凋亡的生物学功能 67

二、细胞凋亡的生物学意义 69

三、细胞凋亡与坏死的区别 69

四、细胞凋亡的形态学特征 69

五、细胞凋亡的分子机制 70

第二节 TUNEL法检测凋亡 71

一、原理 71

二、材料和仪器 72

三、实验方法 73

四、结果分析 74

第三节 Annexin V-FITC凋亡检测 74

一、原理 75

二、材料与仪器 75

三、实验方法 76

四、结果分析 76

第四节 细胞周期与细胞凋亡 77

一、原理 77

二、材料与仪器 78

三、实验方法 78

四、结果分析 79

第二篇 医学分子生物学 80

第一章 基因工程 80

第一节 基本知识 80

一、基因工程的研究内容 80

二、基因工程常用载体 81

三、基因工程技术在医学中的应用 86

第二节 原核表达载体系统 88

一、原核细胞表达载体及特点 88

二、大肠埃希菌表达系统 90

第三节 真核表达载体系统 96

一、真核细胞表达载体及特点 96

二、真核细胞基因导入方法 97

三、酵母表达系统 98

四、哺乳动物细胞表达系统 100

第四节 基因克隆 102

一、目的基因DNA片段的分离 103

二、目的基因DNA片段与载体的连接 104

三、重组基因导入受体细胞 106

四、重组DNA克隆的筛选与鉴定 108

五、质粒DNA的扩增和抽提 110

六、目的基因的表达 112

第二章 基因转染 117

第一节 基本知识 117

一、磷酸钙共沉淀法 117

二、电穿孔转染法 121

三、脂质体介导DNA转染法 125

四、逆转录病毒载体介导的DNA转染法 128

第二节 瞬时转染和稳定转染 132

一、瞬时转染 133

二、稳定转染 135

三、基因转染的主要应用 140

第三章 基因转录水平的检测 141

第一节 PCR和northern法技术概论 141

第二节 逆转录PCR检测基因表达基本原理和分类 141

一、PCR技术基本原理 141

二、RT-PCR引物设计原则方法 142

三、PCR反应条件的优化 144

四、逆转录PCR 147

二、实验器具的处理与准备 148

三、试剂配制 148

四、步骤 148

五、PCR产物电泳结果分析 155

第三节 实时荧光定量PCR方法简介 157

一、实时荧光定量PCR的基本原理 157

二、引物与探针的设计 159

三、实时荧光定量PCR的步骤 160

四、实时荧光定量PCR技术的应用 160

第四节 Northern Blot法 162

一、试剂准备 163

二、操作步骤 163

第四章 蛋白表达的检测 166

第一节 Western blot检测蛋白表达 166

一、基本原理 166

二、仪器和材料、试剂的准备 167

三、实验步骤 169

四、背景信息 175

五、Western Blot常见问题分析 176

六、Western Blot的应用 178

七、Western Blot实验中的小tip 178

第五章 蛋白与DNA的相互作用 181

第一节 概述 181

第二节 凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA） 181

一、EMSA原理示意图 182

二、EMSA实验过程示意图 182

三、EMSA所用试剂的配制 182

四、EMSA实验步骤 184

五、结果分析 188

第三节 染色体免疫共沉淀（ChIP） 189

一、ChIP原理示意图 189

二、ChIP所需试剂的配制 190

三、ChIP实验步骤 190

四、结果分析 193

五、注意事项 193

第四节 DNase Ⅰ足迹法（DNase Ⅰ foot printing） 194

第五节 其他相关的实验技术和方法 195

一、酵母单杂交技术（yeast one hybrid system） 195

二、SELEX与核酸适体技术 196

三、扫描探针显微镜技术 197

四、生物质谱技术和表面等离子共振技术 198

第六章 蛋白质与蛋白质相互作用检测 199

第一节 概述 199

第二节 酵母双杂交系统 199

一、酵母双杂交系统原理 199

二、酵母双杂交系统的实验步骤 200

三、酵母双杂交系统的特点 200

四、酵母双杂交系统的应用 201

第三节 Pull-down检测 201

一、Pull-down检测原理示意 202

二、Pull-down检测所用标签蛋白及与相对应的亲和配体 202

三、Pull-down检测实验步骤 202

第四节 免疫共沉淀技术 205

一、Co-IP原理示意图 206

二、Co-IP所需试剂的配制 206

三、Co-IP实验步骤 207

四、Co-IP实验注意事项 207

五、Co-IP的优点与不足 208

第五节 其他相关的实验技术和方法 209

一、噬菌体展示技术 209

二、等离子共振技术 209

三、荧光能量转移技术 209

四、抗体与蛋白质阵列技术 209

第七章 生物医学文献检索 211

第一节 概述 211

一、信息、知识、情报、文献和信息素养 211

二、文献检索的基本知识 212

三、计算机检索基本知识 218

第二节 中文生物医学文献检索数据库 220

一、中文文摘型数据库 220

二、中文全文型数据库 229

第三节 外文生物医学文献检索数据库 236

一、外文文摘型数据库 236

二、外文全文型数据库 244

第四节 引文数据库 254

一、Web of Science数据库 254

二、《中文科技期刊数据库》（引文版） 257

第五节 NCBI数据库 260

一、概况 260

二、数据库资源 261

三、检索方法 262