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第一部分 生物化学实验技术基础 1

第1章 生物化学实验须知 1

1.1生物化学实验的目的 1

1.2生化实验室实验规则 1

1.3生化实验室安全及防护知识 2

1.3.1实验室安全知识 2

1.3.2实验室急救 3

1.4实验误差与数据处理 4

1.4.1系统误差 4

1.4.2偶然误差 4

1.4.3操作错误 5

1.4.4数据处理 5

1.5实验报告 6

第2章 分光光度技术 7

2.1分光光度技术原理 7

2.1.1光谱 7

2.1.2光吸收定律 8

2.2分光光度计的构造 10

2.2.1光源 10

2.2.2单色光器 10

2.2.3比色皿 12

2.2.4检测器 12

2.3 7220型分光光度计 13

2.3.1仪器外部结构及各部分名称和功能 13

2.3.2仪器使用方法 15

2.3.3注意事项 15

2.4分光光度技术在生化试验技术中的应用 16

第3章 离心技术 17

3.1离心技术的基本原理 17

3.2离心机的类型和主要构造 18

3.2.1离心机的类型 18

3.2.2离心机的主要构造 19

3.3离心方法的选择 21

3.3.1差速离心 21

3.3.2密度梯度离心 21

3.4离心条件的确定 22

3.4.1离心力 22

3.4.2离心时间 22

3.4.3温度 23

3.4.4 pH值 23

第4章 色谱技术 24

4.1色谱技术原理 24

4.2色谱的基本概念 24

4.2.1固定相与流动相 24

4.2.2分配系数与迁移率 24

4.2.3分离度（分辨率） 25

4.2.4交换容量（或操作容量） 26

4.2.5正相色谱与反相色谱 26

4.3色谱技术的分类 26

4.3.1按流动相-固定相分类 26

4.3.2按实验方法分类 27

4.3.3按分离的机制分类 27

4.4常用的几种色谱技术 28

4.4.1纸色谱 28

4.4.2薄层色谱 30

4.4.3离子交换色谱 32

4.4.4凝胶色谱 35

4.4.5高效液相色谱 41

4.4.6气相色谱 49

4.4.7亲和色谱 51

第5章 电泳技术 60

5.1电泳的基本原理 60

5.1.1电荷的来源 60

5.1.2泳动度 60

5.1.3影响电泳的主要因素 61

5.2电泳的分类 62

5.2.1按分离原理分类 62

5.2.2按分离目的分类 63

5.2.3按用途分类 63

5.3常用的电泳技术 63

5.3.1纸电泳 63

5.3.2醋酸纤维薄膜电泳 65

5.3.3琼脂糖凝胶电泳 66

5.3.4聚丙烯酰胺凝胶电泳 67

5.3.5毛细管电泳 72

5.3.6免疫电泳技术 73

5.3.7等电聚焦电泳 74

5.3.8双向凝胶电泳 77

第二部分 生物化学实验 79

第6章 生物化学基础实验 79

实验1 糖的颜色反应和还原性鉴定 79

Ⅰ.莫氏（Molisch）反应鉴定糖 79

Ⅱ.塞氏（Seliwanoff）反应鉴定酮糖 81

Ⅲ.杜氏（Tollen）反应鉴定戊糖 82

Ⅳ.糖的还原性鉴定 82

实验2植物组织中可溶性糖含量测定——蒽酮比色法 84

实验3还原糖和总糖的测定——3，5-二硝基水杨酸法 87

实验4血糖的定量测定 90

Ⅰ.邻甲苯胺法测定血糖含量 90

Ⅱ.葡萄糖氧化酶法测定血糖含量（GOD-PAP法） 92

实验5淀粉的提取、性质和含量测定 93

实验6肝糖原的提取和鉴定 96

实验7粗脂肪的含量测定——索氏抽提法 97

实验8油脂的化学性质 99

Ⅰ.油脂皂化值的测定 99

Ⅱ.油脂酸值的测定 101

Ⅲ.油脂碘值的测定 101

实验9卵磷脂的提取及鉴定 104

实验10血清总胆固醇的定量测定 105

Ⅰ.磷硫铁法测定血清胆固醇 106

Ⅱ.Abell法测定血清胆固醇 107

Ⅲ.胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇 108

实验11蛋白质的颜色反应和沉淀作用 110

Ⅰ.蛋白质的颜色反应 110

Ⅱ.蛋白质的沉淀反应 113

实验12蛋白质浓度测定（微量凯氏定氮法） 115

实验13蛋白质含量测定——紫外吸收法 117

实验14蛋白质的含量测定（二）——双缩脲法、考马斯亮蓝结合法、BCA法 119

Ⅰ.双缩脲法测定蛋白质浓度 119

Ⅱ.考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 121

Ⅲ.BCA法测定蛋白质含量 122

实验15非蛋白氮（NPN）的测定 124

实验16 DNP、DNS-氨基酸的制备和鉴定 126

实验17肽的序列分析——PTH法 130

实验18醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白 132

实验19 SDS-聚丙烯酰胺电泳法测定蛋白质的相对分子质量 134

实验20血清白蛋白的分离与纯化 138

实验21葡聚糖凝胶柱色谱分离纯化蛋白质 140

实验22火箭免疫电泳 143

实验23核酸的含量测定 144

实验24 DNA琼脂糖凝胶电泳 147

实验25动物肝脏中DNA的提取与紫外检测 148

实验26 CTAB法提取植物基因组DNA 150

实验27酵母RNA的提取与鉴定 152

实验28质粒DNA的提取 153

实验29肝脏中谷丙转氨酶的活力测定 155

实验30过氧化氢酶米氏常数的测定 157

实验31测定多种因素对唾液淀粉酶活力的影响 159

实验32猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活力测定 161

实验33多酚氧化酶的制备和化学性质 163

实验34维生素A的定性测定 164

实验35维生素B1的定性测定 165

实验36维生素C的定量测定（磷钼酸法） 167

第7章 综合应用型实验 170

实验37溶菌酶的提纯和活力测定 170

实验38芦荟多糖的制备和含量测定 172

实验39发酵过程中的无机磷和ATP检测 174

实验40胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 176

实验41叶绿体色素的提取、分离和含量测定 178

实验42用正交法测定几种因素对牛胰蛋白水解酶活力的影响 180

实验43 DNA聚合酶链式反应及产物鉴定（PCR） 184

实验44气相色谱法检测果蔬中有机氯类和拟除虫菊酯类农药 186

实验45质粒DNA的提取、酶切及鉴定 189

实验46汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定 192

第8章 设计性实验 195

实验47果皮废弃物中果胶的制备 195

实验48茶叶中茶多酚物质的提取与含量测定 196

实验49蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定 197

附录 198

附录1常用缓冲液的配制 198

附录2硫酸铵饱和度常用表 203

附录3常见蛋白质相对分子质量参考值（单位：Da） 204

附录4色谱法常用数据及性质 205

附录5各类物质常用的薄层显色剂 208

附录6凝胶染料的种类及特点 209

参考文献 210