基因工程实验 Annexin V-EGFP 重组蛋白质的克隆表达与检测PDF电子书下载

第一章Annexin V -EGFP基因克隆与表达载体构建 3

实验1 Annexin V表达序列检索 3

1.实验目的 3

2.实验原理 3

3.实验方法与结果 4

实验2 Annexin V -EGFP基因克隆设计 8

1.实验目的 8

2.实验原理 8

3.实验方法 16

实验3哺乳动物细胞中提取RNA 17

1.实验目的 17

2.实验原理（异硫氰酸胍酚氯仿一步法） 17

3.实验仪器与器材 17

4.试剂与配制 18

5.实验步骤 18

6.实验结果分析与讨论 20

7.思考题 21

实验4逆转录PCR与产物鉴定 22

1.实验目的 22

2.实验原理 22

3.实验方法 22

4.实验步骤 26

5.实验结果与讨论 26

实验5 PCR产物的酶切与克隆 29

1.实验目的 29

2.实验原理 29

3.实验仪器与器材 30

4.试剂与配制 30

5.实验步骤 30

实验6克隆鉴定 38

1.实验目的 38

2.实验原理 38

3.实验仪器与器材 39

4.试剂与配制 39

5.实验步骤 39

实验7大肠杆菌感受态的制备 40

1.实验目的与要求 40

2.实验原理 40

3.实验仪器与器材 40

4.试剂与配制 40

5.实验步骤 40

参考文献 41

第二章Annexin V -EGFP质粒的扩增与提取 45

实验8 Annexin V -EGFP质粒的扩增 45

1.实验目的 45

2.实验仪器与器材 45

3.试剂与配制 45

4.实验原理 45

5.实验步骤 45

实验9 Annexin V-EGFP质粒的提取 47

1.实验目的 47

2.实验原理与方法 47

3.实验仪器与器材 48

4.试剂与配制 48

5.实验步骤 48

6.质粒提取常见问题 49

参考文献 55

第三章Annexin V -EGFP基因的表达与纯化 59

实验10 Annexin V -EGFP基因的表达 59

1.实验目的 60

2.实验原理 60

3.实验仪器与器材 61

4.试剂与配制 61

5.实验步骤 61

6.注意事项 62

7.讨论 62

8.思考题 62

实验11 Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白His6-EGFP-AnnexinV 63

1.实验目的 63

2.实验原理 64

3.实验仪器与器材 65

4.试剂与配制 65

5.实验方法 65

6.注意事项 66

7.讨论 66

8.思考题 66

参考文献 66

第四章Annexin V -EGFP重组蛋白质的应用检测 71

实验12 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 71

1.实验目的 71

2.实验原理 71

3.实验仪器与器材 73

4.试剂与配制 73

5.实验方法 74

6.注意事项 75

7.讨论 76

8.思考题 76

实验13蛋白质转移印迹法检测Annexin V -EGFP基因表达 77

1.实验目的 77

2.实验原理 77

3.实验试剂 78

4.实验仪器 79

5.实验步骤 79

6.注意事项 81

7.讨论 81

8.思考题 82

实验14流式细胞仪检测凋亡细胞 83

1.实验目的 83

2.实验原理 83

3.实验试剂 85

4.实验仪器 86

5.实验步骤 86

6.注意事项 87

7.扩展 87

8.思考题 88

实验15荧光显微镜检测 89

1.实验目的 89

2.实验原理 89

3.实验试剂 90

4.实验仪器 90

5.实验步骤 90

6.注意事项 91

7.扩展 92

8.思考题 92

参考文献 92

附录 94

1.氨基酸密码子表 94

2.酶切位点保护碱基表 94

3.SDS-PAGE分离胶配方表 97

4.SDS-PAGE浓缩胶配方表 98

5.网络资源 99