PCR最新技术原理、方法及应用PDF电子书下载

第一章　绪论 1

第一节　PCR发展简史 1

目录 1

第二节　PCR技术的基本原理和操作 2

一、PCR的基本原理 2

二、PCR的基本成分 2

三、PCR的基本操作 4

第三节　PCR的主要应用 5

一、基础研究方面的应用 5

二、PCR在临床上的应用 6

三、在法医学中的应用 7

参考文献 8

第一节 常规RT-PCR 9

一、引言 9

第二章　反转录PCR 9

二、原理 10

三、方法 10

四、注意事项 12

五、应用 15

第二节 一步RT-PCR 18

一、引言 18

二、原理 18

三、方法 19

四、应用 20

第三节 多标志物RT-PCR 21

一、引言 21

二、原理 22

三、方法 22

四、应用 22

三、方法 23

二、原理 23

第四节 反转录-快速PCR 23

一、引言 23

四、应用 24

第五节 反向连接介导的PCR 24

一、引言 24

二、原理 25

三、方法 25

四、应用 26

参考文献 27

第六节　RNA-PCR 29

一、引言 29

二、原理 29

三、直接PCR 29

五、注意事项 31

四、两步PCR 31

六、应用 32

七、小结 34

参考文献 34

第三章　扩增已知序列两侧DNA的PCR 35

第一节　反向PCR 35

一、引言 35

二、基本原理 35

三、材料 35

四、方法 36

五、注意事项 37

六、应用 38

七、小结 41

参考文献 41

二、原理 42

一、引言 42

第二节 锚定PCR 42

三、用连接锚定PCR从基因文库中扩增巴知基因侧翼序列 44

四、用互补锚定PCR直接扩增已知序列侧翼cDNA序列 45

五、问题及对策 49

六、小结 50

参考文献 50

第三节 RACE——cDNA末端的快速扩增 50

一、引言 50

二、RACE基本原理 51

三、实验方案 53

四、RACE的应用 56

五、小结 57

参考文献 57

第四节 连接介导的PCR 57

一、引言 57

三、材料 58

二、原理 58

四、操作步骤 59

五、注意事项 61

六、应用 62

七、小结 65

参考文献 65

第四章　扩增未知DNA序列的PCR 66

第一节 差异显示PCR 66

一、引言 66

二、原理 66

三、方法 67

四、应用 71

五、小结 73

参考文献 74

三、材料与方法 75

二、基本原理 75

第二节 限制性显示PCR 75

一、引言 75

四、注意事项 78

五、应用 79

六、小结 80

参考文献 80

第三节 消减PCR 80

一、引言 80

二、原理 81

三、材料 82

四、方法 83

五、应用 85

一、引言 86

第四节 简并PCR 86

参考文献 86

六、小结 86

二、原理 87

三、材料 87

四、方法 87

五、注意事项 90

六、应用 91

七、小结 93

参考文献 94

第五节　Alu-PCR 95

一、引言 95

二、原理 96

三、材料 96

四、方法 96

五、注意事项 99

六、应用 100

七、小结 103

参考文献 103

第六节 外显子捕获PCR 104

一、引言 104

二、原理 104

三、内部外显子捕获的方法 106

四、3′端外显子捕获的方法 111

五、注意事项 112

六、应用 112

七、小结 113

参考文献 113

第五章　致突变PCR 115

三、材料与方法 116

二、原理 116

一、引言 116

第一节 随机错误掺入构建突变体库 116

四、注意事项 117

五、讨论 117

第二节 构建定点突变序列或重组序列 118

一、引言 118

二、原理 118

三、重叠延伸PCR构建定点突变体 121

四、重组PCR构建定点突变质粒 123

五、大引物PCR构建定点突变体 123

六、注意事项 124

七、讨论 124

第三节 排除野生型DNA的定点突变PCR 125

一、引言 125

二、原理 125

三、材料与方法 126

四、注意事项 128

五、讨论 128

参考文献 130

第六章　定量PCR 131

第一节　定量PCR 131

一、引言 131

二、原理 132

三、方法 138

四、应用 139

参考文献 139

第二节 实时PCR 139

一、引言 139

二、原理 140

三、荧光标记与探针类型 141

四、相对定量和标准曲线定量 145

