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学习情境1动物细胞培养的准备工作 1

任务一 动物细胞培养常用设备和器材的使用与保养 1

认知与解读 1

一、动物细胞培养实验室的设置 1

二、动物细胞培养常用设备 2

三、动物细胞培养常用器材 4

操作与体验 6

技能一 动物细胞培养常用设备的使用与维护 6

技能二 动物细胞培养常用器材的使用与维护 16

检查与评价 20

一、检查 20

二、评价 21

分析与思考 24

拓展与链接 24

一、动物细胞培养的发展简史 24

二、动物细胞培养的概念 26

任务二 动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌 27

认知与解读 27

一、培养用品的清洗 27

二、培养用品的包装 30

三、培养用品的消毒灭菌 31

操作与体验 32

技能一 清洗液的配制 32

技能二 动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌 33

检查与评价 38

一、检查 38

二、评价 39

分析与思考 41

拓展与链接 42

一、细胞培养的优缺点 42

二、细胞培养的基本要求 43

任务三 动物细胞培养液及培养用液的配制 44

认知与解读 44

一、平衡盐溶液 44

二、天然培养基 44

三、合成培养基 45

四、细胞消化液 47

五、pH调整液 47

六、抗生素溶液 48

七、无血清培养基 48

操作与体验 48

技能一 常用BSS液的配制 48

技能二 常用细胞消化液的配制 50

技能三 常用pH调整液的配制 51

技能四 常用抗生素溶液的配制 52

技能五 常用天然培养基的制备 53

技能六 常用合成培养基的配制 56

检查与 评价 58

一、检查 58

二、评价 59

分析与思考 61

拓展与链接 61

一、动物细胞体外培养的营养条件 61

二、动物细胞体外培养的环境条件 63

学习情境2动物细胞培养 65

任务一 动物细胞的取材与分离 65

认知与解读 65

一、原代细胞的取材 65

二、原代细胞的分离 66

操作与体验 68

技能一 机械分散法分离原代细胞 68

技能二 消化法分离原代细胞 69

技能三 细胞计数及活力测定 70

检查与评价 72

一、检查 72

二、评价 72

分析与思考 74

拓展与链接 75

一、培养操作基本要领和要求 75

二、其他组织的取材 77

任务二 动物细胞的原代培养 78

认知与解读 78

一、组织培养法 78

二、消化培养法 79

操作与体验 80

技能一 鸡胚成纤维细胞原代培养——组织培养法 80

技能二 鸡胚成纤维细胞原代培养——消化培养法 82

检查与评价 84

一、检查 84

二、评价 84

分析与思考 86

拓展与链接 87

一、小鼠胎儿细胞的原代培养 87

二、其他细胞的培养 89

任务三 动物细胞的传代培养 94

认知与解读 94

一、原代培养的首次传代 94

二、细胞传代方法 95

三、培养细胞的纯化 96

四、培养细胞的克隆化 96

操作与体验 97

技能一 鸡胚成纤维细胞的传代培养 97

技能二 培养细胞的纯化 99

技能三 培养细胞的克隆化 100

检查与评价 103

一、检查 103

二、评价 104

分析与思考 105

拓展与链接 106

一、传代细胞的建系和维持 106

二、培养细胞的其他纯化方法 107

任务四动物细胞的常规检查 108

认知与解读 108

一、培养细胞常规检查内容和方法 108

二、培养细胞的污染 109

操作与体验 111

技能一 细胞生长曲线的测定 111

技能二 检查培养细胞的常用手段 112

技能三 培养细胞的常规检查 115

技能四细胞活性检查 118

检查与评价 119

一、检查 119

二、评价 120

分析与思考 122

拓展与链接 123

一、培养细胞的生长类型和形态特征 123

二、培养细胞的生长特点 125

三、培养细胞的生长和增殖过程 127

学习情境3动物细胞的冷冻和复苏 130

任务一 动物细胞的冻存 130

认知与解读 130

一、细胞的冻存和复苏 130

二、细胞的运输 133

操作与体验 133

技能一 培养细胞的冻存 133

技能二 特殊培养细胞的冻存 135

检查与评价 136

一、检查 136

二、评价 136

分析与思考 139

拓展与链接 140

一、培养细胞冷冻保存概述 140

二、冷冻保存方法 141

任务二 动物冻存细胞的复苏 142

认知与解读 142

一、细胞复苏基本知识 142

二、细胞的常规复苏法 142

