流式细胞术的基础和临床应用PDF电子书下载

第一章 总论 1

第一节 流式细胞术与流式细胞仪概述 1

一、流式细胞术概述 1

二、流式细胞仪 2

（一）基本结构 2

（二）工作原理 3

（三）分析型流式细胞仪介绍 6

（四）分选型流式细胞仪介绍 9

第二节 荧光染料的选择与常用的染色技术 12

一、荧光染料的特性及其应用 12

二、常用的染色技术 16

（一）细胞免疫荧光染色技术 16

（二）核酸荧光染色技术 16

（三）荧光微球捕获染色技术 17

第三节 结果分析与流式图 18

一、流式通道 18

二、流式直方图 18

三、流式散点图 19

四、流式等高线图 20

第四节 流式细胞术的基本操作与技巧 20

一、标本的采集、运送与储存 20

二、标本的处理 21

（一）独立细胞样品制备 22

（二）免疫器官样品制备 23

（三）实体脏器样品制备 24

三、荧光素偶联抗体及其标记方法 24

（一）荧光素与荧光素偶联抗体 24

（二）样品封闭 26

（三）荧光素偶联抗体标记 27

四、光电倍增管电压设定 28

五、对照的设置 28

（一）阴性对照的设置 28

（二）FMO对照 29

（三）阳性对照的设置 29

六、补偿调节 30

（一）补偿调节的原理 30

（二）调节补偿的具体方法 30

（三）三色和四色分析补偿调节方法 31

（四）影响补偿大小的因素 32

七、阈值设定 33

（一）减少样品中死细胞比例的方法 34

（二）流式分析时区分死细胞和活细胞的方法 34

八、流式分选模式选择 35

（一）纯度模式 35

（二）得率模式（富集模式） 36

（三）单细胞模式 36

九、上样速度控制 36

（一）流式分析速度控制 36

（二）流式分选速度控制 36

十、分选设门基本原则 36

十一、流式分选基本步骤 37

第五节 方法学特点 38

一、单细胞分析 38

二、定量分析 38

三、快速性 39

四、准确性 39

五、特异性 39

六、可重复性 39

七、多参数分析 39

第六节 常见影响因素 40

一、温度 40

二、pH 40

三、荧光染料浓度 40

四、杂质 41

五、细胞固定剂 41

六、溶液黏度 41

七、其他因素 41

第七节 质量控制 41

一、室内质量控制 42

（一）分析前对样本和试剂的质量控制 42

（二）分析中仪器及检测过程的质量控制 43

（三）分析后数据传输的质量控制 47

二、室间质量评价 47

（一）国家卫计委流式检验室间质评 48

（二）国际流式检验室间质评 48

第八节 新进展 48

一、不设门流式方法的应用 48

二、介绍几个较有用的组合 49

第二章 流式分析术及流式分选术的应用 51

第一节 流式分析术的应用 51

一、细胞群比例测定 51

二、机体免疫功能监测及细胞表型鉴定 55

（一）T淋巴细胞及其亚群的检测 57

（二）B淋巴细胞及其亚群的检测 85

（三）NK细胞的检测及功能分析 87

（四）树突状细胞的检测及功能分析 90

（五）单核细胞的检测及亚群分析 100

（六）中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞检测 103

三、检测细胞因子 106

（一）胞内染色法检测细胞因子 107

（二）胞内染色法与ELISA法比较 111

（三）CBA法测定细胞因子 113

（四）CBA法与ELISA法比较 116

四、检测细胞增殖 116

（一）相对计数法 117

（二）CFSE标记法 118

（三）BrdU标记法 126

（四）抗Ki67抗体标记法 129

五、检测细胞凋亡 133

（一）Annexin V/PI双染色法 133

（二）SYTO/PI双染色法 135

（三）细胞DNA含量分析法 139

（四）线粒体损伤检测法 140

（五）活化的Caspase-3检测法 141

（六）荧光素偶联的Caspase抑制剂标记法 141

（七）甲酰胺诱导ssDNA单抗检测法 143

（八）TUNEL法 143

六、检测细胞周期 145

（一）非特异性核酸荧光染料标记法 145

（二）特异性细胞周期调节蛋白检测法 146

七、检测细胞杀伤能力 147

（一）荧光测定法与流式细胞术 149

（二）报告基因转染法 162

八、检测细胞吞噬功能 162

九、检测胞内活化的激酶 164

十、检测基因表达 166

（一）染色体分选 166

（二）数量DNA纤维作图 167

（三）端粒长度检测 169

（四）GFP报告基因系统 170

（五）lacZ报告基因系统 172

（六）B－内酰胺酶报告基因系统 173