五、引物设计 146

六、污染的预防和热启动 148

七、实时Q-PCR实验 148

八、实时反转录PCR（实时RT-PCR） 152

九、实时PCR的局限性 157

参考文献 157

第三节 竞争性PCR 159

一、引言 159

二、原理 159

三、方法 163

四、应用 166

五、小结 169

参考文献 169

三、材料和方法 171

二、原理 171

第四节 内部控制的病毒粒子PCR 171

一、引言 171

四、注意事项 173

五、应用 173

六、小结 173

参考文献 173

第七章　免疫PCR 174

第一节 免疫PCR 174

一、引言 174

二、原理 174

三、材料和试剂 176

四、方法 177

五、应用 178

第二节 免疫捕捉PCR 181

一、引言 181

参考文献 181

六、小结 181

二、基本原理 182

三、材料 182

四、方法 183

五、注意事项 185

六、应用 185

七、小结 187

参考文献 187

第三节 PCR-ELISA 188

一、引言 188

二、原理 189

三、材料 190

四、方法 190

六、应用 191

五、注意事项 191

七、小结 194

参考文献 194

第四节 原位PCR 194

一、引言 194

二、基本原理 195

三、原位PCR方法分类及其设计方案 195

四、原位PCR基本步骤 197

五、原位PCR方法的选择 199

六、原位PCR操作注意事项 200

七、原位PCR存在的问题和结果分析 201

八、原位PCR的应用 202

九、原位PCR操作程序示例 203

十、小结 206

参考文献 206

三、方法 207

二、基本原理 207

第八章　重组和表达PCR 207

一、引言 207

第一节 重组PCR 207

四、应用 209

五、小结 213

参考文献 213

第二节 不依赖连接反应的克隆PCR 214

一、引言 214

二、基本原理 214

三、材料 216

四、方法 217

五、注意事项 217

六、应用 217

参考文献 219

三、融合PCR的具体操作步骤 220

二、融合PCR的原理 220

第三节 融合PCR 220

一、引言 220

四、融合PCR的应用 221

五、融合PCR操作方法的注意事项 224

六、结语 225

参考文献 225

第四节　表达PCR 226

一、引言 226

二、基本原理 226

三、材料 227

四、方法 227

五、应用 229

参考文献 229

一、使用增强剂改善高GC含量DNA模板的PCR扩增 231

第一节 高GC含量DNA的PCR扩增 231

第九章　其他PCR方法 231

二、NaOH对模板进行预处理改善高GC含量DNA的PCR扩增 235

三、利用高温PCR体系改善高GC含量DNA模板的PCR扩增 236

四、应用 237

五、小结 237

参考文献 238

第二节　长片段PCR 238

一、引言 238

二、原理 239

三、材料 239

四、方法 240

五、注意事项 241

六、应用 243

第三节 不对称PCR 245

一、引言 245

七、小结 245

参考文献 245

二、引物浓度不对称PCR 246

三、热（引物长度）不对称PCR 248

四、应用 252

五、小结 253

参考文献 253

第四节 降落PCR 254

一、引言 254

二、原理 254

三、材料 254

四、方法 255

五、降落PCR与常规PCR的比较 255

六、应用 257

七、小结 257

二、原理 258

一、引言 258

参考文献 258

第五节 巢式PCR 258

三、材料 259

四、方法 259

五、注意事项 260

六、应用 260

七、小结 260

参考文献 260

第十章　PCR在基因分型中的应用 261

第一节　任意引物PCR 261

一、引言 261

二、任意引物PCR的基本原理及技术特点 261

三、AP-PCR方法 262

四、RAP-PCR方法 263

六、应用 264

五、注意事项 264

七、小结 268

参考文献 268

第二节　广谱PCR 269

一、广谱PCR简介 269

二、广谱PCR模板制备方法 271

三、引物设计 272

四、应用举例——HPV广谱PCR检测 275

参考文献 276

第三节 共同区PCR 278

一、引言 278

二、基本原理 278

三、材料 279

四、方法 280

六、应用 282

