生物实验室系列 现代分子生物学技术与实验技巧PDF电子书下载

第一章 分子生物学技术概述 1

一、引言 1

二、目的基因的获取 1

三、克隆载体的构建和选择 2

四、载体的转化 2

五、重组子的筛选 3

六、基因表达 4

七、生物工程技术的应用 5

参考文献 6

第二章 核酸提取技术 7

第一节 质粒DNA的提取 7

一、引言 7

二、碱裂解法小量质粒提取所需的仪器、材料及基本步骤 8

三、Promega质粒DNA小量提取试剂盒操作程序 9

四、注意事项 10

五、实验结果说明 10

六、疑难解析 10

第二节 基因组DNA的提取 12

一、引言 12

二、从植物组织提取基因组DNA 13

三、从动物组织提取基因组DNA 14

四、细菌基因组DNA的制备 15

五、用DNA提取试剂盒从全血和组织中提取基因组DNA 15

六、注意事项 17

七、实验结果说明 18

八、疑难解析 18

第三节 RNA的提取 19

一、引言 19

二、实验设计思路和基本步骤 20

三、实验结果说明 24

四、疑难解析 24

参考文献 25

第三章 目的基因的获取及鉴定技术 27

第一节 普通P CR 27

一、普通PCR的基本概念和原理 27

二、普通PCR技术的实验方法 28

三、疑难解析 33

第二节 实时荧光定量PCR 34

一、实时荧光定量PCR的基本概念和原理 34

二、实时荧光定量PCR的定量方法 38

三、荧光定量PCR的实验方法 43

四、荧光定量PCR技术的应用 48

五、疑难解析 54

第三节 环介导恒温扩增法快速检测病原菌 57

一、引言 57

二、环介导恒温核酸扩增的原理 58

三、实验设计思路和基本步骤 60

四、实验结果 68

五、疑难解析 69

六、小结 72

参考文献 74

第四章 载体的构建和鉴定 78

第一节 克隆载体 78

一、pB R322载体 78

二、PUC8——一种Lac选择型质粒 80

三、pGEM3Z——克隆DNA的体外转录 80

四、柯斯质粒载体 81

第二节 表达载体 82

一、原核表达载体 82

二、真核表达载体 84

第三节 载体构建中的关键工具和步骤 90

一、关键工具 90

二、关键步骤 91

第四节 载体构建的应用举例 93

一、实验材料 93

二、实验方法 94

参考文献 98

第五章 细菌转化与细胞转染技术 100

第一节 细菌转化 100

一、基本原理 100

二、实验设计思路和基本步骤 101

三、实验结果及分析 102

四、疑难解析 102

第二节 细胞转染 104

一、基本原理 104

二、实验设计和基本步骤 107

三、实验结果及分析 108

四、疑难解析 109

参考文献 110

第六章 外源基因表达的鉴定 112

第一节 Northern Blot 112

一、引言 112

二、实验设计思路和基本步骤 112

三、实验结果说明 115

四、疑难解析 116

第二节 RT-PCR 116

一、引言 116

二、实验设计思路和基本步骤 117

三、实验结果说明 119

四、疑难解析 119

第三节 Western Blot 120

一、引言 120

二、实验设计思路和基本步骤 120

三、实验结果说明 125

四、疑难解析 125

第四节 ELISA 126

一、引言 126

二、实验设计思路和基本步骤 128

三、实验结果说明 130

四、疑难解析 131

参考文献 132

第七章 报告基因分析 134

第一节 报告基因的定义和种类 134

一、报告基因的定义 134

二、常用的报告基因 134

第二节 应用报告基因分析基因的转录活性 135

一、实验原理 135

二、实验设计和基本步骤 136

三、实验结果分析 137

四、疑难解析 139

第三节 报告基因在动物活体成像中的应用 140

一、实验原理 140

二、实验设计和基本步骤 142

三、实验结果分析 143

四、疑难解析 144

参考文献 145

第八章 差异基因表达谱分析 147

第一节 基于双向电泳技术的蛋白质组学分析 147

一、引言 147

二、实验基本步骤和注意事项 147

三、双向电泳实验结果说明及疑难解析 154

四、质谱数据分析说明及疑难解析 154

五、结语 160

第二节 基因芯片 160

一、引言 160

二、工作原理 161

第三节 基因芯片的制备 163

一、概述 163

二、探针的选择和制备 164

三、基因芯片基片的选择和准备 165

四、基因芯片的制作 166

第四节 基因芯片的检测 168

一、基因芯片的杂交和数据获取 168

二、基因芯片分析常用的软件和数据库 170

第五节 基因芯片的应用 171

一、基因芯片与病原微生物检测 171

二、基因芯片与肿瘤 172

三、基因芯片与药物研发 174

四、结束语 176

参考文献 177

第九章 蛋白质-核酸相互作用技术 178

第一节 凝胶迁移实验 178

一、引言 178

二、实验设计与基本步骤 179

三、实验举例与结果说明 184

四、需要注意的问题 186

第二节 染色质免疫共沉淀技术 187

一、引言 187