三、杂交瘤的复苏 142

操作与体验 142

技能一 冻存细胞的常规复苏技术 142

技能二 杂交瘤细胞的复苏技术 144

检查与评价 146

一、检查 146

二、评价 146

分析与思考 149

拓展与链接 150

一、细胞冻存的发展历史 150

二、细胞冻存的应用 150

三、细胞的运输 151

学习情境4病毒的细胞培养与鉴定 153

任务一 病毒的细胞培养 153

认知与解读 153

一、细胞培养用于病毒研究的优点 153

二、用细胞培养技术分离病毒 154

三、用细胞培养病毒基本条件 155

四、用细胞培养病毒时的注意事项 156

操作与体验 156

技能一 MDCK细胞分离流感病毒 156

技能二 人胚肾细胞分离脊髓灰质炎病毒 158

技能三 侵染病毒（病变）细胞的观察与判断 159

检查与评价 161

一、检查 161

二、评价 162

分析与思考 163

拓展与链接 164

一、病毒细胞培养的发展简史 164

二、病毒概述 164

任务二 病毒的鉴定技术 169

认知与解读 169

一、病毒蚀斑技术 169

二、病毒蚀斑抑制试验 171

三、细胞培养系统中的中和试验 171

四、用细胞培养法制备病毒血清学抗原应注意的问题 172

操作与体验 172

技能一 病毒的蚀斑鉴定技术 172

技能二 病毒蚀斑抑制试验 175

技能三 病毒的中和试验鉴定技术 176

检查与评价 178

一、检查 178

二、评价 178

分析与思考 180

拓展与链接 181

一、病毒毒价的测定 181

二、病毒毒价的测定（微量法） 182

学习情境5 单克隆抗体制备 184

任务一 动物免疫 184

认知与解读 184

一、抗原制备 184

二、免疫动物的选择 184

三、免疫程序的确定 184

四、抗体检测 185

操作与体验 185

技能一 小鼠捕捉、注射与采血技术 185

技能二 动物免疫技术 188

技能三 免疫小鼠血清效价测定技术 190

检查与评价 193

一、检查 193

二、评价 193

分析与思考 196

拓展与链接 197

一、单克隆抗体的概念 197

二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理 198

三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要过程 198

四、各种免疫方法的比较 198

任务二 细胞融合及杂交瘤细胞的筛选 199

认知与解读 199

一、骨髓瘤细胞 199

二、饲养细胞 200

三、脾细胞 200

四、细胞融合 201

五、杂交瘤细胞的培养、观察与筛选 201

操作与体验 203

技能一 细胞融合主要试剂的配制 203

技能二 骨髓瘤细胞悬液的制备 205

技能三 饲养细胞的制备 205

技能四 免疫脾细胞悬液的制备 207

技能五 细胞融合 208

技能六 融合后混合细胞的培养及杂交瘤细胞的筛选与观察 210

检查与评价 212

一、检查 212

二、评价 212

分析与思考 214

拓展与链接 215

一、细胞融合 215

二、融合细胞的早期观察及其异常结果分析 219

任务三 单克隆抗体的筛选与检测 220

认知与解读 220

一、概述 220

二、酶联免疫技术（ELISA） 221

操作与体验 224

技能一 可溶性抗原的ELISA间接法筛选杂交瘤阳性克隆 224

检查与评价 226

一、检查 226

二、评价 226

分析与思考 229

拓展与链接 229

其他常用的抗体检测方法 229

任务四杂交瘤细胞克隆化 233

认知与解读 233

一、杂交瘤克隆化概述 233

二、杂交瘤克隆化的方法 234

操作与体验 235

技能一 有限稀释法克隆化杂交瘤细胞 235

技能二 软琼脂法克隆化杂交瘤细胞 236

检查与评价 237

一、检查 237

二、评价 238

分析与思考 239

拓展与链接 240

杂交瘤细胞的冻存与复苏（详参情境三） 240

任务五单克隆抗体的大量制备与鉴定 241

认知与解读 241

一、单克隆抗体的大规模制备 241

二、单克隆抗体的纯化 243

三、单抗特性的鉴定 244

操作与体验 245

技能一 动物体内大量生产单克隆抗体 245

技能二 单克隆抗体的初步纯化 246

技能三 单克隆抗体的鉴定 248

检查与评价 250

一、检查 250

二、评价 251

分析与思考 253

拓展与链接 254

一、单抗的标记 254

二、单克隆抗体生产的影响因素、失败原因分析 257

附录 259

附录一 259

附录二 260

附录三 261

附录四 262

参考文献 263