五、注意事项 282

七、小结 284

参考文献 284

第四节 两对交叉引物PCR 285

一、引言 285

二、基本原理 286

三、材料 286

四、方法 286

五、注意事项 287

六、应用 287

七、小结 287

参考文献 287

第五节 REP-PCR 288

一、引言 288

二、基本原理 288

四、方法 289

三、材料 289

五、注意事项 290

六、应用 291

七、小结 293

参考文献 293

第六节 稀有限制性位点PCR 294

一、引言 294

二、原理 295

三、材料 297

四、方法 297

五、注意事项 298

六、应用 298

七、小结 299

参考文献 299

二、基本原理 300

三、应用 300

一、引言 300

第七节 序列特异性引物PCR 300

四、注意事项 303

五、在其他方面的应用 304

六、小结 305

参考文献 305

第八节 简单序列重复区间PCR 306

一、引言 306

二、原理 306

三、材料 306

四、方法 307

五、注意事项 308

六、应用 308

参考文献 309

七、小结 309

第十一章　PCR在法医学中的应用 310

第一节 短串联重复序列的PCR 310

一、引言 310

二、原理 311

三、材料 312

四、方法 312

五、注意事项 316

六、应用 316

七、小结 317

参考文献 318

第二节 小卫星可重复序列PCR 319

一、引言 319

二、原理 319

三、方法 320

四、应用 323

五、小结 324

参考文献 325

第三节 全基因组PCR 326

一、引言 326

二、全基因组PCR的种类 326

三、基因组DNA模板的制备 331

四、不同WGA方法的比较 331

五、WGA的产物分析及应用 332

六、小结 334

参考文献 334

三、方法 336

一、引言 336

二、原理 336

第一节 多重PCR 336

第十二章　PCR在遗传病诊断中的应用 336

四、应用 339

五、小结 342

参考文献 342

第二节 等位基因特异PCR 343

一、引言 343

二、原理 344

三、材料 345

四、方法 345

五、注意事项 345

六、对等位基因特异PCR的改进 346

七、应用 346

参考文献 347

八、小结 347

第三节　缺口PCR 348

一、引言 348

二、基本原理 348

三、材料 349

四、操作步骤 349

五、注意事项 350

六、应用 350

七、小结 350

参考文献 350

第十三章　PCR在癌症诊断中的应用 352

第一节 BCR-ABL PCR 352

一、引言 352

二、应用 354

三、小结 359

参考文献 360

一、引言 361

第二节 锅柄式PCR 361

二、原理 362

三、材料 362

四、操作步骤 362

五、应用 365

参考文献 365

第三节 杂合性缺失PCR 367

一、引言 367

二、基本原理 367

三、材料 367

四、方法 368

五、注意事项 368

六、应用 369

二、基本原理 370

一、引言 370

第四节 单细胞PCR 370

参考文献 370

七、小结 370

三、材料和方法 371

四、注意事项 375

五、应用 375

六、小结 376

参考文献 376

第十四章　PCR与其他方法联合应用 378

第一节 限制性片段长度多态性PCR 378

一、原理 378

二、材料 378

三、操作方法 379

四、注意事项 380

五、应用 380

一、原理 381

第二节　PCR偶联连接酶链式反应 381

二、材料 382

三、方法 383

四、注意事项 384

五、应用 385

第三节　PCR-单链构象多态性 386

一、原理 386

二、材料 386

三、方法 387

四、注意事项 388

五、应用 390

第四节　PCR-变性梯度凝胶电泳 390

一、原理 390

二、材料 391

三、操作方法 391

五、应用 393

四、注意事项 393

第五节 序列特异性寡核苷酸多态性PCR 394

一、原理 394

二、试剂 394

三、方法 395

四、注意事项 399

五、应用 399

第六节　PCR测序法 400

一、直接测序法 400

二、循环测序方法 401

三、全自动DNA测序 403

四、应用 404

参考文献 405

索引 407