十一、检测钙相关分子 173

（一）检测细胞内游离的钙离子水平 173

（二）检测钙蛋白酶活性 174

（三）检测细胞膜钙泵活性 175

十二、表观遗传学中的应用 177

（一）CHIP-ON-BEADS 180

（二）检测细胞水平组蛋白修饰情况 181

十三、检测缝隙连接介导的细胞通讯 182

十四、检测细胞内pH和钠氢转运体活性 183

（一）检测细胞内pH 183

（二）检测钠氢转运体活性 183

十五、细胞间及细胞与环境间相互作用 184

（一）细胞迁移分析 184

（二）细胞接触及黏附分析 187

十六、其他应用 188

（一）检测活性氧簇 188

（二）检测细胞内游离的锌离子水平 188

（三）荧光共振能量转移结合流式细胞术检测两种蛋白质的直接结合 189

（四）检测端粒长度 191

（五）检测脂筏结合蛋白 192

第二节 流式分选术的应用 194

一、流式分选与磁性分选 194

二、流式分选独立群体细胞 198

三、流式分选非独立细胞群体 198

四、流式分选低比例细胞群体 199

（一）强势细胞群的辐射影响 199

（二）流式分选结合磁性分选 199

（三）二次分选法 200

五、流式分选干细胞 201

（一）流式分选造血干细胞 201

（二）流式分选间充质干细胞 203

（三）流式分选肿瘤干细胞 205

第三章 流式细胞术的临床应用 209

第一节 感染性疾病 209

一、微生物检验 209

（一）荧光素偶联抗体检测法 209

（二）抗体结合人工荧光微球检测法 213

（三）微生物活性流式检测 215

（四）人工微球荧光免疫试验检测抗体 217

（五）荧光原位杂交流式检测法 217

（六）PCR免疫微球法 218

（七）原位PCR杂交流式检测法 219

二、AIDS患者的免疫功能检测 219

（一）AIDS发病与免疫系统 220

（二）AIDS患者的免疫功能检测 223

第二节 血液系统疾病 226

一、机体造血功能监测 226

（一）造血干细胞和造血祖细胞的分类检测 227

（二）网织红细胞测定 229

（三）网织血小板测定 231

二、机体凝血功能监测 232

（一）血小板的形态、结构与功能 232

（二）血小板流式检验现状 234

（三）血小板精确计数 235

（四）活化血小板测定 237

（五）血小板膜糖蛋白检测 239

（六）血小板微粒测定 241

三、白血病免疫诊断与分型 242

（一）正常骨髓造血细胞分化成熟的抗原表达规律 242

（二）白血病免疫诊断与分型的基本原理与意义 243

（三）临床常见白血病类型的免疫诊断与分型要点 248

（四）临床少见白血病类型的免疫诊断与分型要点 270

第三节 自身免疫性疾病的鉴别诊断 275

一、自身抗体的检测 275

（一）红细胞表面相关免疫球蛋白的测定 276

（二）粒细胞表面相关免疫球蛋白的测定 280

（三）血小板表面相关免疫球蛋白的测定 285

二、强直性脊柱炎的鉴别诊断 291

（一）HLA-B27/HLA-B7表达的测定 291

（二）HLA-B27/CD3表达的测定 292

三、阵发性睡眠性血红蛋白尿与PNH克隆检测 295

（一）红细胞表面CD55和CD59分子表达检测 297

（二）白细胞表面CD55和CD59分子表达检测 298

（三）白细胞的FLAER法测定 299

第四节 肿瘤临床中的应用 302

一、细胞周期与DNA倍体检测 302

（一）细胞周期检测 302

（二）DNA倍体检测 304

二、细胞凋亡检测 305

（一）PI染色法 305

（二）Annexin V/PI染色法 306

（三）末端转移酶标记（TUNEL）法 306

三、肿瘤化疗多药耐药性监测 307

第五节 移植中的应用 309

一、干细胞移植 310

（一）外周血干细胞移植 311

（二）脐血干细胞移植 311

（三）流式细胞技术在造血干细胞移植中的应用 312

二、骨髓移植 320

三、器官移植 321

（一）流式细胞术交叉配型 322

（二）同种异体抗体检测 323

（三）移植术后免疫监测 325

第六节 超敏反应中的应用 326

一、IgE的检测 326

（一）速发型超敏反应 326

（二）速发型超敏反应的机制 327

（三）速发型超敏反应的检测 327

（四）嗜碱性粒细胞流式细胞术检测 328

（五）流式细胞术体外检测和识别药物过敏反应 328

二、促炎因子的检测 328

附录 330

附录一 临床常见流式检验指标的正常参考范围 330

附录二 临床流式细胞学检验技术相关名词 334

附录三 常用流式检验试剂的配制 335

附录四 流式细胞仪工作术语 337