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概述 1

第一章 微生物实验的无菌环境和操作 5

第一节 微生物实验的无菌环境 5

一、无菌室 5

二、超净工作台 6

三、环境无菌检测的方法 8

第二节 微生物实验的无菌操作 14

一、无菌操作前的准备工作 14

二、灭菌和消毒方法 14

第二章 微生物实验的重要仪器 23

一、普通光学显微镜 23

二、高压蒸汽灭菌锅 24

三、移液器 25

四、电子天平 27

五、pH计 28

六、分光光度计 29

七、超净工作台 30

八、恒温培养箱 30

九、摇瓶培养设备 30

十、冰箱及超低温冰箱 31

十一、离心机 32

十二、真空冷冻干燥机 33

十三、PCR仪 34

十四、厌氧培养箱 35

十五、生物安全柜 36

十六、电热恒温干燥箱 37

第三章 显微镜使用和形态学观察 39

实验一 普通光学显微镜的使用 41

实验二 暗视野显微镜的使用 47

实验三 相差显微镜的使用 50

实验四 微分干涉差显微镜的使用 53

实验五 荧光显微镜的使用 56

实验六 微生物大小测定 59

实验七 微生物的形态观察 63

实验八 微生物染色技术 66

第四章 微生物的培养、分离及生长 72

实验九 培养基的配制和高压蒸汽灭菌 73

实验十 微生物的接种分离和纯培养 78

实验十一 亨盖特法厌氧培养基的制备 82

实验十二 厌氧微生物的分离培养 86

实验十三 噬菌体的分离纯化和效价测定 90

实验十四 微生物的计数——血细胞计数法 93

实验十五 微生物的计数——平板活菌计数法 96

实验十六 比浊法测定细菌生长曲线 99

实验十七 干重和湿重法测定微生物的生长量 102

第五章 微生物遗传学技术 104

实验十八 微生物的诱变和突变株的筛选 105

实验十九 营养缺陷型突变株的选育 108

实验二十 菌种保藏技术 112

第六章 分子生物学技术 119

一、目的基因的获得 119

二、载体系统的选择 119

三、目的基因与载体的重组 119

四、重组载体引入受体细胞 120

五、重组受体细胞的筛选和鉴定 120

六、目的基因在受体细胞内的表达 120

实验二十一 细菌总DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳 121

实验二十二 基本PCR技术扩增DNA片段 124

实验二十三 碱裂解法和试剂盒法提取质粒DNA 126

实验二十四 DNA分子的限制性内切酶消化、片段纯化、连接 130

实验二十五 感受态细胞的制备 133

实验二十六 重组DNA转化宿主细胞 135

第七章 微生物检测和鉴定 137

实验二十七 微生物的营养及生理生化反应 138

实验二十八 应用API-20E细菌鉴定系统鉴定肠杆菌科和部分其他革兰氏阴性杆菌 142

实验二十九 以细菌16S rRNA序列和真菌ITS序列为基础的菌种鉴定 146

第八章 微生物技术的应用 150

实验三十 土壤中纤维素分解菌的分离 151

实验三十一 食品样品中菌落总数的测定 159

实验三十二 食品样品中大肠菌群MPN值的测定 161

实验三十三 原生质体的制备 167

实验三十四 原生质体的融合 169

附录Ⅰ 常用染色液的配制 171

附录Ⅱ 常用培养基配方 173

附录Ⅲ 常用缓冲液的配制 176

参考文献 178