二、实验基本步骤 188

三、实验举例 190

四、实验注意事项 191

第三节 RNA沉降 192

一、实验基本原理 192

二、实验基本思路 193

三、实验举例说明 198

参考文献 199

第十章 蛋白质-蛋白质相互作用技术 200

第一节 运用酵母双杂交技术筛选与靶蛋白相互作用的蛋白质 200

一、引言 200

二、实验设备及材料 201

三、实验设计流程 202

四、实验方法 202

五、实验结果说明 208

六、疑难解析 212

第二节 GST沉降 213

一、实验基本原理 213

二、实验基本步骤 213

三、实验举例 216

四、实验注意事项 220

第三节 免疫共沉淀 221

一、引言 221

二、实验设计和基本步骤 222

三、实验结果举例 223

四、需要注意的问题 226

第四节 细胞共定位 226

一、引言 226

二、实验设计和基本步骤 227

三、实验结果举例说明 227

四、实验注意事项 229

参考文献 229

第十一章 微生物体内同源重组技术 231

第一节 传统的大肠杆菌体内同源重组方法（RecA重组系统） 231

一、引言 231

二、利用RecA重组系统构建痢疾杆菌hns基因插入突变体 231

三、RecA重组系统构建突变体的其他方法 234

四、存在的问题和解决方法 235

五、小结 235

第二节 Red/ET重组系统 236

一、引言 236

二、痢疾杆菌酸hns基因缺失突变体的构建 237

三、Red同源重组技术应用策略 239

四、应用Gap-Repair克隆技术构建pBR322-Red载体 241

五、Red/ET重组系统的其他应用 244

六、小结 244

参考文献 244

第十二章 转基因动物技术 246

第一节 转基因动物概述 246

一、转基因动物的概念 246

二、转基因动物的分类 246

三、转基因动物的命名 247

四、转基因动物的基本原理 248

五、转基因动物的安全性和伦理学问题 249

六、转基因动物技术的发展概况 250

第二节 显微注射法制备转基因动物 251

一、仪器设备及材料 251

二、实验动物准备 252

三、转基因动物制备方法 253

四、影响转基因动物效率的因素 256

第三节 利用ES细胞制备转基因动物 257

一、ES细胞的研究历史 257

二、ES细胞的生物学特性 257

三、ES细胞分离培养的基本方法 258

四、ES细胞的遗传修饰 262

五、转基因制备 269

参考文献 270

第十三章 基因打靶技术 271

一、基因打靶技术的原理 271

二、利用同源重组构建基因打靶动物模型的基本步骤 272

三、基因打靶的策略 274

四、基因打靶的生物学意义和应用前景 286

参考文献 287

第十四章 流式细胞术实验方法 291

一、引言 291

二、实验方法 294

三、实验结果分析 299

四、流式细胞分析的质量控制 309

参考文献 311

第十五章 干细胞的分离培养与诱导分化 313

第一节 人胎盘来源间充质干细胞的分离培养与纯化 313

一、引言 313

二、材料、试剂与主要仪器设备 314

三、实验方法 315

四、实验结果 318

五、注意事项 321

第二节 小鼠间充质干细胞的分离培养与纯化 324

一、引言 324

二、骨髓法 325

三、密质骨法 325

第三节 人胚胎干细胞的培养 334

一、引言 334

二、实验材料 335

三、实验方法 335

四、注意事项 339

第四节 CD34＋造血干细胞与CD14＋单核细胞向树突状细胞的诱导分化 339

一、引言 339

二、实验材料与方法 340

三、实验结果 343

四、注意事项 345

参考文献 346

第十六章 小RNA的构造及实验技术 351

第一节 miRNA克隆 351

一、材料与设备 352

二、实验方法 352

三、疑难解析 355

第二节 miRNA Northern Blot 355

一、材料与设备 355

二、实验方法 356

三、疑难解析 357

第三节 miRNA原位杂交 357

一、材料与设备 357

二、实验方法 358

三、疑难解析 359

第四节 基于poly（A）加尾的miRNA RT-PCR 359

一、材料与设备 359

二、实验方法 360

三、疑难解析 361

第五节 miRNA功能研究 362

一、miRNA表达检测 362

二、miRNA功能筛选鉴定 362

三、miRNA靶基因鉴定 364

第六节 siRNA的构造及实验研究 365

一、引言 365

二、如何进行siRNA实验 368

三、常用siRNA实验的基本步骤 371

四、实验结果说明 374

五、疑难解析 376

参考文献 376

第十七章 非编码RNA数据库及在线分析工具介绍 379

一、综合性非编码RNA数据库 379

二、miRNA相关数据库及预测 403

三、rRNA相关数据库及预测 424

四、sRNA相关数据库及预测 432

五、siRNA相关数据库及预测 448

六、tRNA相关数据库及预测 456

七、snoRNA相关数据库及预测 471

参考文献 478