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第一部分 蛋白质鉴定 1

实验一SDS-PAGE测定蛋白质分子质量 1

实验辅助说明1：SDS-样品缓冲液及蛋白质样品处理 6

实验二SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳 8

实验辅助说明2：蛋白质分子质量标准 10

实验三 利用非变性凝胶电泳分析蛋白质寡聚体 12

实验辅助说明3：电泳干胶制备 15

实验四 血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶双向电泳分析（非预制胶） 17

实验辅助说明4：预制胶条 21

实验五 利用凝胶阻滞实验（EMSA）分析转录因子 22

实验辅助说明5：生物素化与亲和素 26

实验六 凝胶过滤层析法鉴定蛋白质分子质量 28

实验辅助说明6：层析凝胶使用后的长期保存 32

实验七MALDI-TOF-MS质谱法鉴定蛋白质 33

实验辅助说明7：质谱分析用蛋白质样品制备注意事项 36

实验八 叶绿素蛋白复合物的提取与光谱学测定 38

实验辅助说明8：激发光谱与发射光谱 41

实验九 微丝结合蛋白的结合常数测定 43

实验十 肌动蛋白聚合动力学分析（光散射法） 47

实验十一 蛋白质浓度（或含量）的测定 50

第二部分 蛋白质表达与分离纯化 56

实验十二His-tag融合蛋白的原核表达及纯化 56

实验辅助说明9：抗原决定簇在重组蛋白中的应用 60

实验辅助说明10：Ni2+亲和填料的再生与保存 60

实验十三His-tag融合蛋白可溶性表达的快速微量检测 62

实验辅助说明11：包涵体蛋白的复性 64

实验辅助说明12：常见蛋白酶抑制剂的使用与保存 65

实验十四 绿色荧光蛋白的重组表达与纯化 68

实验辅助说明13：GFP的金属离子螯合层析纯化 75

实验十五 蛋白质重组表达的可视化定量方法 77

实验辅助说明14：菌体的不同裂解方法 79

实验十六GST融合蛋白的表达与亲和纯化 81

实验辅助说明15：用蛋白酶切除蛋白标签 85

实验十七 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达外源蛋白 87

实验辅助说明16：昆虫细胞培养 93

实验十八PEG介导拟南芥叶肉原生质体中外源蛋白的瞬时表达 95

实验辅助说明17：常用荧光蛋白分子波长特性 98

实验十九 亲和层析法分离青豌豆凝集素 99

实验辅助说明18：透析袋的处理 103

实验辅助说明19：微升量级蛋白质样品的透析 103

实验二十 蛋白质离子交换层析 105

实验辅助说明20：离子交换剂的种类与再生 108

实验二十一DNA亲和柱的制备和DNA结合蛋白的纯化 110

实验辅助说明21：蛋白质电泳胶的银染色法 115

实验二十二 利用蔗糖密度梯度超速离心分离蛋白质 117

实验辅助说明22：连续性蔗糖密度梯度制备 119

实验二十三 猪脑微管蛋白的制备 121

实验二十四 兔骨骼肌肌动蛋白的制备 125

实验二十五 蛋白质结晶——悬滴法 128

实验辅助说明23：载片的硅烷化 131

实验辅助说明24：座滴法和三明治滴法培养蛋白质晶体 131

实验二十六 蛋清溶菌酶的纯化以及结晶 133

实验辅助说明25：蛋清中主要蛋白的特性 137

第三部分 酶活性分析 138

实验二十七 果实菠萝蛋白酶的凝胶过滤纯化与活性分析 138

实验二十八 果实菠萝蛋白酶动力学常数的测定 143

实验二十九 激酶与底物的体外磷酸化测定 146

实验辅助说明26：放射性同位素在生物学研究中的应用及辐射防护 149

实验三十 用非变性凝胶电泳法鉴定具有ATP酶活性的蛋白质 151

实验三十一 转基因拟南芥GUS蛋白的定性与定量分析 154

第四部分 蛋白质免疫化学与蛋白质互作 157

实验三十二 抗血清制备 157

实验三十三 血清抗体IgG的分离纯化 164

实验辅助说明27：利用试剂盒亲和纯化抗体 169

实验三十四 利用免疫印迹法鉴定未知蛋白 171

实验辅助说明28：杂交膜的选择 176

实验辅助说明29：蛋白质电转移 177

实验辅助说明30：免疫检测中的非特异位点封闭 177

实验辅助说明31：显色后NC膜上蛋白质条带的再利用 177

实验三十五 免疫共沉淀法研究蛋白质相互作用 179

实验辅助说明32：免疫共沉淀的关键因素 182

实验三十六 蛋白质相互作用的体外验证——Pull-down和Far-western 183

实验辅助说明33：增强型化学发光（ECL） 186

实验三十七 酵母双杂交验证蛋白质相互作用 188

实验三十八 双分子荧光互补技术（BiFC）研究蛋白质体内相互作用 193

实验三十九 酶联免疫吸附法（ELISA）筛选药物 197

附录一 蛋白质分子质量标准 201

附录二 硫酸铵饱和度常用表 203

附录三 常用缓冲液的配制 205

附录四 层析填料 208

附录五 细胞破碎方法 215